请问硫酸铵沉淀的方法是什么

硫酸铵可能会损坏某些蛋白。加入硫酸铵晶体时应小心：局部浓度过高可能会造成不需要的蛋白沉淀。

对于常规可再生的纯化过程，可以避免使用硫酸铵沉淀以利于层析。

通常沉淀对于浓度低于1mg/ml的蛋白几乎无效。

沉淀所需溶液：

饱和硫酸铵溶液（在100ml蒸馏水中加入100g硫酸铵，搅拌溶解）。

1M Tris-HCl，pH 8.0

用于第一步纯化的缓冲液。

方法：

1，过滤（0.45μm膜）或离心样品（4°C 10000g）。

2，每10倍体积的样品中加入一倍的1M Tris-HCl，pH 8.0以维持pH值。

3，温和搅拌。逐滴加入硫酸铵溶液，最高至50%饱和度。搅拌1小时。

4，10000g离心20min。

5，去除上清，用等体积相同浓度的硫酸铵溶液（如不能溶解沉淀也不会造成进一步沉淀的溶液）洗涤重悬沉淀两次。再次离心。

6，使用少量体积后面步骤所需的溶液溶解沉淀。

7，硫酸铵在净化/更换缓冲液步骤中使用脱盐柱除去。

溶液中的离子强度不同时，不同蛋白质的溶解度不同。

高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。

各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。

扩展资料：

硫酸铵沉淀法是粗分离蛋白时常用的纯化和浓缩蛋白的技术蛋白质的溶解度和盐浓度密切相关，在低浓度的条件下，随着盐浓度的增加，蛋白质的溶解度增加；但在高浓度的盐溶液里，盐离子竞争性的结合蛋白表面的水分子，破坏蛋白表面的水化膜，溶解度降低，蛋白质在疏水作用下聚集形成沉淀。

每种蛋白质的溶解度不同，因此可以用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质硫酸铵的溶

解度大，解离形成大量的NH4、SO离子，会结合大量的水分子，使蛋白质的溶解度下降，另外，其温度系数小，不易使蛋白质变性。

因此，蛋白质粗分离时硫酸铵沉淀法是很重要的一种技术，后续可采用层析技术进一步纯化蛋白，效率更高。硫酸铵沉淀法是常用的分离免疫球蛋白的方法。

用硫酸铵沉淀法纯化蛋白质，利用固体硫酸铵，而不用硫酸铵溶液，是因为固体硫酸铵效率比硫酸铵溶液效率高得多。

总硫酸铵沉淀法纯化蛋白质采用的是盐析法。当硫酸铵溶液达到饱和时，蛋白质大量析出。采用硫酸铵，因为不含有水，可以很快达到饱和度，从而使蛋白质析出。而采用硫酸铵溶液，会带入大量的水，即使能够使蛋白质析出，因为硫酸铵溶液带入的大量的水，也会导致溶液大量稀释，使析出效率大大降低。因此，必需使用无水的固体氯化铵作为析出剂。

原理就是：溶液中的离子强度不同时,不同蛋白质的溶解度不同,步骤就是不断加硫酸铵以血浆为例：加到盐浓度20~30%时纤维蛋白原沉淀,再加到浓度50%时球蛋白沉淀,饱和时清蛋白沉淀基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质.用。

盐析是通过向蛋白质溶液中加入高浓度中性盐(如硫酸铵)，致使蛋白质发生沉淀的蛋白质分离技术。盐析作用主要是由于大量中性盐的加入使水的活度降低，不仅原来溶液中的大部分水转变为盐离子的水化水，而且蛋白质分子表面通过静电作用结合的水化层也被移去以溶剂化盐离子，使蛋白质分子表面的疏水残基充分暴露，从而发生聚集而沉淀下来。盐溶指的是加入盐，使物质溶解度增加。

(NH4)₂SO4用作沉淀剂的优点是：因为它是二价离子中性盐，而且在水中溶解度很高，溶解度的温度系数也较低，故能在低温下(4°C)以高浓度存在，争夺溶液中的水以及蛋白质分子表面的水化水，使蛋白质溶解度有效降低，从而使蛋白质在保持活性的情况下从溶液中沉淀出来。

