溶出介质中有十二烷基硫酸钠，色谱条件如何选择

反相系统吧？

用10%或者15%的甲醇水或者乙腈水，1.0ml/min冲洗1小时，然后在用甲醇或者乙腈封存色谱柱。

十二烷基硫酸，也就是SDS，是一种表面活性剂。对色谱柱的伤害挺大的。尽可能地多冲一会儿甲醇水，尽量把柱子里面残留的东西冲出来。

液相很少会用，因为这个是表面活性剂。

液相色谱柱都是键合在一起的。用这个很容易让键合分散，色谱柱很快就坏了。

我当时做溶出，样品是2%的sds，每次打20ul样品，色谱柱也很快就坏掉了。

1.1>调高离子强度，降低缓冲液PH值。例如将磷酸的用量提高。假如你现在流动相PH至为4.0，则通过调高磷酸用量将PH调至3.5。2010版药典要求加1.44g和0.68ml，你可以试试加1.50g和0.8ml。（这个过程要注意缓冲液的PH值，不能低于色谱柱下限）

1.2>提高缓冲液的比例，例如将500:500:60改成600:500:60

1.3>更换高效色谱柱永远是最快最简单的办法。

1.4>如果你不怕麻烦的话，可以自己摸索以下梯度洗脱，这个太麻烦。

第二：你可以用USP35或EP7.0的色谱条件试试。

第三：中国药典2010版中明确要求十二烷基硫酸钠的加入量是1.44g，你为何要改为1.11g？

一、使用前准备

1、使用前认真阅读色谱柱的说明书，了解色谱柱的种类，选用合适的色谱柱。

在选用色谱柱时，应充分考虑所分析样品的极性大小、化合物的种类数量、结构特征。根据化合物的性质，选择合适的色谱柱和分析条件。不同类型的色谱柱使用的流动相不同，使用错误的流动相会降低柱效，损伤柱子。如分析极性较大的多糖类成分，应当采用亲水性的反相填料。对于首次使用的色谱柱，还应按照厂家的出厂说明对色谱柱进行低流速的冲洗活化，活化后的色谱填料共价键键合力增强，柱效提高，寿命延长。

2、样品的准备与预处理

我们的经验是样品纯化得越干净，色谱柱的使用寿命越长。许多样品，尤其是生物样品，组份非常复杂，对色谱柱的损伤性较大，不经预处理的样品直接分析，会严重缩短色谱柱的使用寿命。因此，在样品的准备时需对样品进行预处理，包括准备溶剂的选择、样品过滤等。

2.1 制样溶剂的选择

制样溶剂通常需要考虑样品的溶解性、与流动相的相溶性、色谱填料的适用性等方面。这类溶剂需对样品有较大的溶解性，而且与流动相溶，洗脱强度最好低于流动相或梯度洗脱中的起始流动相，以免影响样品分离。目前许多手性色谱柱都禁止使用DMSO、四氢呋喃、氯仿等溶解样品，这些溶剂会破坏固定相的结构，从而缩短色谱柱的使用寿命。此外，制样溶剂还应与色谱系统其他部件如高压泵、进样器等相适用。

2.2 制样溶剂过滤

在进样前需过滤样品溶液，如采用0.22μm的微孔滤膜除去不溶性微粒，以免堵塞柱头滤片及柱内填充床。在条件允许的情况下，最好采用与色谱柱同种填料的固相萃取柱过滤进样溶液，可以减少在色谱柱上死吸附的物质或易堵塞的大分子样品。如生物样品中的小极性的油脂类易于沉淀死吸附在C18反相色谱柱中，导致柱效降低、柱压升高。采用SPE柱过滤后，可以有效减少在色谱柱中附着沉积的死吸附成分，保护色谱柱不被污染，保证其使用寿命。

2.3 其他，如溶液浓度、进样量等

分析物的某些性质同样能影响色谱柱的使用寿命。强酸、强碱性物质和蛋白质类生物大分子，它们能与固定相填料作用，或生成不可逆吸附层，改变填料表面特征，使色谱柱性能发生变化，最终导致分离失效。此外样品的进样量过大、超载都会影响色谱柱的分离性能和使用寿命。

