苯酚硫酸法测定葡萄糖的标准曲线，以及具体方法！！
标准液的制法：取100mg葡萄糖（104℃烘干至恒重）在100ml的容量瓶定容。分别取溶液1ml、2ml、3ml、4ml、6ml、8ml至100ml的容量瓶中，制成10ug/mg、20、30、40、60、80ug/mg的标准液。
苯酚溶液的制法：称取5g的苯酚，加入95ml蒸馏水，溶解。
反应液：分别取1ml的标准液，加入1ml的苯酚溶液，迅速加入5ml的浓硫酸，震荡摇匀。在沸水浴中加热15min后冷却到室温，在490nm波长下测定其吸光值。
我这两天刚做出来的，但是我的浓度是用的20ug/mg、40、60、80、100、120，其他的细节都是一样的。我只是按照我做的给你说的，你也可以灵活变通，比如沸水浴的时间，波长的选择都是按照自己的实验具体确定的，但是还是有些细节不能忽视的，比如苯酚要求用182℃蒸馏后得到的馏分，如果试验经费允许可以直接买重蒸酚，普通苯酚和重蒸酚价格相差有点大。具体我们可以讨论，我也是试验很多方法自己总结出来的，用苯酚测定糖是个技术活，而且冒着有毒的危险。
表64-1 苯酚-硫酸法标准曲线制作参考表
葡萄糖（40mg/l）mL 蒸馏水（mL）6%苯酚（mL）浓硫酸（mL） OD490nm
1.60.4 1 5 0.093
1.40.6 1 5 0.064
1.20.8 1 5 0.065
1.01.0 1 5 0.047
0.81.2 1 5 0.049
0.61.4 1 5 0.136
0.41.6 1 5 0.072
0.21.8 1 5 0.008
0.02.0 1 5 0
多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。
试剂
1．
浓硫酸：分析纯，95.5%
2．
80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。
3．
6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。（每次测定均需现配）
4．
标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析纯葡萄糖。
5．
15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
6．
5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
7．
6mol/L
氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。
8．
6mol/L
盐酸
操作
1．制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
2．样品含量测定：
①取样品1克（湿样）加1ml
15%TCA溶液研磨，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。最后一次将残渣一起到入离心管。注意：总的溶液不要超出10毫升。（既不要超出离心管的容量）。
②离心，转速3000转/分钟，共三次。第一次15分钟，取上清液。后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。最后滤液保持18毫升左右。（测肝胰腺样品时，每次取上清液时应过滤。因为其脂肪含量大容易夹带残渣。）
③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L
盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。
④定容取样。水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L
氢氧化钠摇匀。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2
ml的样品液，以蒸馏补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖含量。
很高兴为您解答，祝你学习进步！
【梦华幻斗】团队为您答题。有不明白的可以追问！
如果您认可我的回答。请点击下面的【选为满意回答】按钮，谢谢！
