能使蛋白质沉淀的试剂

高温下热处理蛋清后蛋清凝固就是一种蛋白质变性的过程。高温条件下蛋白质分子中的氢键断裂，但其一级结构没有发生变化，蛋白的空间结构遭到破坏后，原来在蛋白内部的疏水基团暴露出来，发生疏水互作，蛋白的溶解度降低发生沉淀。

而8M的尿素为什么能重新溶解变性后的蛋清呢？

1、尿素在4M-8M时都能断裂氢键，是蛋白质发生不同程度的变性，因此尿素本身也是一种变性剂。但是高浓度尿素可以使蛋白完全变性，使蛋白以无规则卷曲的状态存在；

2、尿素具有形成氢键的能力，尿素在8M浓度下时，可以破坏水的氢键，降低疏水相互作用，使蛋白质分子内部暴露的疏水基团伸展和溶解性增加。

这一技术已经不新鲜了，实验室中常用的除了尿素还有盐酸胍，它们都是变性蛋白较好的溶解剂。在体外表达蛋白时，大肠杆菌由于缺少蛋白折叠辅助因子或者蛋白表达率过高来不及折叠，此时很容易形成非正常折叠的蛋白造成包涵体的出现。常见的纯化方法是将包涵体分离出来用尿素重新溶解包涵体蛋白后再复性蛋白质。

天然蛋白质分子受到某些物理因素如热、紫外线照射、高压和表面张力等或化学因素如有机溶剂、酸碱等的影响时，生物活性丧失，溶解度降低，不对称性增高以及其他的物理化学常数发生改变，这种过程称为蛋白质变性。蛋白质变性后，会引起一些物理化学性质的改变，疏水基外露，溶解度降低，一般在等电点区域不溶解，分子相互凝集，形成沉淀。但在碱性溶液中，或有尿素、盐酸胍等变性剂存在时，仍保持溶解状态，透析除去这些变性剂时，又可沉淀出来。

蛋白质变性影响因素：1，一般温度高于60摄氏度持续一段时间会变性。不同蛋白耐受高温不同，具体问题具体分析。2，高浓度有机溶剂，如丙酮，乙醚，巯基乙醇等。3，含有蛋白酶环境会分解蛋白。4，变性剂，如高浓度盐酸胍和尿素。，5，盐溶液，在一定浓度盐作用下，会使蛋白中折叠在内部的疏水集团暴露而改变折叠结构。6，pH值变化，强酸强碱条件下会破坏蛋白质结构。等电点时蛋白质沉淀。。。。因此，克服和避开上述内容可以减少变性。具体措施：1，控制温度，pH值。避开强酸强碱和等电点。2，尽量减少和有机溶剂和变性剂的接触。3，添加蛋白酶抑制剂，可以减少蛋白分解。4，盐浓度适宜，不能太高。5，增加NMSF，N-马来酰亚胺，去氧胆酸钠等抗氧化物质，可以防止蛋白被氧化变性。。。。。

在分离纯化时，先要了解你蛋白质的性质，比如等电点

然后选择合适的PH（比如说IgG MAB 洗脱时适合ph为4-4.5），合适的盐离子浓度，合适的缓冲体系。另外你可以适当添加一些其他物质减少变性机会，比如山梨醇，蔗糖等。

一般如果说是过柱子的，那就推荐PH为3-5，盐离子浓度为0.1-0.5M，流速为0.3ml/min

具体的你多查一些文献看看