为什么盐酸会影响醋酸洋红的染色效果

1。甲基绿和吡罗红：实验原理:甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿使DNA呈现绿色,吡罗红使RNA呈现红色.利用甲基绿,吡罗红混合染色剂将细胞染色,可以显示DNA和RNA在细胞中的分布.

试剂及配制方法

（1）试剂 质量分数为0.9%的NaCl溶液，质量分数为8%的盐酸，乙酸钠，乙酸，蒸馏水，吡罗红甲基绿混装粉。如果化学试剂商店没有吡罗红甲基绿混装粉，可以分别购买甲基绿和吡罗红G，然后按A液的第二种方法配制（见下文）。

（2）染色剂的配制

①染色剂A液的两种配制方法

第一种方法：取吡罗红甲基绿粉1 g，加入到100 mL蒸馏水中溶解，然后用滤纸过滤，将滤液放入棕色瓶中备用。

第二种方法：取甲基绿2 g溶于98 mL蒸馏水中，取吡罗红G 5 g溶于95 mL蒸馏水中。取6 mL甲基绿溶液和2 mL吡罗红溶液加入到16 mL蒸馏水中，即为A液，放入棕色瓶中备用。（注意：用于核酸染色的是吡罗红G，请不要错买吡罗红B。）

②染色剂B液的配制方法 B液是一种缓冲液，由乙酸钠和乙酸混合而成。先取乙酸钠16.4 g，用蒸馏水溶解至1 000 mL备用；再取乙酸12 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL备用。取配好的乙酸钠溶液30 mL和稀释的乙酸20 mL，加蒸馏水50 mL，配成pH为4.8的B液（缓冲液）。

③染色剂的配制染色剂是由A液、B液混合配制而成的。取A液20 mL和B液80 mL混合，就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂。应该注意的是该试剂应现用现配。

2。龙胆紫和醋酸洋红：

染色质(体)容易被碱性染料染成深色。作为染色剂必须具备两个条件：一是具有颜色；二是要与被染组织间有亲和力。染料的颜色和它与组织间的亲和力是由染料本身的分子结构决定的，产生颜色的发色基团和与组织间产生亲和力的助色基团共同决定了染色剂的染色性质。作为染料物质，除了有发色基团外，还需要有一种使化合物发生电离作用的助色基团。染色剂的酸、碱性界定并非由染料溶液的pH值决定，而是根据染料物质中助色基团电离后所带的电荷来决定。一般来说，助色基团带正电荷的染色剂为碱性染色剂，反之则为酸性染色剂。

醋酸洋红常被用作核、染色体的固定和染色剂。在煮沸的45％醋酸中加洋红使之饱和，再加入微量的铁离子，便使醋酸洋红材料在为醋酸固定的同时，

洋红将核或染色体染成红色。用龙胆紫可将染色体染成蓝紫色。

3。伊红美蓝：伊红和美蓝是两种苯胺类染料，可以抑制革兰氏阳性菌的生长。同时，这些染料可以区分那些发酵乳糖的微生物。大肠菌群因其强烈发酵乳糖而产生大量的混合酸，使菌体表面带上正电荷，可染上伊红染料，伊红与美蓝结合，菌体被着上深紫色，在含有两种染料呈紫色的培养基上，形成带核心、具金属光泽的菌落。因此可以用伊红和美蓝鉴别革兰氏阴性菌（大肠杆菌）的存在。

4。二苯胺：

二苯胺是一种非极性芳香族有机分子，有毒，熔点比水低，微溶解于水，易溶解于酒精、冰乙酸等有机溶剂。化学性质活泼，遇光易变色。因此要放置于暗处保存。

二苯胺试剂鉴定DNA的原理：DNA分子中的脱氧核糖在酸性环境下生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，再与二苯胺试剂结合显蓝色，颜色的深浅与溶液中的DNA含量成正比。

二苯胺试剂的配制：A液：1.5克二苯胺溶解于100ml冰乙酸中,在加入1.5ml浓硫酸(此处浓硫酸的作用可能是作为强氧化剂来维持试剂的稳定)，配制好的A液保存在棕色瓶中。B液：体积分数为0.2%的乙醛。由于乙醛是一种还原性试剂，所以实验前不能将A液和B液混合在一起。同时因为二苯胺试剂性质不稳定，极易变色，因此建议现配现用。

