品红亚硫酸钠与营养琼脂能一起灭菌吗

中文名称：品红亚硫酸钠培养基

英文名称:Endo Agar

用途：

用于水中大肠菌群的分离或确证试验。 (GB/T8538-2008和GB5750.12—2006)。

原理：

乳糖发酵的细菌产生乙醛，在存在碱性品红的情况下乙醛与亚硫酸钠结合形成红色菌落，快速发酵乳糖的细菌产生金属光泽，不发酵乳糖的细菌形成无色透明的菌落。蛋白胨、酵母膏粉、牛肉膏粉提供碳氮源、维生素和矿物质乳糖为可发酵的糖类琼脂是培养基的凝固剂磷酸氢二钾为缓冲剂亚硫酸钠能将碱性品红还原，使其褪色，发酵乳糖的细菌产生乙醛，与亚硫酸钠和碱性品红生成红色菌落。

配方(每升)

蛋白胨：10g

酵母膏粉：5g

牛肉膏粉：5g

乳糖：10g

琼脂：15g

磷酸氢二钾：3.5g

无水亚硫酸钠：5g

碱性品红：1g

最终pH：7.2±0.2

使用方法：

1、称取本品54.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，115℃高压灭菌20min，冷至50℃左右，倾注无菌平皿，备用。

2、滤膜灭菌：将孔径为0.45μm的滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水或去离子水，置于沸水浴中煮沸灭菌三次，每次15min。前两次煮沸后需更换水洗涤2-3次，以除去残留溶剂。

3、滤器灭菌：用点燃的酒精棉球，火焰灭菌。也可用121℃高压灭菌20min。

4、过滤水样：用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将100mL水样(如水样含菌较多，可减少过滤水样量，或将水样稀释)注入滤器中，打开滤器阀门，负0.5大气压下抽滤。

5、培养：水样抽滤完后，再抽气约5S，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在品红亚硫酸钠培养基上，滤膜截留面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入36±1℃恒温箱内培养22-24h。

6、观察结果：挑出符合下列特征菌落进行革兰氏染色、镜检。

紫红色，具有金属光泽的菌落。

深红色，不带或略带金属光泽的菌落。

淡红色，中心色较深的菌落。

先将琼脂溶解，然后加入亚硫酸钠，磷酸氢二钾蛋白胨等，同时加热，再用脱脂棉过滤。最后在过滤的溶液中加乳糖。。我觉得你说的沉淀试剂上时琼脂没溶解完全的现象，琼脂不用完全溶解，过滤的作用就是把没有完全溶解的琼脂粉除去，使培养基更清澈。

品红-亚硫酸溶液：称取0.1g碱性品红，溶于60mL的80℃的热蒸馏水中，冷却后，过滤，加10mL10%亚硫酸钠溶液（1g亚硫酸钠溶于10mL水中），1mL盐酸，充分搅拌，此时溶液呈微红色。加水到100mL，于棕色瓶中存放2h以上，呈无色后即能使用。可以用活性炭脱色.