原理就是溶液中的离子强度不同时，不同蛋白质的溶解度不同，步骤就是不断加硫酸铵以血浆为例：加到盐浓度20~30%时纤维蛋白原沉淀，再加到浓度50%时球蛋白沉淀，饱和时清蛋白沉淀基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。试剂及仪器1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等2. 硫酸铵（ NH 4 ） SO 43. 饱和硫酸铵溶液（ SAS ）4. 蒸馏水5. PBS（ 含 0.2g /L 叠氮钠 ）6. 透析袋7. 超速离心机8. pH 计9. 磁力搅拌器操作步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸 铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为 33% 50% 。（一）配制饱和硫酸铵溶液（ SAS ）1.将 767g （ NH 4 ） 2 SO 4 边搅拌边慢慢加到 1 升 蒸馏水中。用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。此即饱和度为 100% 的硫酸铵溶液（ 4.1 mol/L, 25 ° C ）。2.其它不同饱和度铵溶液的配制（二）沉淀1.样品（如腹水） 20 000 ′ g 离心 30 min ，除去细胞碎片；2.保留上清液并测量体积；3.边搅拌边慢慢加入等体积的 SAS 到上清液中，终浓度为 1 ： 1 （4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌 6 小时或搅拌过夜（ 4 ° C ），使蛋白质充分沉淀。（三）透析1.蛋白质溶液 10 000 ′ g 离心 30 min （ 4 ° C ）。弃上清保留沉淀；2.将沉淀溶于少量（ 10-20ml ） PBS -0.2g /L 叠氮钠中。沉淀溶解后放入透析袋对PBS -0.2g /L 叠氮钠透析 24-48 小时（ 4 ° C ），每隔 3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨；3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。应用提示（一） 先用较低浓度的硫酸氨预沉淀，除去样品中的杂蛋白。1.边搅拌边慢慢加 SAS 到样品溶液中，使浓度为 0.5:1 （v/v） ；2.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌 6 小时 或过夜（ 4 ° C ）；3.3000 ′ g 离心 30 min （ 4 ° C ），保留上清液；上清液再加 SAS 到 0.5:1（v/v） ，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于 PBS ，同前透析，除去硫酸氨；4.上清液再加 SAS 到 0.5:1 （v/v） ，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于 PBS ，同前透析，除去硫酸氨；5.杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时，用预沉淀除杂蛋白是非常有效（二）为避免体积过大，可用固体硫酸氨进行盐析；硫酸氨沉淀法与层析 技术结合使用，可得到更进一步纯化的抗体。

1、硫酸铵浓度的计算就根据硫酸铵饱和度表来计算，比如60%的硫酸铵就是指体系中硫酸铵的浓度达到同温度下硫酸铵饱和浓度的60%，这个和硫酸铵的摩尔浓度没有关系。

2、直接根据饱和度表在蛋白溶液中加入适当重量的固体硫酸铵即可。

3、硫酸铵的饱和度随着温度有少许变化：

0度时，每升水可以溶解706.96克硫酸铵（此时重量百分比为41.42%,摩尔浓度为5.35 mol/L，比重1.2428g/cm3）。

25度时，每升水可以溶解769.05克硫酸铵（此时重量百分比为43.46%,摩尔浓度为5.82 mol/L，比重1.2449g/cm3）

至于从某一硫酸铵浓度调节到另一浓度，许多生化手册可以查到表，免去自己计算可能的不准确。

例如：《生物化学制备技术》苏拔贤主编（科学），第58页、59页两个表分别为在25度和0度进行硫酸铵沉淀的表。

根据课本知识可知：向鸡蛋清中加入饱和硫酸铵溶液，可以观察到的现象为析出沉淀，说明饱和硫酸铵溶液可使蛋白质的溶解性变小，此过程叫做蛋白质的“盐析”为物理变化．蛋白质受热或遇到浓硝酸、重金属盐、甲醛等化学物质，会发生化学变化

因为硫酸是电解质,胶体会聚沉

但一旦过量硫酸会溶解

注意，滴入硫酸铵只沉淀不会溶解!!!

因为Fe3+水解能力很强，相当于中强酸(比醋酸还强)

Fe3+水解能力远强于NH4+

Mg(OH)2可溶于硫酸铵因为Mg2+与NH4+水解能力相差不大