5。双缩脲：鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂，发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下的铜离子与双缩脲试剂发生的紫色反应。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲（H2NOC－NH－CONH2）结构相似的肽键，所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生颜色反应，可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在。

6。斐林试剂：由氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的溶液和硫酸铜的质量分数为0.05 g/mL的溶液，还有酒石酸钾钠配制而成的。它与可溶性的还原性糖(葡萄糖）、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀

。因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。

7.班氏试剂：

班氏试剂常用于尿糖的鉴定，其配方与斐林试剂不一样，其配方为：

①400ml水中加85g柠檬钠和50g无水碳酸钠；

②50ml加热的水中加入8.5g无水硫酸铜。制成溶液；

③把溶液倒入柠檬酸钠溶液中，边加边搅，如产生沉淀可滤去。

（2）其反应原理与斐林试剂略有差别。利用斐林试剂鉴定时，斐林试剂甲和斐林试剂乙直接反应生成和可溶性还原糖反应产生砖红色沉淀。而班氏试剂中的产生却是这样的：柠檬酸钠和碳酸钠均为强碱弱酸盐，在水中它们均可水解产生，与柠檬酸钠溶液和溶液混合时，结合，生成与葡萄糖中的醛基反应生成砖红色沉淀。

（3）两种试剂的保存方式不同。斐林试剂甲和斐林试剂乙可强烈产生，很容易沉淀析出，因此斐林试剂一般为现用现配；而班氏试剂的配方中，柠檬酸钠为一对缓冲物质，产生的数量有限，与溶液混合后产生的浓度相对较低，不易析出，因此该试剂可长期保存。

1.最常用的碱性品红，顾名思义，它呈现碱性，而染色质也呈现碱性，所以在配置品红染液时在其中加入醋酸或盐酸，它们一方面与品红牢固结合，一方面与染色质结合，达到染色目的，且染色效果好，细胞质一般被染成淡紫红色，或无色，而细胞核被染成深紫红色或紫色，对比十分强烈。有两个重要的配方，一个是石碳酸-品红，一个是锡夫试剂，网上很容易查到具体配方。

2.苏木精。这是至今为止最优良的细胞核染色剂，优点是几乎所有植物的任何组织中的细胞核都能被它强烈染色。苏木精本身不是染料，起作用的是他的氧化产物苏木精素，依靠硫酸铁按或硫酸铝按等媒染剂来染色。常用配方是1铁矾-苏木精，2醋酸-铁矾-苏木精

并且这里的甲基绿不是染染色体的 是染DNA

染染色体用的是醋酸洋红溶液或者龙胆紫溶液（后面会学到）

染RNA的是吡罗红试剂

这个实验是甲基绿和吡罗红对DNA和RNA的染色实验

希望对你有帮助 不懂欢迎追问

配制：1）甲液质量浓度为 0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100ml

2）乙液质量浓度为0.05g/ml，取5gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml

临用时将甲、乙液等量混合

作用：鉴定还原性糖：C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。

还原性糖与斐林试剂发生作用，生成砖红色沉淀。如用于鉴定组织液中有否还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。

2、班氏尿糖定性试剂

配制 ：称取17.4克无水硫酸铜（CuSO4）溶解于100毫升热蒸馏水中，冷却后，稀释到150毫升。称取柠檬酸钠173克及无水碳酸钠（Na2CO3）100克，加蒸馏水600毫升，加热使之溶解，冷却后，稀释到850毫升。把硫酸铜溶液倾入柠檬酸钠及碳酸钠溶液中，搅匀后即为班氏尿糖定性试剂。用细口瓶贮存备用（为了防止氢氧化铜沉淀的生成，故加入柠檬酸钠。柠檬酸钠是一种亲水性掩蔽性络合物形成剂，它能与铜离子形成可溶性络盐）。