不褪色！

因为溶液中没有SO2存在！

SO2的漂白性，不是因为发生氧化还原反应，而是和有色物质结合成不稳定的无色物质，所以要褪色，就必须有SO2存在，所以这个不褪色！

将亚硫酸钠溶液与品红溶液混合 ， 品红溶液不会退色

亚硫酸钠溶液碱性或中性时不能氧化硫离子，酸性是可以

大多数氧化剂能氧化硫离子，如KMnO4 O2 Cl2 Br2 I2 H2O2 O3 KClO3 HNO3 浓H2SO4 FeCl3

一、水质微生物及指示菌 在各种水体，特别是污染水体中存在有大量的有机物质，适于各种微生物的生长，因此水体是仅次于土壤的第二种微生物天然培养基。水体中的微生物主要来源于土壤，以及人类的动物的排泄物及污染。水体中微生物的数量和种类受各种环境条件的制约。 一般认为，水中微生物以革兰氏阴性杆菌占有较大优势。与其他水体相比，河水及溪水中革兰氏阳性菌相对较多，这是因为陆地微生物冲洗污染的缘故。 水体中的致病性微生物一般并不是水中原有微生物，大部分是从外界环境污染而来，特别是人和其它温血动物的粪便污染。水中常见的致病性细菌主要包括：志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌、小肠结炎耶尔森氏菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌等。 在实际控制中，对水质卫生质量的评价和控制，是无法对各种可能存在的致病微生物一一进行检测，而一般利用对指示菌的检测和控制，来了解水体是否受到过人畜粪便的污染，是否有肠道病原微生物存在的可能，从而评价水的质量，以保证水质的卫生安全。 目前，世界各国一般认为大肠菌群是指示水质受粪便污染较好的指示菌。 我国水质控制也采用大肠菌群作为指示菌，GB5749-85《中华人民共和国国家标准 生活饮用水卫生标准》规定，生活饮用水中大肠菌群每升不得超过3个。 在某些情况下，水体中的细菌总数也可指示水体受粪便等污染物污染的情况。这里的细菌总数其实是指营养琼脂培养后形成的菌落总数。目前世界各国对于控制饮用水的卫生质量，除采用大肠菌群等指标外，一般还采用细菌总数这个指标。我国GB5749-85《中华人民共和国国家标准 生活饮用水卫生标准》中规定生活饮用水细菌总数每毫升不得超过100个。二、水质微生物检验方法 GB5750-85《中华人民共和国国家标准 生活饮用水标准检验法》提供了水质中细菌总数和总大肠菌群的检测方法。（一）细菌总数的检测： 国家标准中，细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。 对生活饮用水，直接吸取1ml水样于平皿中，加入营养琼脂后混匀，37℃培养24h，进行计数。 对水源水，根据情况对样品进行10倍梯度稀释，选择适宜稀释液1ml，加注平皿，营养琼脂混匀，37℃培养24h，进行计数。 按照规定格式报告每毫升水中细菌总数。（二）总大肠菌群的检测： 国家标准中，利用总大肠菌群作为粪便污染的指标。总大肠菌群是指一群需氧及兼性厌氧的，37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。水样中总大肠菌群数的含量，表明水被粪便污染的程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。 国家标准提供了多管发酵法及滤膜法检测总大肠菌群的方法。 多管发酵法检测总大肠菌群，分为三步：初发酵试验，平板分离，复发酵证实试验。初发酵试验，采用乳糖蛋白胨培养液37℃培养24h，观察产酸产气情况。对阳性管培养物，接种于品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基，观察菌落特征，并进行革兰氏染色和镜检。对典型和可疑菌落，接种于乳糖蛋白胨培养液，进行复发酵证实试验，并根据标准所附检数表报告结果。 其中，对生活饮用水，初发酵试验接种水样总量300ml，即100ml接种2管，10ml接种10管，采用两个稀释度，12支发酵管。对水源水，初发酵试验接种水样总量55.5ml，即10ml接种5管，1ml接种5管，0.1ml接种10管，共采用三个稀释度，15支发酵管。两种接种方法，所用的检数表是不同的。 滤膜法检测总大肠菌群，就是利用微孔滤膜，过滤一定量水样，将水样中含有的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜帖放在选择性培养基上（如品红亚硫酸钠培养基），经培养和证实试验后，直接计数滤膜上生长的典型大肠菌群菌落，并计算出每升水样中含有的总大肠菌群数。三、说明： 1．菌落总数测定中，应选择合适的稀释度进行。生活饮用水，国家标准规定每毫升不得超过100个，因此可以直接吸取1毫升到平板进行培养。 2．培养时间。与食品中菌落计数不同，测定水中细菌总数，培养时间采用24h。 3．总大肠菌群的测定方法，由于饮用水和水源水可能的污染程度不同，因此采用不同的接种量，检数表也不相同。 4．当接种量超过1毫升时，一般采用多倍浓度培养液。如配制3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液50mL，加入100mL水样后，总体积为150mL，培养液恢复到正常浓度。 5．滤膜法检测总大肠菌群，一般在检测较大量低浊度水样时采用，大量水样滤过滤膜后，水中所含有的所有细菌均截留在滤膜上。

是亚硫酸品红。方法:用水为吸收液采集样品,甲醛与品红亚硫酸溶液反应后,遇硫酸生成蓝色化合物的特性进行定量分析。

品红亚硫酸法测定酒中甲醇为国标方法.但该法在给定的标准系列范围内,甲醇浓度与吸光度不呈正比例关系.因此,按该法规定的操作条件所得的标准曲线不呈直线,显色后颜色的稳定性也很差,影晌样本测定的准确度和精密度.

需要保证亚硫酸品红的浓度适当，注意不要参入其他物质。曾经做实验时，有两瓶碱性品红，一瓶显色，另一瓶不显色。

亚硫酸氢钠，可以使品红溶液褪色

总的来说，有以下几种性质的

1、吸附性；活性炭是吸附性使其褪色的,但是是永久性的褪色。

2强氧化性；过氧化钠、臭氧、溴水，碘水等具有强氧化性的物质，是氧化性使其褪色的,是永久性的褪色。

3化学反应；二氧化硫，是由于加合反应使其褪色,二氧化硫和品红重某种物质进行反应使其褪色,但是是短暂的可逆的，加热后品红又会变红。

最后注意,凡是永久性让品红褪色的肯定破坏了品红的内部结构