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0.5%冰醋酸水溶液洗c18柱子可以吗

无心的信封
英俊的面包
2023-01-24 23:32:16

0.5%冰醋酸水溶液洗c18柱子可以吗

最佳答案
微笑的篮球
小巧的画笔
2026-05-14 06:20:47

第一、安捷伦的色谱柱有很多种,所以要分清类型去冲洗。

第二、作为普通C18柱,尤其是硅胶基质的普通C18柱,对酸碱盐以及水,都是造成柱子的损坏的流动相构成。水不能过多(除了带AQ的纯水柱,一般各家品牌都有这款防水柱)我个人认为只要超过80%的水的流动相,都会造成C18的寿命缩短。所以做高水相的流动相分析时请注意选合适的柱子。酸对柱子的损伤是不可逆的,一定要控制PH,我个人认为PH在2以下的都要做好费柱子的准备。碱性条件是对于硅胶基质的C18的弱项,一般的硅胶基质的C18碱性条件都不太耐用,但现在也有碱性PH11的柱子,但比较贵。盐对色谱柱的影响主要是盐析造成的,而且是致命。

第三冲洗方法的问题。冲洗方法根据使用的流动相和样品的不同冲洗方法要加以区分。一般不加酸碱盐,水相也不高的情况(如甲醇水60:40),无需太过冲洗,冲洗的目的就是为了把样品的杂质冲出即可。保存流动相保存即可。酸和碱的条件下,原则上是将酸碱冲出色谱柱,保存在甲醇水即可(如60:40比例可根据要使用的流动相,只要水相不高即可)。盐的条件比较麻烦,处理不好,不仅仅色谱柱出问题而且仪器也比较麻烦。常用的就是高水相流动相甲醇-水(10:90)将盐冲出(注意压力),然后用纯甲醇冲洗(这一步是恢复高水相对色谱柱的损伤),最后保存在一般的甲醇水体系即可。

第四点,冲洗的时候注意是压力,最好是从小流速开始慢慢提升流速到压力许可的范围。冲洗的时间,准确的是流量一般色谱柱的冲洗都要达到10-20倍的柱体积。

最新回答
健壮的外套
冷傲的溪流
2026-05-14 06:20:47

冰醋酸即乙酸极性很大,那么它作为洗脱试剂来说效果不佳,如果洗脱剂的极性远大于被分离物的极性,则洗脱剂将受到吸附剂的强烈吸附,从而将原来被吸附的待分离物“顶替”下来,随多余的洗脱剂冲下来而起不到分离作用,通俗来说就是需要色谱柱分离的物质反而会被冲下来而不分离。。望采纳~~~

想人陪的学姐
忧心的御姐
2026-05-14 06:20:47
冰醋酸在HPLC流动相的浓度和被分析物的性质有关,一般在0.1%——1%左右。加酸的目的是增加分离度、改善峰形。如一些在水中部分解离的物质,由于解离后以离子形态存在于流动相中,在色谱柱上保留极差,因此添加一些醋酸,抑制其解离,以分子形态被吸附在柱子上,从而增加和其他物质的分离度。

至于醋酸的浓度和流动相的比例,则要根据你的被分析物和其他色谱条件来优化,具体问题具体分析。

不知道这样回答满意不

忧郁的羊
土豪的蓝天
2026-05-14 06:20:47
要注意的有两点:

1. 流动相中加酸的目的,是为了让酸性的目标物处于游离型,增加其被保留的能力。

2. 色谱柱如果长时间用PH较低的酸性流动相,它对酸性物质的保留特性会保持一段时间。也就是说,如果你以前采用的都是正常条件,偶尔有一次忘了在流动相中加酸,有可能对结果没有影响。

如何判断检测结果是否正常可用?

如果你是用外标法测2.4.6-三氯酚的含量,你可以对比以前正常状况下的保留时间和峰型(理论板数),若差异不大,结果应当是可以用的。

你还可以用正常条件测一次,与之比对。

善良的世界
谦让的台灯
2026-05-14 06:20:47
现在一般说的就是高效液相色谱(HPLC),原理如下文,但具体的操作就要看具体的仪器了,因为国内外的不同厂家生产的操作方案可能有所不同,而且你去面试要使用HPLC的话建议你最好先去找台能使用的熟悉下,毕竟这玩意的价格不是一般的。而有些普通的液相色谱就很简单了,只要你看懂了原理就能进行操作,没有什么特别的难度。