使用方法同斐林试剂，所不同的是班氏试剂可长期使用。

3、双缩脲试剂

配制：A液：质量浓度为 0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100ml

B液：质量浓度为0.01g/ml，取1gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml

使用时，先加A液，后加B液

作用：鉴定蛋白质，蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可产生紫色反应。也可用于鉴定多肽。

4、苏丹Ⅲ

配制：取0.1g苏丹Ⅲ，溶解在20ml95%酒精中

作用：鉴定脂肪，脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染成红色）。

5、质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液的混合液（1：1）。

作用：用于洋葱根尖的解离，即使组织中的细胞相互分离开来。能杀死细胞固定。

6、质量浓度为0.01g/mL的或0.02g/mL龙胆紫溶液（或醋酸洋红溶液）

配制：是将龙胆紫溶解在质量分阶段数为2%的醋酸溶液中配制而成

作用：使细胞核内的染色体着色，便于观察。

7、质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液

作用：观察成熟植物细胞质分离时用。经此处理细胞仍具活性。

8、质量浓度为0.1mg/ml的亚甲基蓝溶液

配制：将亚甲基蓝溶于蒸馏水中配制而成

作用：（1）用于观察根对矿质元素离子的交换吸附观察；

（2）用于检测水中细菌情况，根据亚甲基蓝褪色情况，判断水质被细菌污染情况。

是活体染色剂。

9、丙酮

是有机溶剂，在叶绿体中色素提取时，用于溶解叶绿体中的色素。可用酒精替代，不过提取色素时将绿叶放入酒精中隔水加热

10、层析液

配制：由20份石油醚（在60~900C下分馏出来的）、2份丙酮和1份苯混合而成。是一种脂溶性很强的有机溶剂，叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同：溶解度高的随层析液在滤纸上扩散很快；溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。

代用品：93号汽油、四氯化碳

11、SiO2、CaCO3

加入少许SiO2是为了研磨得充分；加入少许CaCO3是为了防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。

12、碘液

配制：取2gKI ，溶解在5ml蒸馏水中，再加1gI，待溶解后用蒸馏水稀释至300ml。溶液在光亮处容易变成紫色，必须保存在暗色玻璃瓶里。

作用：用来测定淀粉，淀粉遇碘后，形成紫色的复合物。

13、二苯胺

配制：称取1.5g二苯胺，溶于100mL冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸，用棕色瓶保存。临用前，在10mL的上述溶液中再加入0.1mL体积分数为0.2%的乙醛溶液。

作用：DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色。

14、NaOH：用于吸收CO2（验证光合作用需要CO2）或改变溶液的pH,

15、Ca(OH)2：鉴定CO2（验证呼吸作用产生CO2）。

16、NaHCO3：提供CO2等。

B、8%的盐酸能使DNA与蛋白质分离，但不能使DNA水解，B错误；

C、酒精灯烘干载玻片，可迅速杀死细胞，这样可以防止细胞死亡时溶酶体对核酸的破坏，C正确；

D、用高倍显微镜可以比较清楚地看到呈绿色的细胞核和呈红色的细胞质，D错误．

故选：C．

SO₂会使品红溶液褪色。

红色溶液用来鉴定SO₂，因为SO2有漂白性（而不是氧化性），会使品红溶液褪色。(但由于SO₂的漂白是暂时性的，属于化合反应，生成一种不稳定的物质，加热已褪色的品红溶液其还会变回原来的颜色。）

品红溶液与孔雀绿拼染腈纶绒线可得黑色，色泽乌黑，并且日晒牢度比分别单独应用时有明显提高。 在高中化学试验中常利用品红的还原性和不稳定性来检验SO2的漂白性，还有品红还是一种常用的生物染色剂。

品红用途：

用于羊毛、丝绸织物和锦纶织物的染色以及皮革、纸张、肥皂、木材、医药和化妆品的着色，还用于生物着色。

技术指标：

ZBG 57 026---90 指标名称 指标外观 深红色均匀粉末色光 与标准品近似至微强度,分 为标准品的100±3 水分,% ≤5.0 水不溶物,% ≤0.5 细度(80目筛余物),% ≤5.0 在羊毛织物上的染色坚牢度,级 符合标准品。

溶于水呈蓝光红色至品红色，微溶于乙醇、丙酮和溶纤素，不溶于其他有机溶剂。遇浓硫酸呈蓝光红色，稀释后呈亮红色，遇浓硝酸为绯红色溶液后转橙色。该品的水溶液加浓盐酸呈品红色。加氢氧化钠液呈橙棕色。染色时遇铜、铁离子其色泽前者微蓝暗，后者略浅，遇铬离子很少影响。匀染性好。

参考资料：百度百科-品红溶液

还有碱性染料或改良苯酚品红溶液

DNA染色实验

1、原理与解析

(1)真核细胞的DNA主要分布在细胞核内,RNA主要分布在细胞质中.

