请问您75%乙醇清洗DNA沉淀的机理是什么呢 ?
littlehong 说得对。75%乙醇清洗DNA的目的是脱盐的。
其机理如下:75%乙醇中含有25%的水,这部分水可以溶解和DNA沉淀中混有的、DNA沉淀前加入的钾盐(或钠盐),但同时也会溶解(损失)少部分DNA(盐离子比DNA更易溶于水中)。为了减少DNA损失,所以用含量较高的乙醇溶液(DNA不溶于乙醇)。
化学实验洗涤有机物污迹:沿玻璃棒向漏斗中的沉淀物上注入蒸馏水至水浸没沉淀,静置待水自然流下后,再重复2~3次。
注意点:在洗涤过程中不能搅拌,因为滤纸已经很润湿,如果搅拌就很容易搅破滤纸,这样晶体会淋失,从而造成晶体损失。
洗涤的目的:若滤渣是所需的物质,则洗涤的目的是:除去晶体表面的可溶性杂质,得到更纯净的晶体。若滤液是所需的物质,则洗涤的目的是:洗涤过滤所得到的残渣,把有用的物质,如目标产物尽可能洗出来。
关于洗涤的试剂
经常可以用以下几种:蒸馏水;冷水、热水;有机溶剂,如酒精、丙酮等;该物质的饱和溶液。一般经常用的洗涤剂是蒸馏水,如果用其他的洗涤剂,必有其“独特”之处。
1、用冷水
适用范围:产物不溶于水;目的:除去晶体表面附着的杂质;可适当降低晶体因为溶解而造成损失。
2、热水洗
适用范围:有特殊的物质其溶解度随温度升高而下降的,可以采用热蒸馏水洗涤。
3、酒精洗
适用范围—晶体易溶于水,难溶于酒精;酒精洗涤目的—减少晶体溶解;利用乙醇的挥发性除去晶体表面的水分。
4、酒精—水的混合物洗
适用范围—晶体在水中溶,在乙醇中难溶。
5、滤液洗
适用范围—过滤时冲洗烧杯内残留晶体。
滤液洗涤——减少晶体溶解 ,常用于晶体的转移。
80%乙醇要现配主要是因为乙醇会挥发,配好后分装成数管,每次用一管的操作,理论上没什么问题。但实际操作下来,就会发现有点不合理,例如配好后分装成多少管?数量少了没必要,数量多了,操作的时间长了,乙醇也是一直在挥发的呀。还有,每次提取如果只是提一个样品的话那还好,数量多的话,那些分装使用的管就显得很麻烦了。