二、使用过程中的维护

1、流动相的使用和分析方法的选择

流动相的纯度、溶剂的选择、适当分析方法的使用与色谱柱的性能和寿命密切相关。

1.1 流动相的选择

所选用的流动相应与色谱柱、待分析样品相兼容，即样品、样品溶液和流动相是互溶的。流动相能够溶解样品，避免样品沉淀析出；同时还要求流动相与样品不发生化学反应，并且要求与色谱柱不能发生溶解或化学反应。

色谱分析应选择色谱级的流动相。通常分析纯的溶剂含有微量杂质，如有机溶剂中的聚乙二醇、无机铁离子（Fe+）等，作为流动相大量使用后会引起色谱柱性能变化。最好是使用色谱纯级或者更高纯度的试剂，尽量降低溶剂中杂质带来的损伤。

1.2 流动相过滤

使用色谱纯试剂配制流动相，使用前需经0.45μm或者更小孔径的滤膜过滤和超声脱气处理，减少灰尘、微生物等杂质堵塞色谱柱，尤其是水溶性流动相易引起微生物生长而造成色谱柱阻塞。流动相最好是现配现用，放置时间最好不要超过2天。

1.3 流动相的pH和缓冲盐的选择

极端pH的流动相会破坏填料内的共价键，“溶解”硅胶，使固定相流失，从而降低柱效，缩短使用寿命。以硅胶作基质的固定相一般要求pH在2.5~7范围内使用。长期在pH>7或pH<2使用环境中，硅胶会逐渐溶解或者表面键合的官能团会逐渐流失。如果一定要用高或低pH的流动相，最好是选用相适应的色谱填料。

1.4 流速的控制

目前粒径为1.8μm的UPLC的流速常设为0.3~0.5mL/min，粒径为5μm的HPLC分析流速不大于1.5mL/min，粒径为10μm半制备柱流速控制在3mL/min。流速过大，压力升高，会引起色谱填料冲垮、塌陷。

2、色谱仪器的操作

每次开机使用分析仪器时，泵启动太快，流速和柱压的瞬间升高，柱床受到冲击，引起紊乱，产生空隙，影响色谱柱的使用寿命。因此，在操作实验开始时，应当将流速和柱压逐渐增加。

3、保护柱的使用

“保护柱”是与所使用液相色谱柱相同填料的短型色谱柱，可以有效地阻拦容易损坏色谱柱的大分子和不溶性颗粒，过滤易沉着色谱柱上产生死吸附的物质，从而延长色谱柱使用寿命。

4、柱温的控制

不同类型的色谱柱耐受的温度各有差别。通常色谱柱温维持在10～40℃之间，能够充分、最优的发挥色谱柱的性能。超出色谱柱温度范围，尤其高于柱温范围，会增加对流动相中化学物质的吸附，引起色谱柱固定相结构的改变；此外，还可能引起柱床塌陷，改变峰形，降低柱效，产生不可逆性的损伤。

三、使用后的清洗与保存

柱子使用一段时间后，总会有一些杂质累积在柱内，保留值较弱的物质，一般能快速从色谱柱冲洗出来，不产生干扰；中等保留强度的杂质能被缓慢冲洗出来，但对分析产生一定的干扰；强保留杂质通常聚集在柱头或色谱柱中，难以被洗脱，甚至可能与填料发生相互作用，形成新的伪固定相，改变色谱柱的分离性能。通常表现为柱压升高、基线不平、色谱双峰、分离性能降低等。这些被污染的色谱柱经清洗后，可恢复部分甚至大部分离能力。因此使用后认真、定期清洗，不仅能延长色谱柱的使用寿命，节省资源，还能大大降低分析的成本。以我们常用的硅胶基质色谱柱为例，简要阐述常用色谱柱的清洗与再生。

