如何从环境中分离高效苯酚降解菌株

苯酚是重要的有机化工原料，用它可制取酚醛树脂、己内酰胺、双酚A、水杨酸、苦味酸、五氯酚、2,4-D、己二酸、酚酞n-乙酰乙氧基苯胺等化工产品及中间体，在化工原料、烷基酚、合成纤维、塑料、合成橡胶、医药、农药、香料、染料、涂料和炼油等工业中有着重要用途。

此外，苯酚还可用作溶剂、实验试剂和消毒剂,苯酚的水溶液可以使植物细胞内染色体上蛋白质与DNA分离，便于对DNA进行染色。

广泛用于制造酚醛树脂、环氧树脂、锦纶纤维、增塑剂、显影剂、防腐剂、杀虫剂、杀菌剂、染料、医药、香料和炸药等。

扩展资料

已经有许多苯酚降解菌株得到了分离和研究。

已分离鉴定的微生物包括根瘤菌（rhizobia）、藻类 （alga Ochromaonas）、酵母菌（Yeast trichosporon）、醋酸钙不动杆菌 （A.calcoaceticus）、 假单胞菌 （pseudomonas.Sp)、真养产碱菌（Alcaligenes eutrophus)、 反硝化菌（Denitrifying bacteria）等苯酚降解菌。

最常见的酚降解菌是假单胞菌（Pseudomonas）和不动杆菌（Acinetobacter），它们对酚的最大降解浓度一般在 1 200 mg/L 以下。

沈锡辉等分离到 1 株能以苯酚、苯甲酸、对甲 酚、苯为唯一碳源和能源生长、具有同时降解单环和 双环芳烃能力的细菌菌株，经生理生化、16SrRNA 基 因序列分析等鉴定为红球菌 PNAN5 菌株。在温度为 20～40 ℃，pH7.0～9.0 范围内该菌株降解苯酚的效率 保持在 80% ～100%之间，苯酚浓度在 2～10 mmol/L 范围内变化对降解效率没有明显的影响。

该菌株通 过邻苯二酚 1，2—双加氧酶催化的开环途径降解芳 烃，不同于已知的浑浊红球菌，后者是通过邻苯二酚 2，3—双加氧酶催化芳烃降解。

参考资料来源：百度百科-苯酚

自然界中大多数危险的污染物是酚类物质，它们在环境中稳定存在。漆酶能氧化酚类化合物，并将氧还原成水。因此，具有较高漆酶活性和底物亲和力，且能忍受恶劣环境条件的真菌菌株具有巨大的应用潜力。分泌耐盐漆酶的真菌可用于处理高盐和富含苯酚的工业废水，如椰壳纤维废水和纺织废水，这些废水在进行微生物处理前通常必须稀释好几倍。Divya等（2013）从椰壳沤麻场分离到一株耐盐的木霉菌，基于形态特征和rDNA序列将其鉴定为绿色木霉（T.viride）。椰壳沤麻废水含有很高的盐分和BOD，将这些废水直接填埋会导致废水的渗漏，废水中富含多酚类物质，如苯甲酸、对-羟基苯甲酸、藜芦酸、龙胆酸、丁香酸、对-香豆酸、香草酸和肉桂酸，从而污染地下水和地表水。多酚类物质对动植物的毒性作用使它们很难生存。相对于其他分泌漆酶的真菌，光照条件对该木霉菌株漆酶的分泌影响不大，而盐度能增强漆酶的分泌。经过96h的培养，该菌株能有效去除纺织废水、椰壳纤维和木材加工废水中的酚类物质。漆酶是一类氧化还原酶，含有铜离子的催化中心，在木质素降解中起到至关重要的作用。由于其较低的底物特异性和强氧化能力，漆酶在工业上应用广泛，如椰子壳的生物漂白、纺织染料脱色、化工中间体的酶转化、生物制浆、预防酒脱色、用木质素生产有价值的化合物以及土壤生物修复、环境酚类污染物的生物降解和内分泌干扰物的去除。多种真菌都能产生漆酶。对真菌漆酶的比较研究表明，这些酶尽管来源不同，而它们对不同酚类化合物的特异性相似，但在其诱导能力、酶的形式、分子量、最适pH和温度等方面存在明显的差异。

（2）④与⑤培养基的主要区别在于④的培养基没有加入苯酚作为碳源，⑤培养基的中加入苯酚作为碳源．使用释涂布平板法或平板划线法可以在⑥上获得单菌落．采用固体平板培养细菌时要倒置培养，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基．

（3）实验过程中防止其它微生物的污染应该做到从制备培养基到接种与培养等全部实验过程要无菌操作，如培养基灭菌、接种环境灭菌、接种过程无菌操作．

（4）设计实验如下：用同样苯酚浓度的培养液培养不同菌株，一定时间后，测定培养液中苯酚含量．

故答案为：

（1）苯酚  

（2）④的培养基没有加入苯酚作为碳源，⑤培养基中加入苯酚作为碳源       释涂布平板法或平板划线法

（3）从制备培养基到接种与培养等全部实验过程要无菌操作，如培养基灭菌、接种环境灭菌、接种过程无菌操作 

（4）用同样苯酚浓度的培养液培养不同菌株，一定时间后，测定培养液中苯酚含量．

（2）④与⑤培养基的主要区别在于④的培养基没有加入苯酚作为碳源，⑤培养基的中加入苯酚作为碳源；使用释涂布平板法或平板划线法可以在⑥上获得单菌落．采用固体平板培养细菌时要倒置培养，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基．

（3）取5支洁净培养瓶→分别加入相同培养基加等量的苯酚，→分别接种5种等量的来自不同菌株的菌种→在相同的适宜条件下培养相同时间→再检测这5支瓶内培养基的苯酚的含量，从而比较不同菌株降解苯酚能力的大小．

（4）从制备培养基到接种与培养等全部实验过程要无菌操作：无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法．获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵：a．实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和和消毒；

b．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌；

c．为避免周围环境中微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；

d．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触．

故答案为：

（1）苯酚　A　平板菌落计数（活菌计数或菌落计数）

（2）④含除苯酚外的其他碳源，⑤以苯酚为唯一碳源　平板分离（稀释涂布平板或平板划线分离）　避免培养过程产生的水分影响微生物的生长

（3）用同样苯酚浓度的培养液培养不同菌株，一定时间后，测定培养液中苯酚含量

（4）培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程无菌操作

2. 易培养 生活周期短

(2)灭菌 消毒 损伤DNA的结构

(3)比例合适

（4)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生

5防止杂菌的污染，在腌制过程中注意腌制时间，控制好温度和食盐用量。温度过高，食盐用量不足10%，腌制时间过短都容易使细菌大量繁殖导致亚硝酸盐含量增加

（6)防止腐乳烂块

7毛霉分布广泛，且生长迅速，能在短时间内占据豆腐块，形成种群优势

8豆腐在发酵时，毛霉菌种在较高温度下，使豆腐中蛋白质分解成含硫氨基酸，进而分解成少量硫化氢气体，硫化氢气体有刺激性臭味 豆腐含水量不同 ，发酵条件不同，装罐时加入调料不同

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