(2)甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿对DNA亲和力强,使DNA显现出绿色,而吡罗红对RNA的亲和力强,使RNA呈现出红色.用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色,可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布.(同时甲基绿用二苯胺或龙胆紫代替做平行)

(3)盐酸的作用

① 盐酸能改变细胞膜的通透性,加速染色剂的跨膜运输；

② 盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离,便于DNA与染色剂的结合.

注意事项

1.材料的选择

① 选用的实验材料既要容易获得,又要便于观察；

② 常用的观察材料由人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞(为避免原有颜色的干扰,不可使用紫色表皮细胞)

2.取材要点

① 取口腔上皮细胞之前,应先漱口,以避免装片中出现太多的杂质；

② 取洋葱表皮细胞时,尽量避免材料上带有叶肉组织细胞.

3.冲洗载玻片时水的流速要尽量慢,切忌直接用水龙头冲洗.

4.安全要点

① 用酒精灯烘烤载玻片时,不要只集中于材料处,而应将载玻片在火焰上来回移动,使载玻片均匀受热,以免破裂；

② 烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中,最好先自然冷却1分钟.

5.换用高倍镜观察材料时,只能用细准焦螺旋进行调焦,切不可动粗准焦螺旋.

主要步骤(以观察口腔上皮细胞为例)

1.取材

① 滴： 在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液；

② 刮： 用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下；

③ 涂： 将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中；

④ 烘： 将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干.

2.水解

① 将烘干的载玻片放入装有30ml质量分数为8%的盐酸的小烧杯中,进行材料的水解；

② 保： 将小烧杯放入装有30℃温水的大烧杯中保温5分钟.

3.冲洗涂片

① 冲： 用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片10秒钟；

② 吸： 用吸水纸吸去载玻片上的水分.

4.染色

① 染：用2滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上,染色5分钟；

② 吸： 吸去多余染色剂；

③ 盖： 盖上盖玻片.

5.观察

① 低： 在低倍物镜下,寻找染色均匀,色泽浅的区域,移至视野中央,将物像调节清晰；

② 高： 转到高倍物镜,调节细准焦螺旋,观察细胞核和细胞质的染色情况.

2%甲基绿水溶液的配制

甲基绿（methyl green） 蒸馏水加至 50mlc 用三氯甲烷抽提, 甲基绿水溶液的抽提：甲基绿为绿色粉末,属三苯甲烷染料,这种染料是由氯代甲烷作用于结果晶紫而形成的一 种化合物.由于甲基化作用,甲基绿就比甲基绿后,所引进的甲基连接得并不牢固,容易从甲基绿中脱失.另一方面, 在甲基化过程中,还有一部分结晶紫并没有生成甲基绿,因此,也有人认为甲中,常有少量的甲基紫或结晶紫成份.但是,也有人认为甲基紫乃是甲基绿的衰败产物,甲基绿在储存过程中,会不断产生甲基紫.因此,在配制试剂时,必须 先将甲基绿所含的甲基紫或结晶紫抽提出来,才能使细胞核内的脱氧核糖核酸染成绿色.抽提方法是取 2%甲基绿水溶 液 20ml 倾入洁净分液漏斗,加入三氯甲烷 20ml 充分摇荡混合,使其内的甲基紫溶于三氯甲烷中而呈紫红色.旋动分液 漏斗下部的砂塞,慢慢把如此反复更换三氯甲烷,直到三氯甲烷无紫红色为止,即可得到得纯的甲基绿溶液.