液相色谱法简介

气相色谱不能由色谱图直接给出未知物的定性结果,而必须由已知标准作对照定性。当无纯物质对照时,定性鉴定就很困难,这时需借助质谱、红外和化学法等配合。另外大多数金属盐类和热稳定性差的物质还不能分析。此缺点可高效液相色谱法来克服。在经典液相色谱的基础上,引入了气相色谱的理论与技术,在70年代初建立了高效液相色谱分析法(以HPLC表示)。在常压下操作的液相色谱,分离一个样品往往长达几小时至几十小时,因此工作效率很低。人们曾对这种经典液相色谱法试用了柱前加压或柱后减压的办法来提高流速,以缩短分离时间,但是结果失败了。根据液相色谱理论,因为随着载液(流动相)流速的提高,板高则增大,所以柱效会显着降低。随着生产技术的提高,人们制成了细小(<10μm)而高效的填充物,从而使柱效大大提高。但是随着填充物粒度的减小,柱压降显着增大,为了得到合理的载液流速,使用了高压;输液泵,使流速达到1~10mL/min。从而使分析一个多组分样品只需几分钟到几十分钟时间。随着高效固定相、高压泵和高灵敏度检测器以及电子技术和计算机技术的应用,70年代以业逐步实现了液相色谱分析的高效、高速、高灵敏和自动化操作。因此人们常称它为高效液相色谱或现代液相色谱,以区别于经典液相色谱。高效液相色谱法的分类与经典液相色谱法一致。按固定相的聚集状态不同分为液固色谱法和液液色谱法。按分离原理不同分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶色谱法四类。

高效液相色谱所用基本概念:

保留值等色谱分析有关术语,以及分配系数、分配比、塔板高度、分离度、选择性等方面均与气相色谱相一致;高效液相色谱所用基本理论:塔板理论与速率理论也与气相色谱一致。因液相色谱以液体代替气相色谱中的气体作流动相,则速率议程H=A+B/?+C?。式中:纵向扩散项(分子扩散项)B/?对板高的影响与气相色谱不同,由于液相色谱中组分分子在流动相中的扩散系数Dm仅为气相色谱中的万分之一,因此纵向扩散项对板高的影响可以忽略不计。于是影响液相色谱的主要因素是传质项Cu。由图14—可知,气相色谱(GC)的流动相流速u增大时,板高H显着增大(即柱效显着降低),而液相色谱(LC)的流速增大时,板高增大不显着(即柱效降低不显着)。这说明高效液相色谱也有很高的分离效能,此外,气相色谱的载气权数种,其性质差别也不大,对分离效果影响也不大。而液相色谱的载液种类多,性质差别也大,对分离效果影响显着。因此流动相的选择很重要,并且在选择流动相对应注意以下几点:流动相对样品有适当的溶解度,但不与样品发生化学反应,也不与固定液互溶;流动相的纯度要高(至少分析纯)、粘度要小,以免带进杂质和组分在流动相中扩散系数下降;流动相应与所用检测器相匹配,不应对组分检测产生干扰作用。高效液相色谱不但具有高效、高速、高灵敏度的特点,还由于它的流动相(载液)种类比气相色谱的流动相(载气)多,因此可选用两种或多种不同比例的液体作流动相,从机时可提高选择性。此外,液相色谱的馏分比气相色谱易于收集。便于为红外、核磁等方法确定化合物结构提供纯样品。由于高效液相色谱法具有以上特点,它适于分离、分析沸点高、热稳定性差、分子量大(大于400)的气相色谱法不能或不易分析的许多有机物和一些无机物,而这些物质占化合物总数的75~80%。因此它已广泛用于核酸、蛋白质、氨基酸、维生素、糖类、脂类、甾类化合物、激素、生物碱、稠环芳烃、高聚物、金属螯合物、金属有机化合物以及多种无机盐类的分离和分析。但是,高效液相色谱的固定相的分离效率、检测器的检测范围以及灵敏度等方面,目前还不如气相色谱法。此外对于气体和易挥发物质的分析方面也远不如气相色谱法,因此高效液相色谱法和气相色谱法配合使用可互相取长补短,相辅相成。

