Lepera试剂怎么配,需要现用现配吗
所谓Lepera试剂(Le Pera )就是:偏重亚硫酸钠溶液和苦味酸溶液的混合液,其组成为10 g/L的偏重亚硫酸钠的水溶液,与40
g/L的苦味酸的乙醇溶液按1∶1混合。一般侵蚀1~30秒
(a solution of 1 g sodium metabisulfite in 100 ?
water mixed with 4 g of picric acid dissolved in 100 ? of water, for 1-30 sec
(LePERA, 1979Lawson et al., 1980))。
偏重亚硫酸钠易氧化成硫酸钠,所以最好现用现配。
用于淬灭二氧化硫气体
一般用偏重亚硫酸钠淬灭二氧化硫气体。
淬灭步骤如下:
在偏重亚硫酸氢钠溶液中加入一定量的纯碱,生成亚硫酸钠的悬浮液。通入二氧化硫,生成亚硫酸钠结晶。
实验所需药口及配制
浓盐酸(36—38%),碱性品红,偏重亚硫酸钠(Na2S2O5)
亚硫酸钠(Na2SO3),固绿(fast green),加拿大中性树胶乙醇(30—100%),二甲苯。
药品配制:
1各种浓度的乙醇配制.
21NHCI配制:取浓HCI 82.5毫升加蒸馏水至1000毫升,摇匀。
3Sciff 试剂的配制
0.5克碱性品红,加到已经煮沸的100毫升蒸馏水中,再煮沸3—4分钟,待溶液冷却到50℃时过滤,再等溶液冷到25℃以下时,加入10毫升的1NHCI和1。5克偏重亚硫酸钠,装在棕色瓶中,塞紧瓶子,用黑纸包好,放在暗处,第二天观察,溶液还是淡红色就不能用,只得重配。
偏重亚硫酸钠与1NHCI反应,放出SO2,SO2与碱性品红反应,生成碱性品红--亚硫酸溶液,呈无色。
4漂染液的配制
先配10%的亚硫酸钠溶液。
把10%亚硫酸钠溶液10毫升加200毫升蒸馏水,再加10毫升1NHCI,即成漂当液。
5固绿染色液
0.5克固绿溶于100毫升95%乙醇溶液。
实验步骤:
2.水解 先在恒温水浴箱中准备好恒温60℃的1NHCI。注意一定要控制好温度不能过高,高了醛基要破坏,低了小解不充分,醛基不能释放出来。水解的时间长短要根据材料,以及固定液的种类而定。根据试验结果,取一个适当时间。
因加拿大树胶溶于二甲苯,所以片子一定要经二甲苯透明后才进行封片,操作方法如下:
1.用镊子从二甲苯中取出载玻片,以毛边纸吸干余液。
2.左手开启树胶瓶,右手用瓶中玻璃棒蘸取树胶滴于载玻片上,并随即盖好瓶盖。树胶的用量视盖玻片大小而定。要使树胶在盖玻片下满布,不发生过多或不足。
3镊取洁净盖玻片,以一边浇于载玻片上,然后徐徐放下,使树胶布满盖玻片与载玻片之间。产生气泡的原因是覆盖太快树胶用量不足,或树胶过稠。气泡侵入后,妨碍镜检,且使标本褪色。如有气泡产生,则可以在靠近气泡的一边再滴树胶一滴,然后轻压盖玻片,使气泡逸出。
片子封片后,放在切片木框上,让其自然干燥,即可保存。
过碘酸酒清夜配法:
过碘酸(HIO
.2H
O)
0.4g 95%酒精
35ml M/5醋酸钠(2.72g+蒸馏水100ml)
5ml蒸馏水10ml
保存于冰箱内,用棕色瓶,可用两周.
2)Schiff氏液:
0.5克碱性品红加入100毫升蒸馏水中,时时摇动三角瓶5分钟,使之充分溶解.冷却至50℃后过滤加入10毫升1N盐酸.冷却至25℃,加入0.5-1克偏重硫酸钠,在室温中至少静置24小时,然后密封冰箱保存.
3)
Schiff氏酒精液配置 Schiff氏液
11.5ml
1N
HCI
0.5ml
纯酒精
23ml
4)
亚硫酸水
1%偏重亚硫酸钠10ml
1N
HCI
10ml
蒸馏水
180ml的树胶溶解。
5)哈瑞或迈耶苏木精
略
1.
石蜡切片脱蜡至水(细胞涂片,冰冻切片直接水洗)
2.
蒸馏水洗
3.
过碘酸酒清夜10min
4.
自来水冲洗10min
5.
Schiff氏液10min
6.
流水冲洗5min
7.用哈瑞苏木精或迈耶苏木精染核3min(细胞核染色过深可用盐酸酒精分化)
8.
流水冲洗5min
9.
常规脱水、透明、封固
PAS阳性为红色,细胞核蓝色。