DNA提取是为什么要加入两倍体积无水乙醇

DNA 溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时,乙醇会夺DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混 合,其乙醇的最终含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇来替代懈水乙醇。

但是加95%的乙醇使总体积增 大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。

折中的做法初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙醇,最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA.一般在室温下放置15-30分钟即可。

扩展资料：

酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速离心后取上清，所得DNA大小为100-150kb。甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）

表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。

碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。

参考资料来源：百度百科-dna提取

核酸不溶于乙醇，所以可以使用乙醇对核酸进行漂洗，使残留的杂质溶解于乙醇，并最终通过离心去除。可总结为去除DNA中的残留杂质（对混杂的RNA无效）。

提取时，保证核酸一级结构的完整性；核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。

扩展资料：

通常与已知分子量的标准DNA片段一起电泳，经比较可获知DNA标本大小。如条带拖尾，系加入DNA量太多或凝胶未制好。若DNA分子量小或一片模糊，表明DNA有降解。

破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

DNA难溶于乙醇，DNA加入无水乙醇后放冰箱会分层。

无水乙醇(Ethanol absolute)，是指纯度较高的乙醇水溶液，是乙醇和水的混合物。一般情况下称浓度99.5%的乙醇溶液为无水乙醇。

2.降低分子运动，易于形成沉淀

3.增强DNA分子柔韧性，防止DNA断裂。

核酸分子与无水乙醇的折光率是不同的，如果你看不见两种物质的界面那么我确实无法解释你遇到的问题，做分子这么长时间了你说的问题我还真是头一次遇到。

（2）将粗提取的DNA丝状物加入2mol/L的NaCl溶液中，此时DNA溶解度较大，过滤后，DNA主要存在于滤液q中，纱布上的粘稠物Q中DNA含量较少，可以丢弃；

（3）将粗提取的DNA丝状物加入体积分数为95%的酒精溶液中，DNA在酒精中的溶解度很低，过滤后DNA主要存在于纱布上的粘稠物R中，滤液r中DNA含量很少，可以丢弃．

故选：D．

一、步骤

于最多体积450 μl 的DNA 样品中，加入1/10体积pH4.2的3 mol/L NaAc, 快速颠倒以混匀。

加入2倍体积95%乙醇或无水乙醇，充分混匀。

样品踩于冷环境中沉淀：-20℃ 过夜，或－70℃30 min, 或干冰中5 min 。

使用干冰进行乙醇沉淀

用锤子将干冰砸成粉末，再将管子插入粉末；或将干冰砸成小块，置于抗冻容器中，加入95% 乙醇捣成稀泥，插入管子。 注意：乙醇会洗去标签。

图一  离心之后离心管中分为两层

1:上县为水相，包含着DNA ，下层为有机相，包含蛋白质。通常存水相与有机相之间有一个中间层，可见一个白色带， 这是一些被抽提出来的蛋白质。在你吸取水相的时候，不要碰那个白色带。

高速离心样品15 – 30 min, 转速至少12000g, 如果没有冷冻离心机，将离心机置于4℃ 。

除去上清，上清可以倒入下水道中。

离心管倒置于纸巾上吸干。

预冷的70％乙醇洗涤沉淀。

按步骤6干燥或使用真空浓缩机。

用pH8.0 的TE (10mmol/L Tris· HCI, 0.1 mmol/L EDTA) 重悬DNA 。如果沉淀不能完全溶解，加入更多的TE, 将样品保存于4℃。

三、温馨提示

在处理大分子DNA （大于30 kb) 时要特别小心，由于DNA 样品不能抹荡，只能颠倒或转动混匀。去除表面的氯仿，代替用乙醇沉淀DNA 样品的是， DNA 溶液需要对大体积的冷TNE 溶液进行透析或用水饱和的乙醚抽提。