1.分离原理

凝胶色谱,又称空间排阻色谱。它是利用某些凝胶对混合物各组分因分子量不同,其阻滞作用也不同而进行分离、分析的方法。凝胶色谱的分离要理和其它色谱法不同,它类似于分子筛的作用,但凝胶的孔径要比分子筛大得多,一般为几百至几千埃。色谱柱内填充具有一定大小孔穴的凝胶。当样品进入色谱柱后,不同大小的样品分子(图14—2中以黑点表示)随流动相沿凝胶颗粒(图14—2中以空心圈表示)外部间隙和凝胶孔穴旁流过,体积在的分子因不能渗透到凝胶孔穴里而得到排阻,因此较为顺利地通过凝胶柱而较早地被流动相冲洗出来。中等体积的分子产生部分渗透作用,小分子可渗透到凝胶孔穴里去而受阻滞,因有一个平衡过程而较晚地被流动相冲洗出来。这样,试样组分基本上按分子大小受到不同阻滞而先后流出色谱柱,从而实现分离目的。光凝胶色谱采用水溶液作流动相进,称为过滤凝胶色谱(HFC),而用有机溶剂为流动相时,称为凝胶渗透色谱(GPC)。

2.固定相

凝胶色谱的固定相凝胶,是含有大量液体(一般是水)的柔软而富于弹性的物质,是一种经过交联而具有立柱网状结构的多聚体。根据凝胶的交联程度和含水量的不同,分了软质、半硬质和硬质三种。软质凝胶(如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶等)交联度低,膨胀度大,容量大,可压宿,不能用于高压(使用压力低于3.5kg/㎝2或更低),主要用于含水体系的常压凝胶色谱,半硬质凝胶(如苯乙烯一二乙烯基苯交联共聚凝胶),容量中等,渗透性较高,压力可用到70kg/㎝2。适用于非水溶剂流动相;硬质凝胶(如多孔硅胶、多也玻球等),膨胀度小,不可压缩,渗透性好,可耐高压,适于高流速下操作。

3.流动相

在凝胶色谱中,为提高分率效率,多采用低粘度、与样品折光指数相差大的流动相。常用的流动相有苯、甲苯、邻二氯苯、二氯甲烷、1,2一二氯乙烷、氯仿、水等。

坚定的树叶
糟糕的招牌
2026-05-14 06:20:47
甲醇、乙醇、丙酮,乙酸乙酯的沸点在

50-80度之间。

而冰醋酸温度高达118度。

因此色谱的升温梯度建立是:

从40度开始,每分钟升温2-3度,一直到85度。然后每分钟5度, 一直到120度.

最后每分钟10度升温到200度(去除所有挥发性物质)。

生动的小伙
苗条的薯片
2026-05-14 06:20:47
所谓的分析纯等是指试剂的纯度级别,也就是作为试剂的一种含量与纯度的区别。而试剂往往是小瓶包装,通常为500g/瓶。分析纯是指做分析测定用的试剂,杂质非常少,不妨碍分析测定;化学纯是指一般化学试验用的,有较少的杂质,也不妨碍实验要求;而色谱纯是指进行色谱分析时使用的标准试剂,在色谱条件下只出现指定化合物的峰,不出现杂质峰。而且对于化学纯,分析纯,优级纯,不同的产品要求往往也不一样。

舒适的御姐
称心的小丸子
2026-05-14 06:20:47
可以使用顶空气相色谱法。

顶空分析是通过样品基质上方的气体成分来测定原样品中的含量;其依据是一定条件下,气相和液相或固相之间存在分配平衡。顶空进样又分为静态顶空和动态顶空(吹扫-捕集)。使用气相色谱仪测定混合液中乙酸含量,方法必须是使样品汽化,后由载气使其通过色谱柱分离。

秀丽的黑米
热心的方盒
2026-05-14 06:20:47
首先 pH值对结果很有影响,pH值保证你的样品处在分子状态(即极性最小的状态),这样便于反相色谱分离,所以你调pH值时候一定要准确。其次你冲柱子的方法是对的,用过缓冲盐后柱子必须以高水相冲洗,一般 1mL/min 冲30min以上,再换高有机相冲,然后保存在高有机相中。冲柱子的时候你可以把乙腈换成甲醇,甲醇便宜些且对仪器保护要好些。基线不稳可能是进了气泡,你做实验之前排了气泡没?流动相过膜、脱气没?进样量似乎太大?一般都是进20uL(如果行业标准是50uL 你就按行业标准)柱子长度对分离影响不大,只是物质出峰时间会稍稍提前。柱温室温,一般室温为25℃,液相色谱柱温一般对分离影响不大。不知道你用的是什么牌子的柱子,可否告知型号?