苯酚法提取rna的特点

氢氧化钠与苯酚反应变成苯酚钠（一种盐），用蒸馏可将溶液中乙醇去除（沸点低），然后通入过量的CO2，苯酚钠和CO2会生成苯酚沉淀以及碳酸氢钠，此时用过滤或者是静置分液都行。

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苯酚法提取rna的缺点细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。因此，提取RNA时要把RNA与蛋白质分离并除去。

将细胞置于含有十二烷基磺酸钠（Sodium dodecyl sulfate,SDS）的缓冲液中，加等体积水饱和酚，通过剧裂振荡，然后离心形成上层水相和下层酚相。核酸溶于水相，被苯酚变性的蛋白质或者溶于酚相，或者在两相界面处形成凝胶层。

RNA提取时，就变性剂的选择来说，CTAB（CTAB法）比异硫氰酸胍（RIZOL试剂法）和　SDS（改良热硼酸法）更有效。

就CTAB法来说，由于以CTAB为变性剂，同时加入PVP和β一巯基乙醇共同作用变性蛋白、抑制RNase的活性，使用无水乙醇或异丙醇沉淀杂蛋白和总核酸等，然后再选择性地分离出RNA。

可以60℃下水浴加热成液体，先配置80%苯酚：80g苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20g水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。

配置方法:将装有苯酚的试剂瓶放在40~50度的水浴中，待苯酚融化有液体生成，然后乘热用滴管吸出滴在放置在天平上并去皮的烧杯中，称取一定质量的苯酚，然后加入一定体积的水，混匀即可。

扩展资料：

苯酚的熔点是58℃，你在60℃的水浴锅中将苯酚放进去，细管吸出来5g定容到100g就是5%的苯酚了。

苯酚低温时结晶，水域加热一下，溶化后再配。

在65摄氏度的水中溶解5g苯酚，定容100g水或100ml水。

苯酚要重蒸馏，然后称取5g苯酚加95g水使溶之，然后置冰箱中避光长期保存。

苯酚是有机物，它几乎不溶于水.所以用水是不能配置出6％的苯酚的，一般是用一些酒精，汽油等有机溶质或者是双氧水等一些非极性共价键组成的物质的溶剂里面。

需要说明的是6％的苯酚溶液，里面的溶剂不一定就是指水，只不过水是日常最常用的溶剂而已。

参考资料来源：百度百科——苯酚

利用苯酚法可以直接从动物组织中提取RNA,组织匀浆用苯酚处理并离心后,RNA即溶于上层被酚饱和的水层中,DNA和蛋白质则留在酚层中,向水层加入乙醇后RNA即呈白色絮状沉淀析出.操作步骤

1 称取3克肝组织,剪成小块,置于研钵中,加3-4滴90%的苯酚溶液后研磨,匀浆中加入15mL水,转移至三角烧瓶中,加10mL酚至三角烧瓶中.2 室温下剧烈振荡45分钟,于3000rpm离心20分钟.3 用吸管将上层液吸出,并加入1/2体积的氯仿-异戊醇,于低温下振荡20分钟,以除去提取液中的蛋白质,以2000rpm离心10分钟,吸出上层清液,向上清液中加入醋酸钾粉末,使最后浓度大约为2%,装入小烧杯后,一边搅拌,一边缓慢加入两倍于上清液体积的95%乙醇以沉淀RNA.4 于冰浴中放置半小时后,以1000rpm离心5分钟,沉淀再用少量75%乙醇洗涤1-2次,收集沉淀,置于干燥器内干燥,称重.5 测定A260/A280的值,应大于1.85,若小于1.85,则说明含杂蛋白和DNA高了.

苯酚/氯仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂，反复抽提，使蛋白质变性，SDS（十二烷基磺酸钠）将细胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA 的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子，核蛋白变性降解，使DNA从核蛋白中游离出来。

DNA易溶于水，不溶于有机溶剂。蛋白质分子表面带有亲水基团，也容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子能顺利地进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液。当有机溶液存在时，蛋白质的这种胶体稳定性遭到破坏，变性沉淀。

离心后有机溶剂在试管底层（有机相），DNA存在于上层水相中，蛋白质则沉淀于两相之间。酚–氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白质。氯仿的作用是有助于水相与有机相分离和除去DNA溶液中的酚。抽提后的DNA溶液用2倍体积的无水乙醇在NaCl存在下沉淀DNA，回收DNA用70%乙醇洗去DNA沉淀中的盐，真空干燥，用TE缓冲液溶解DNA备用。

剧烈振荡可使DNA断裂，故操作时应尽量轻柔、缓慢地颠倒混匀。

要获得高纯度DNA，可加入蛋白酶K降解蛋白质。

DNA在260nm处有一吸收峰，而蛋白质在280nm处有吸收峰。当纯度比值小于1.6时，应考虑进行再次纯化。

整个实验须接触多种有毒、有腐蚀性试剂，故应注意操作规范安全。