总酚含量测定容易受到什么物质干扰

1．干扰物质

此法是在Folin-酚法的基础上引入双缩脲试剂，因此凡干扰双缩脲反应的基团，如-CO-NH2,-CH2-NH2,-CS-NH2以及在性质上是氨基酸或肽的缓冲剂，如Tris缓冲剂以及蔗糖，硫酸铵，巯基化合物均可干扰Folin-酚反应。此外，所测的蛋白质样品中，若含有酚类及柠檬酸，均对此反应有干扰作用。而浓度较低的尿素（约0.5%左右），胍（0.5%左右），硫酸钠（1%），硝酸钠（1%），三氯乙酸（0.5%），乙醇（5%），乙醚（5%），丙酮（0.5%）对显色无影响，这些物质在所测样品中含量较高时，则需做校正曲线。若所测的样品中含硫酸铵，则需增加碳酸钠—氢氧化钠浓度即可显色测定。若样品酸度较高，也需提高碳酸钠—氢氧化钠浓度1—2倍，这样即可纠正显色后色浅的弊病。

2．控制时间

因Lowry反应的显色随时间不断加深，因此各项操作必须精确控制时间。即第1支试管加入2.0ml碱性硫酸铜试剂后，开始计时，1分钟后，第2支试管加入2.0ml碱性硫酸铜试剂，2分钟后加第3支试管，以此类推。全部试管加完碱性硫酸铜试剂后若已到10分钟，则第1支试管可立即加入0.20ml Folin-酚试剂，1分钟后第2支试管加入0.20ml Folin-酚试剂，2分钟后加第3支试管，以此类推。40℃水浴10min，冷却后，每一分钟测定一管吸光值。

（1）具有快速、灵敏,实验结果稳定、可靠之特点,而且有效地消除了紫外-可见分光光度法中有机杂质的干扰

（2）可以消除因为系统的光源不稳定，检测器灵敏度变化等由于系统本身的原因而引起的系统误差。

从而测定结果更准确，结果更具可靠性。

再利用碱水解RNA而不水解DNA的特性，进行碱水解后分离即可。

进行测定时，加F olin—酚试剂时要特别小心，因为该试剂仅在酸性pH条件下稳定，但上述还原反应只在pH=10的情况下发生，故当Folin一酚试剂加到碱性的铜—蛋白质溶液中时，必须立即混匀，以便在磷钼酸—磷钨酸试剂 被破坏之前，还原反应即能发生。

一般单糖，蛋白质，色素等都会有影响，所以测定之前要把这些干扰都除去。

在不同文献里发现不同的苯酚溶液配置方法，有的直接配制，有的要添加Al片、NaHCO3或氢氧化钠后蒸馏。你是用来测多糖总量的吧，再加上如果用分光光度法仪器的误差,那我想你的苯酚是分析纯的话应该可以直接配制,且注意温度控制（苯酚室温下为固态）。如果精度要求高还是用色谱方面的相关技术，而且苯酚要重蒸馏。怎么配取决于你对实验结果的要求（如精度要求，多糖成分是常量还是微量甚至痕量）。

这是我参照文献和结合自己实验工作做出的回答，本人才疏学浅，能力只能至此。

围内,吸收值与糖浓度呈线性关系,从而可比色测定其含量。苯酚比色不能排除还原性杂质(包括单糖)的干扰,且显色剂极

易氧化而影响比色。

3

,5一二硝基水

杨酸法(DNs法),选用以

水解前测得空白值校正水解后样品测定值,达到消除还原性杂质干扰的效果

两种不同的DNS配制方法，加苯酚和无水硫酸钠，目的为提高显色色度。与不加苯酚和无水硫酸钠的DNS相比，吸光值高于后者。标准曲线回归方程斜率大于后者，既产生的比色常数也低于后者。

铁离子检验方法：

(1)溶液棕黄色

(2)加苯酚显紫红色（络合物）

Fe3+ + 6C6H5OH =[Fe（C6H5O）6]3- + 6H+.

(3)加SCN-(离子) 显血红色 (络合物)

Fe3+ + 3SCN- ==Fe(SCN)3（络合反应,是可逆的,两种离子结合的比例不唯一,是检验三价铁的特征反应,二价铁无此特性）

(4)加氢氧化钠有红褐色沉淀,从开始沉淀到沉淀完全时溶液的pH（常温下）：2.3.7

（5）NH4SCN试法：

Fe3+与SCN-生成血红色具有不同组成的络离子.碱能分解络合物,生成Fe(OH)3沉淀,故反应需要在酸性溶液中进行.HNO3有氧化性,可使SCN-受到破坏,故应用稀HCL溶液酸化试液.其他离子在一般含量时无严重干扰.

（6）K4Fe（CN)6试法：

Fe3+在酸性溶液中与K4Fe（CN)6生成蓝色沉淀（以前为普鲁土蓝）,但实际上它与前述滕氏蓝系同一物质.其他阳离子在一般含量时不干扰鉴定.Co2+、Ni2+等与试剂生成淡蓝色至绿色沉淀,不要误认为是Fe3+.

酸碱反应

苯酚属于酚类物质，有弱酸性，能与碱反应：

PhOH+NaOH→PhONa+H2O

苯酚pKa=1.28×10-10，酸性介于碳酸两级电离之间，因此苯酚不能与NaHCO3等弱碱反应：

PhOˉ+CO2+H2O→PhOH+HCO3ˉ

此反应现象：二氧化碳通入后，溶液中出现白色混浊。

显色反应

苯酚遇三氯化铁溶液显紫色，原因是苯酚根离子与Fe形成了有颜色的配合物。

6PhOH+FeCl3→H3[Fe(OPh)6]（紫色）+3HCl。