1，色谱柱的清洗与再生

色谱柱的使用前后都需经较强的流动相冲洗。通常情况下，在使用硅胶、氧化铝、极性键合相色谱柱时，每次用完后可先用二氯甲烷或正己烷等溶剂低流速长时间的冲洗；键合反相硅胶色谱柱、离子交换色谱柱和凝胶色谱柱可先用高比例的水（甲醇水混合溶剂）冲洗，再用100%甲醇冲洗。此外，色谱柱低流速的反相冲洗能够有效除去堵塞在柱头或筛板上的杂质，以及清洗聚集在柱头部位的较强吸附物质。有些色谱柱在许多方法处理污染失效后，反过来使用，不仅柱压降变小，柱效也可恢复如，延长了色谱柱的使用时间。

若上述常规清洗法无法清除污染物，则有必要采用更强的洗脱剂清洗，如反相材料的冲洗顺序为：100%甲醇→100%乙腈→乙腈∶异丙醇(75∶25，V/V)→100%异丙醇。或者可以采用较低浓度的稀酸或稀碱可将有机溶剂不能洗脱的污染物除去。例如采用0.05mol/L的硫酸和流动相溶液冲洗色谱柱，可取得良好效果；或者采用1%氢氧化铵或50%二甲基甲酰胺水溶液，对聚集在柱头的污染物具有良好的清洗效果。

如果分析时流动相中含有缓冲液（通常为盐溶液），冲洗时宜用水取代缓冲液与有机相混合冲洗色谱柱（20倍柱体积）；再用100%有机溶剂冲洗。若直接用100%有机溶剂冲洗，可造成缓冲液沉积析出，从而损坏柱子品质。同样的，若流动相中加入酸、碱溶液时，也应当按照上述方法，先采用高比例的水（水：甲醇10:90）冲洗20倍柱体积，防止强酸强碱溶液导致硅胶基质填料的溶解。

蛋白质对反相色谱柱的污染已成为常见问题，尤其在分离未经处理的动物组织等生物样品。一般情况下，纯有机溶剂如乙腈或甲醇不能很有效地清洗色谱柱，因而需要一些特殊的清洗方法。首先尝试用高比例强极性溶剂的流动相进行冲洗，如乙腈∶异丙醇（1:2,V/V）；或使用0.1%的三氟乙酸水溶液或者0.1%乙酸水溶液清洗。此外，还可以采用1%十二烷基硫酸钠 (SDS)，然后用5%～95%乙腈/水（含0.1%TFA）梯度冲洗，去除蛋白污染物效果也较好。

若采用上述的条件清洗后色谱柱仍不能达到理想的效果，有必要将固定相从色谱柱内取出，进行清洗再生后重新装填。具体操作是：将色谱固定相从色谱柱内打出后，用甲醇浮选，去除其中细小的破碎颗粒；然后用二甲基甲酰胺、丙酮、甲醇超声清洗；最后干燥固定相，重新装填色谱柱。经该方法处理的色谱柱，性能可得到显著提高。

2、色谱柱的保存

色谱柱的保存应按照使用说明书中所指明的溶剂进行填充，尽可能的贮存于100%有机溶剂。色谱柱不能贮存在水或含水量高的溶剂中，会引起微生物的滋生，影响色谱柱寿命。如反相色谱柱长期不用，最好采用90%~95%的有机溶剂混合水溶液保存，防止色谱柱因密封不严造成色谱柱两头干涸、断层引起的寿命缩短。

此外，色谱柱还应当轻拿轻放，避免剧烈碰撞引起的色谱柱填料产生塌陷、断层，缩短使用寿命。答案来自

O

ll

CH3(CH2)1oCH2一0一S一0Na

ll

0

属硫酸酯盐，分子量288．38，本品为白色或淡黄色结晶，易溶于水，对温度(冷)敏感，1％ 水溶液pH 6～7，在pH 4以上的水溶液中事实上不水解，在pH 2．5以下水解为月桂醇和硫酸氢钠的速度加快。

