什么液体稀释苯酚能降低酸性?
下午好,三乙醇胺、聚醚胺或者n,n-二甲基苯胺等胺类溶剂都可减少苯酚带来的腐蚀作为缓冲ph,这些水油两溶的有机溶剂也常见于汽车防冻液用于防止乙二醇酸化的草酸对金属表面造成损害,在热水中也可加入一些碱性磷酸盐来缓蚀。
配制方法
1. 使用原料:大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。
2. 操作注意:苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。
3. 苯酚平衡:因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上,苯酚平衡操作方法如下:
① 液化苯酚应贮存于-20℃,此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。
② 加入羟基喹啉(8-Quinolinol)至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。
③ 加入等体积的1M Tris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。
④ 重复操作步骤③。
⑤ 加入等体积的0.1M Tris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。
⑥ 重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相。
⑦ 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
⑧ 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。
②取适量苯酚溶于适量氢氧化钠溶液,再向生成的苯酚溶液中加入醋酸溶液,可以看到有苯酚重新析出,说明苯酚酸性比醋酸弱,而醋酸是弱酸,则苯酚一定是弱酸。
在试管中取2mL苯酚溶液,滴加石蕊试剂,观察现象。
2.
在三支试管中分别取少量苯酚固体,并分别向其中加入2—3毫升氢氧化钠溶液、2—3mL碳酸钠溶液、2—3mL碳酸氢钠溶液,充分振荡,观察并比较现象(注意加盐溶液的试管中是否有气泡。)
3.
在试管中取2mL氢氧化钠溶液,滴加2—3滴酚酞试液,再加入少量苯酚固体,观察颜色变化。
交流现象1.
苯酚不能使石蕊变红。
2.
苯酚固体易溶于氢氧化钠溶液和碳酸钠溶液,无气泡产生;难溶于碳酸氢钠溶液。
3.
苯酚使红色溶液(滴有酚酞试液的氢氧化钠溶液)逐渐变浅。
实验结论苯酚具有弱酸性,酸性介于碳酸和碳酸氢根离子之间。由于苯酚的酸性太弱,以至于不能使石蕊试剂变红。(石蕊试液的变色范围是:pH值5~8)
演示实验:在刚才制取的苯酚溶液中边振荡边逐滴加入氢氧化钠溶液,至恰好澄清,生成物为苯酚钠。再持续通入二氧化碳气体,溶液又变浑浊(二氧化碳与水生成碳酸,碳酸与苯酚钠反应生成苯酚与碳酸氢钠)。综上所述,根据强酸制弱酸的原理可知酸性:
H2CO3
>
>
NaHCO3
。亦可知碳酸的酸性比苯酚的酸性强。
苯酚是最简单的酚。所谓酚,就是羟基取代苯环上的氢原子后的生成物。苯酚是无色针状晶体,在空气中会逐渐氧化成粉红色。它的熔点是43摄氏度,只能微溶于水,放入水中会形成乳浊液,但在65摄氏度时,能和水以任意比例互溶。
苯酚分子里有羟基,所以苯酚在水溶液或乳浊液里能电离出氢离子和苯酚根离子,显示弱酸性,但这酸性比碳酸还要弱。它和金属钠发生反应,放出氢气,生成苯酚钠,它也可以和碱类,如氢氧化钠发生反应,生成苯酚钠。
如果在盛有苯酚溶液的试管里,加入过量的溴,很快就有白色沉淀生成,这沉淀叫做三溴苯酚。这里,既不用液态溴,也不用催化剂,取代的氢原子一下子就是三个,说明苯酚和溴的反应很容易发生。
苯酚遇到三价的铁盐时,会呈现紫色,这是苯酚的特征反应。
所谓活化就是在烘箱里面105℃烘半小时到四十分钟左右。为了达到更好的脱色效果,可以根据具体情况选择活性炭粉末或者活性炭颗粒。一般选择粉末,当溶液中需要保留的物质也会被活性炭时或者是容易发生穿滤时可以选择颗粒。必要时可以不加热,多加活性炭后(溶液体积的5%以上)振摇即可。我个人认为影响活性炭脱色效果最重要的就是pH值。尤其是碱溶性物质(如碱溶性多糖等)的溶液脱色,最好将溶液pH值调至5-6或3-4。