英文名称：Methyl Green 分子式：C27H35Cl4N3Zn 分子量：608.78 IUPAC 名称： 4-((4-(dimethylamino)phenyl)(4-(dimethyliminio)cyclohexa-2,5-dieny lidene)methyl)-N-ethyl-N,N-dimethylbenzenaminium dichloride compound with zinc(II) chloride 甲基绿是具有金属光泽的绿色微结晶或亮绿色粉末.溶于水,显蓝绿色. 稍溶于乙醇,不溶于戊醇. 盐酸中显红黄色,在氢氧化钠中无色.试剂溶液在可见光区有吸收峰 (λmax=633.8nm). 与 ReO4-、HgCl42-、BiI4-、AuCl4-和 GaCl4-等形成离子缔合物. 用于光度法测定 Hg2+、ReO4-等,定性检出铁氰化物,酸碱指示剂和细 胞染色剂.

甲基绿为碱性染料,它易与聚合程度高的 DNA 结合呈现绿色. 又称双绿 SF 双绿 SF.绿色晶体,具金黄色光泽,或淡绿色粉末.溶于水,呈蓝 绿色.微溶于乙醇,不溶于乙醚. 由氯甲烷与甲基紫(C.I.碱性紫 1)反应制得. 商品通常为锌复盐 C26H33N3Cl2ZnCl2(称 C.I.碱性蓝 20). 用于细菌染色(新鲜标本细胞核染色)甲基绿-盐酸混合物用于检定精子、 淋球菌和肥大细胞染色. 甲基绿可用于鉴定 DNA.DNA 遇甲基绿（常温）会被染成蓝绿色. 甲基绿—派洛宁 （methyl green-pyronin）为碱性染料,它分别能与细胞内的 DNA、RNA 结合呈现不同颜色.当甲基绿与派洛宁作为混合染料时,甲基绿与染色质中 DNA 选择性结合显示绿色或蓝色；派洛宁与核仁、细胞质中的 RNA 选择性结 合显示红色.其原因可能是两种染料的混合染液中有竞争作用,同时两种核 酸分子都是多聚体,而其聚合程度有所不同.

甲基绿易与聚合程度高的 DNA 结合呈现绿色.而派洛宁则与聚合程度较低的 RNA 结合呈现红色（但解聚的 DNA 也能和派洛宁结合呈现红色）.即 RNA 对派洛宁亲和力大,被染成红色, 而 DNA 对甲基绿亲和力大,被染成绿色.

使用配制方法 关于吡罗红和甲基绿分装粉的使用方法 试剂及配制方法（ 1） 试剂 ） 质量分数为 0.9%的 NaCl 溶液,质量分数为 8%的盐酸,乙酸钠,乙酸, 蒸馏水,吡罗红甲基绿混装粉.如果化学试剂商店没有吡罗红甲基绿混装粉, 可以分别购买甲基绿和吡罗红 G,然后按 A 液的第二种方法配制（见下文）.（ 2） 染色剂的配制 ） ①染色剂 A 液的两种配制方法 第一种方法：取吡罗红甲基绿粉 1 g,加入到 100 mL 蒸馏水中溶解,然 后用滤纸过滤,将滤液放入棕色瓶中备用. 第二种方法：取甲基绿 2 g 溶于 98 mL 蒸馏水中,取吡罗红 G 5 g 溶于 95 mL 蒸馏水中.取 6 mL 甲基绿溶液和 2 mL 吡罗红溶液加入到 16 mL 蒸馏 水中,即为 A 液,放入棕色瓶中备用.（注意：用于核酸染色的是吡罗红 G, 请不要错买吡罗红 B.） ②染色剂 B 液的配制方法 B 液是一种缓冲液, 由乙酸钠和乙酸混合而成. 先取乙酸钠 16.4 g,用蒸馏水溶解至 1 000 mL 备用；再取乙酸 12 mL,用蒸 馏水稀释至 1 000 mL 备用.取配好的乙酸钠溶液 30 mL 和稀释的乙酸 20 mL, 加蒸馏水 50 mL,配成 pH 为 4.8 的 B 液（缓冲液）. ③染色剂的配制 染色剂是由 A 液、B 液混合配制而成的.取 A 液 20 mL 和 B 液 80 mL 混合,就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂.应该注意的是 该试剂应现配现用