产物溶于水，那么怎么去除聚乙二醇

一、DNA提取（粗提取）

1、酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb

2、甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

3、玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

4、异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）

5、表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。

6、加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。

7、碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。

二、DNA的浓缩（精提取）

1、固体聚乙二醇（PEG）浓缩：用透析袋外敷PEG至合适量。

2、丁醇抽提浓缩：DNA溶液中水可分配到正丁醇或仲丁醇，但DNA不会。因此重复几次可显著减少DNA体积。

3、乙醇或异丙醇沉淀：（1）需要阳离子盐的存在，NaAc最常用,NaCl对含SDS样品好，NH4Ac去除dNTP好。PiCl沉淀RNA好，但不能用于反转录前。（2）沉淀温度与时间；0℃一4℃，12000g，10分钟，小于100bp DNA需超速离心。

4、精胺沉淀法：与DNA结合后使DNA结构凝缩沉淀，需在无盐或低盐溶液。

双水相萃取放大容易：一般10ml离心管的实验结果可直接放大到工业规模。具体实验步骤：

1、配制一系列不同浓度、pH及离子强度的双水相，每个双水相改变一个参数。

2、加入料液，再加水使整个系统质量达到5~10g。离心管封口后充分混合。

3、1800－2000g下离心3－5min，使两相完全分离。

4、用吸管或移液管将上相和下相分别吸出，测定上、下相中目标产物的浓度或生物活性，计算分配系数。

5、上、下两相中目标产物的总量应与加入量对比，以检验是否存在沉淀或界面吸附现象，并可确认浓度或活性测定中产生的系统误差。

6、分析目标产物的收率和纯化倍数，确定最佳双水相系统。

二、特点：

1、含水量高（70%～90%），适宜提取水溶性的蛋白质、酶等生物活性物质，且不易引起蛋白质的变性失活。2、不存在有机溶剂残留问题。3、易于放大，各种参数可按比例放大而产物收率并不降低。这是其他分离技术无法比拟的。

萃取是在两个液相间进行。大部分萃取采用一个是水相。另一个是有机相。但有机相易使蛋白质等生物活性物质变性。最近，发现有一些高分子水溶液（如分子量从几千到几万的聚乙二醇硫酸盐水溶液）可以分为两个水相，蛋白质在两个水相中的溶解度有很大的差别。故可以利用双水相萃取过程分离蛋白质等溶于水的生物产品。

例如用聚乙二醇（PEG Mr为6000）/磷酸钾系统从大肠杆菌匀浆中提取β-半乳糖苷酶。这是一个很有前途的新的分离方法，特别适用于生物工程得出的产品的分离。

一.固体聚乙二醇（PEG）浓缩：用透析袋外敷PEG至合适量。

二.丁醇抽提浓缩：DNA溶液中水可分配到正丁醇或仲丁醇，但DNA不会。因此重复几次可显著减少DNA体积。

三.乙醇或异丙醇沉淀：（1）需要阳离子盐的存在，NaAc最常用,NaCl对含SDS样品好，NH4Ac去除dNTP好。PiCl沉淀RNA好，但不能用于反转录前。（2）沉淀温度与时间；0℃一4℃，12000g，10分钟，小于100bp

DNA需超速离心。

四.精胺沉淀法：与DNA结合后使DNA结构凝缩沉淀，需在无盐或低盐溶液。

双水相萃取的原理：分子间存在相互作用力，这种分子间作用力随相对分子质量增大而增大。当两种高分子聚合物之间存在相互排斥作用时，由于相对分子质量较大的分子间的排斥作用与混合熵相比占主导地位，即一种聚合物分子的周围将聚集同种分子而排斥异种分子，当达到平衡时，即形成分别富含不同聚合物的两相。

扩展资料：

可形成双水相的双聚合物体系有：聚乙二醇（PEG）/葡聚糖（Dx）,聚丙二醇/聚乙二醇，甲基纤维素/葡聚糖。

双水相萃取中采用的双聚合物系统是PEG/Dx，该双水相的上相富含PEG，下相富含Dx。另外，聚合物与无机盐的混合溶液也可以形成双水相，例如，PEG/磷酸钾（KPi）、PEG/磷酸铵、PEG/硫酸钠等常用于双水相萃取。

双水相萃取的应用：蛋白质、酶的纯化、多肽的分离纯化、核酸的分离纯化等。

SDS是十二烷基硫酸钠，

RIPA裂解液组成： 50 mM Tris-HCl (pH 7.4，三羟甲基氨基甲烷-盐酸), 150 mM NaCl, 1% NP-40,0.1% SDS（不同公司的配比不同，有用Tris-hcl PH=8.0的，加0.5%的去氧胆酸钠）

NP-40（Tergitol-type ）是很温和的去垢剂，主要用于全细胞蛋白的提取，全称乙基苯基聚乙二醇-40.

tris-triton组成：10 mM Tris，100 mM NaCl，1 mM EDTA，1 mM EGTA，1% Triton X-100（聚乙二醇辛基苯基醚），10%的甘油，0.1% SDS，0.5% deoxycholate（脱氧胆酸盐）。