乙酸酐封闭羟基怎么办

苯环上连着一个羟基，相邻的是一个羧基，这个物质叫做邻羟基苯甲酸或2-羟基苯甲酸，俗称水杨酸。

CH3COOOCCH3就是乙酸酐，简称乙酐，与水杨酸发生的反应生成阿司匹林（学名乙酰水杨酸）和甲酸（HCOOH）：

水杨酸+乙酸酐________乙酰水杨酸+甲酸，

乙酰水杨酸分子式C9H8O4分子量180.15。学名乙酰水杨酸。白色针状或结晶性粉末，无臭、略有酸味。熔点135℃～138℃，密度1.35g/cm3。在干燥空气中稳定，遇潮会缓缓水解为水杨酸和醋酸。微溶于水，溶于乙醇、乙醚、氯仿，在沸水中分解，在氢氧化钠和碳酸钠溶液中分解。用作消炎药、止痛药和解热药。可用少量硫酸为催化剂，使乙酸酐与水杨酸作用制得。结构见图。

第一步----去封闭（Deblocking）,用三氯乙酸（TCA）去除CPG所连核苷上的DMT,以暴露5’羟基，供下一步缩合。此步需要注意TCA为一较强的酸，可能会有脱嘌呤作用,故TCA与寡核苷酸接触时间不要超过规定时间。

第二步----活化（Activation）,在缩合之前，单体与四唑混合并进入合成柱，此时四唑提供一个质子给3’磷酸上二异丙胺基的N原子，质子化的二异丙胺是一个良好的游离基团，与四唑形成亚磷酰胺四唑这种活性中间体。此步四唑过量保证了单体活化充分。

第三步----连接（Coupling），亚磷酰胺四唑与CPG所连的核苷酸碰撞时，与其5’羟基发生亲核反应，发生缩合并脱掉四唑，合成的寡核苷酸链延长一个。此步单体相对于CPG所连核苷酸上5’-羟基过量保证了连接的高效率。

第四步----盖帽（Capping）,为了防止未反应的与CPG相连的5’羟基在随后的循环中被延长，需要在连接反应充分进行之后使之封闭，常用乙酰化来封闭此羟基。临用前混合乙酸酐和N-甲基咪唑等形成一活性很强的乙酰化试剂，与少量未参与连接反应的5’羟基缩合成酯键。由于须封闭的羟基少且乙酰化试剂活性高和充分过量，此步反应速度很快，几秒钟即足够。太长的盖帽时间有在非预期位置发生乙酰化反应的可能，且增加乙酸酐与痕量水形成酸攻击新生成的亚磷酯键的危险性。

第五步----氧化（Oxidation），连接反应后新加上的核苷酸通过亚磷酯键（磷为三价）与CPG上相连的寡核苷酸链连接，此亚磷酯键不稳定，易被酸、碱水解，因此需将此处三价磷氧化为五价的磷。常用的氧化剂为碘的四氢呋喃溶液。此步反应速度亦很快。应注意最后一个循环时，氧化步骤不可省略。此外亦可用其他氧化剂来完成氧化，从而得到各种符合实验需要的寡核苷酸。

循环上述一至五步，寡核苷酸链即可延伸至所需长度时即可完成。

葡萄糖可以发生分子内的半缩醛反应，反应完有一个苷羟基。

2，二甲基亚砜可在活化剂存在下将醇氧化为醛。比如二甲基亚砜-二环己基碳二亚胺（DMSO-DCC）、二甲基亚砜-乙酸酐（DMSO-Ac2O）等，这类氧化剂的选择性较高，反应活性也高，但需低温下进行。

3，二氧化锰、异丙醇铝-丙酮也是常有的氧化剂。

4，此外，还有以氧气来氧化的。

DNA 化学合成原理

采用固相亚磷酰胺三酯法合成 DNA 片段，它具有高效、快速的偶联以及起始反应物稳定的特点。亚磷酰胺三酯法是将 DNA 固定在固相载体上完成 DNA 链的合成的，合成的方向是由待合成引物的 3' 端向 5' 端合成的，相邻的核苷酸通过 3' → 5' 磷酸二酯键连接，具体反应步骤如下：

第一步：将预先连接在固相载体 CPG 上的活性基团被保护的核苷酸与三氯乙酸反应，脱去其 5'- 羟基的保护基团 DMT ，获得游离的 5'- 羟基。

第二步：亚磷酰胺保护的核苷酸单体，与活化剂四氮唑混合，得到核苷亚磷酸活化中间体，它的 3' 端被活化，与 CPG 载体上连接碱基的 5'- 羟基发生缩合反应。

第三步：带帽 (capping) 反应，缩合反应中会有少量 5'- 羟基没有参加反应，用乙酸酐和 1- 甲基咪唑封闭 5'- 羟基，使其不能再继续发生反应，这种短片段在纯化时可以分离去除。