十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfonate，简称SDS)，含C－S键,结构式为：

0

ll

CH3(CH2)10CH2一S一0Na

ll

0

属磺酸盐，分子量272，38，为易溶于水的白色粉末，与上述硫酸酯盐在结构上的区别在于磺酸盐的碳原子与硫原子直接相连。磺酸盐不是酯，故在酸性介质中不水解。

《生命的化学》2004年03期 加入收藏获取最新

十二烷基硫酸钠与十二烷基磺酸钠

赵郁,刘新宇,杨宇虹

十二烷基硫酸钠与十二烷基磺酸钠的混淆及误用具有一定的普遍性。两者虽均属于阴离子表面活性剂但结构及理化性质均有所差别 ,因此在实验中予以一定的关注是必要的。

【作者单位】：天津医科大学生物化学教研室 天津300070 (赵郁刘新宇)天津医科大学生物化学教研室 天津300070(杨宇虹)

【关键词】：十二烷基硫酸钠十二烷基磺酸钠SDS-PAGE

【分类号】：TQ460

【DOI】：cnki:ISSN:1000-1336.0.2004-03-036

【正文快照】：

十二烷基硫酸钠与十二烷基磺酸钠是生化及免疫学实验中经常遇到的,同时也是比较容易混淆的两种试剂,两者均属于阴离子表面活性剂,英文缩写均为SDS ,且中文名称非常相似,仅一字之差,故二者的混淆及误用存在一定的普遍性。例如,SDS PAGE测定蛋白质分子量是生化实验教学及科研工作中的常用实验之一,其中所用的试剂SDS具体是何物质,具有不同的说法。有些书说是十二烷基硫酸钠而有些书说成是十二烷基磺酸钠,究竟二者是不同的物质还是同一物质的不同名称,这不仅使年轻的科研人员茫然,更使研究生在实验工作中困惑,所以有必要加以澄清。…

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《化学试剂》1996年05期 加入收藏获取最新

SDS是十二烷基磺酸钠吗?

牛宇欣，杨典洱

SDS是十二烷基磺酸钠吗？实验室中经常用到SDS，但SDS指的是十二烷基磺酸钠还是十二烷基硫酸钠，极易发生混淆。因为前者的英文名为SodiumDodecylSulfonate，后者的为SodiumDodecylSulfate，两者英文词的头一字母均为...

【作者单位】：首都医科大学

【分类号】：O623

【DOI】：cnki:ISSN:0258-3283.0.1996-05-018

【正文快照】：

SDS是十二烷基磺酸钠吗？实验室中经常用到SDS，但SDS指的是十二烷基磺酸钠还是十二烷基硫酸钠，极易发生混淆。因为前者的英文名为SodiumDodecylSulfonate，后者的为SodiumDodecylSulfate，两者英文词的头一字母均为SDS，但经查化学试剂手册等得知：SDS是十二烷基硫酸钠的简称，而不是十二烷基磺酸钠。十二烷基磺酸钠与十二烷基硫酸钠均为白色或浅黄色结晶或粉末，溶解于水和乙醇，只是十二烷基硫酸钠常有特殊气味而十二烷基磺酸钠常没有任何气味。在化学结构上尽管两者的烷基部…

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而在生化、免疫检验方面作试剂用的SDS，一般都是指十二烷基硫酸钠，所以很明显的，你买的SDS是十二烷基硫酸钠而非十二烷基磺酸钠，而十二烷基硫酸钠对温度(冷)敏感，所以。。。。。

楼主下次买试剂千万小心呐~~万一不小心把析出的结晶把单向阀给划伤了的话，损失可就大了哟~！

加分加分·~~(*^__^*) 嘻嘻……

尽量避免使用:)十二烷基磺酸钠对柱子不好，如果操作不慎容易堵液相；但你多注意一下应该没问题

SDS在液相色谱条件下可以看作离子对试剂，你的流动相与溶出介质是一样的还是分别配制的，SDS分子量比较大，在色谱柱中较其他的缓冲盐类难洗脱，可能是与色谱柱中的填料发生键合，实验室里有人在做条件摸索的过程中用到过，比较不好冲洗，你可以先用低浓度的有机相冲洗较长的时间，在用100%的有机相冲洗，看看柱子的柱效会不会提高。

要是还不好的话，就用色谱柱的说明书上的再生方法试试了。