第四步：在氧化剂碘的作用下，亚磷酰形式转变为更稳定的磷酸三酯。

经过以上四个步骤，一个脱氧核苷酸被连接到固相载体的核苷酸上。再以三氯乙酸脱去它的 5'- 羟基上的保护基团 DMT ，重复以上步骤，直到所有要求合成的碱基被接上去。

合成反应原理图示如下：

http://www.biosune.com/Files/cc1.JPG

首先，酸酐确实是某含氧酸（的一分子或几分子）脱去一分子水或几分子水后所剩下的部分，但是除此以外是有限定的。因为这个词是一类描述性的概念，是没有严格定义的，所以我们需要根据它常用的意义来解读。

酸酐的概念由酸本身衍生出来，意义是“酸的脱水物”，因此酸酐不能是另一种（羟基）酸，它也必须能和水反应得到原来的酸【“原来”-划重点】。

从微观结构来看，酸酐一定是要脱去结构里所有的酸性羟基所对应的水，从而不显质子酸性。另一方面，它不应该脱去非酸性羟基所对应的水。酸性羟基的概念很重要，在此可认为是水溶液中电离出氢离子的羟基。

因此在明确了概念之后，题主的问题就很容易解答了：

1、一分子含氧酸脱去一分子水，这个一分子水是从微观上对“一当量水”的描述。对于分子内部直接可以脱去一分子水的含氧酸（例如硫酸H2SO4），一分子酸形成一分子酸酐当然是脱去一分子水。注意：微观和宏观的概念不可混淆；例如1mol或者1g酸脱去一分子水，这是没有意义的。

2、脱去的水的当量数（也就是一当量的酸脱去几当量的水），是由酸的分子中的酸性羟基的数量决定的。当一分子酸的组成可以脱去一分子水时，就直接脱水得到酸酐。当一分子酸的组成不能脱去一分子水的时候，就要几个分子脱去所有酸性羟基的水。

【例：硝酸HNO3需要两分子酸在一起方能脱去一分子水，形成酸酐N2O5；磷酸H3PO4需要两分子酸在一起脱去三分子水才能形成酸酐P2O5，因为一分子磷酸分子内脱水形成的是HPO3偏磷酸，是一种含氧酸。】

【例：两分子乙酸脱水，得到CH3CO-O-COCH3，化学品正名为乙酸酐，即乙酸的双分子酸酐，其得“乙酸酐”的正名是因为脱去水中的氢都来自于酸性羟基；一分子乙酸脱水，得到CH2=C=O，化学品正名为乙烯酮。乙烯酮也是乙酸的酸酐，称为乙酸的单分子酸酐，其中脱去水的羟基来自于酸的酸性羟基，另一个氢来自于甲基单元，这种脱水法也是允许的。】

注意：一个含氧酸的分子如果脱去了全部或部分的水，但其中的某些水来自于非酸性羟基或是其他的含氧基团，这样得到的产物不是酸酐。

【例：丁酸CH3CH2CH2COOH分子间脱水，得到丁酸酐CH3CH2CH2CO-O-COCH2CH2CH3也可以分子内脱水得到丁烯酮CH3CH2-CH=C=O，这也是丁酸的酸酐；但是再（形式上）脱去一分子水得到HC三C-C三CH丁二炔，这就不是丁酸的酸酐了。本例里脱去的水里的氧来自于酮羰基的氧。】

【例：乳酸CH3CHOHCOOH，如果两分子乳酸脱去三分子水，形成CH2=CH-CO-O-CO-CH=CH2，这就不是乳酸的酸酐了，这是丙烯酸的酸酐。本例脱去了非酸性羟基的水。】

乙酸酐不先水解，因为乙酸酐是个很强的脱水剂，所以会从水杨酸的羟基上上去一个氢原子，生成产物乙酸。

至于乙酸，能力太弱，产率太低，而且反应条件太高，所以不要。

至于酸酐，就是加个水就能得到相应的酸，比方SO3是硫酸的酸酐，N2O5是硝酸的酸酐。

苯环上的羟基脱氢，醋酸的羧基脱羟基，

和醇与羧酸的反应一样。

两个羟基都反应:

HO-C6H4-OH + 2CH3COOH = CH3-COO-C6H4-OOCCH3 + 2H2O