如何提高苯酚-次氯酸钠比色法测定发酵液中氨态氮准确度
一、方法要点
氨与苯酚及次氯酸钠在碱性介质中，以亚硝酰铁氰化钠为催化剂，生成蓝色的靛酚。颜色的深度与氨浓度成比例，可用分光光度法测定。显色反应受pH值、温度及次氯酸盐浓度等因素影响较大。采用pH 11.7的磷酸盐缓冲溶液，在37℃发色30min，次氯酸盐浓度为50mg／L(指测定体系的浓度，以有效氯计)，在此条件下灵敏度最高。钙、镁及其他金属离子的干扰可用EDTA掩蔽消除。
二、试剂与仪器
(1)铵标准溶液：称取3．8190g在100℃干燥过的无水氯化铵，溶于水中，转入1L容量瓶中，稀释至标线，此溶液含氨氮为1mg／mL。再吸取10mL置于1000mL容量瓶中，用水稀释至标线，此溶液含氨氮为0．01mg／mL。
(2)溶液A：溶解5g苯酚和25mg亚硝酰铁氰化钠于水中，稀释至500mL，放入棕色瓶中贮存，并置于冰箱中。
(3)溶液B：溶解2．5g氢氧化钠、18．7g、磷酸氢二钠和15.9g磷酸钠(Na3PO4·12H2O)于水中，加入含有效氯250mg的次氯酸钠溶液，用水稀释，用磷酸或磷酸钠调节至pH11．7，然后用水稀释至500mL。
(4)EDTA溶液(1％)：溶解1gEDTA于100mL水中，用浓氢氧化钠溶液调节pH 10。
(5)次氯酸钠溶液：将浓盐酸滴加于二氧化锰上，使发生的氯气通入2mol／L氢氧化钠溶液中。可得有效氯浓度为0.3～0.4mol／L的溶液。或将5％～10％漂白粉溶液用浓盐酸调至pH 6．5～7制得，两种方法制得的次氯酸钠溶液均不稳定，使用前需用硫代硫酸钠间接碘量法测定其中的有效氯。用漂白粉溶液制备次氯酸钠时，会产生大量钙的沉淀，必须滤去。
(6)分光光度计。
(7)pH-S-3型酸度计。
三、分析步骤
量取处理后的水样或试液，置于100mL容量瓶中，加1mL 1％EDTA溶液(如样液含钙、镁较多时加3mL)，摇匀，加入10mL溶液A，加10mL溶液B，摇匀，用水稀释至标线，再摇匀。置于37℃恒温水浴中30min(或20～30℃室温下4h)，用1cm比色皿，于625nm波长处，以试剂空白为参比，测定吸光度。由标准曲线查得相应的氨氮含量。
计算：
氨氮(mg.N／L)=测得氨氮量（μg)/水样体积(mL)
四、标准曲线的绘制
在6个100mL容量瓶中，分别加入0.0、1．0、3．0、5.0、7.0、9.0μg氨氮
氨氮 的 测定 方法 ，通常有纳氏比色法、苯酚—次氯酸盐（或水杨酸—次氯酸盐）比色法和电极法等。纳氏比色法具有操作简便、灵敏等特点，但钙、镁、铁等金属离子、硫化物、醛、酮类，以及水中色度和混浊等干扰 测定 ，需要相应 的 预处理。以下是纳氏试剂比色法 的 测定 方法 。
一、纳氏试剂比色法 的 原理
碘化钾和碘化汞 的 碱性溶液与氨反应生成淡红棕色胶态化和物，其色度与 氨氮 含量成正比，通常可在410-425nm范围内测其吸光度，计算其含量。
本法最低检出浓度为0.025mg/L（光度法）， 测定 上限为2mg/L。采用目视比色法，最低检出浓度为0.02mg/L。水样作适当 的 预处理后，本法可适用于地面水、地下水、工业 废水 和生活污水。
二、仪器
1、带氮球 的 定氮蒸馏装置：500mL凯氏烧瓶、氮球、直形冷凝管。
2、分光光度计
3、PH计
三、试剂
做次实验配制试剂均应用无氨水配制。
1、无氨水。配制可选用以下任意一种 方法 制备：
（1）蒸馏法：每升蒸馏水 中 加0.1mL硫酸，在全玻璃蒸馏器 中 重蒸馏，弃去50mL初馏液，接取其余馏出液于具塞磨口 的 玻璃瓶 中 ，密塞保存。
（2）离子交换法：使蒸馏水通过强酸性阳离子交换树脂柱。
2、1mol/L 的 盐酸溶液
3、1mol/L 的 氢氧化钠溶液
4、轻质氧化镁：将氧化镁在500℃下加热，以除去碳酸盐。
5、0.05%溴百里酚蓝指示计（PH6.0-7.6）。
6、防沫剂：如石蜡碎片
7、吸收剂：①硼酸溶液：称取20g硼酸溶于水，稀释至1L。②0.01mol/L硫酸溶液。
8、纳氏试剂。可选用下列 方法 之一制备：
（1）称取20g碘化钾溶于约25mL水中，边搅拌边分次加入少量 的 二氯化汞（HgCl2）结晶粉末（约10g），至出现朱红色不易降解时，改为滴加饱和二氯化汞溶液，并充分搅拌，当出现微量朱红色沉淀不再溶解时，停止滴加氯化汞溶液。另称取60g氢氧化钾溶于水，并稀释至250mL，冷却至室温后，将上述溶液徐徐注入氢氧化钾溶液 中 ，用水稀释至400mL，混匀。静置过夜，将上清液移入聚乙烯瓶 中 ，密塞保存。
（2）称取16g氢氧化钠，溶于50mL水中，充分冷却至室温。
另称取7g碘化钾和碘化汞溶于水，然后将次溶液在搅拌下徐徐注入氢氧化钠溶液 中 ，用水稀释至100mL，贮于聚乙烯瓶 中 ，密塞保存。
9、酒石酸钾钠溶液：称50g酒石酸钾钠（KNaC4H4O6 - 4H2O）溶于100mL水中，加热煮沸以除去氨，放冷，定容至100mL。
10、铵标准贮备溶液：称取3.819g经100℃干燥过 的 氯化氨（NH4Cl）溶于水中，移入1000mL容量瓶 中 ，稀释至标线。从溶液每毫升含1.00mg 氨氮 。
11、铵标准使用溶液：移取5.00mL铵标准贮备溶液于500mL容量瓶 中 ，用水稀释至标线。此溶液每毫升含0.01mg 氨氮 。
四、 测定 步骤
1、水样预处理：取250mL水样（如 氨氮 含量较高，可取适量并加水至250mL，使 氨氮 含量不超过2.5mg），移入凯氏烧瓶 中 ，加数滴溴百里酚蓝指示液，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节至PH为7左右。加入0.25g轻质氧化镁和数粒玻璃珠，立即连接氮球和冷凝管，导管下端插入吸收液液面下。加热蒸馏，至馏出液达200mL时，停止蒸馏。定容至250mL。
采用酸滴定法或纳氏比色法时，以50mL硼酸溶液为吸收剂；采用水扬酸—次氯酸盐比色法时，改用50mL0.01mol/L硫酸溶液为吸收剂。
2、标准曲线 的 绘制：吸取0、0.50、1.00、3.00、5.00、7.00和10.00mL铵标准使用溶液于50mL比色管 中 ，加水至标线，加1.00mL酒石酸钾钠溶液，混匀。加1.50mL纳氏试剂，混匀。放置10min 后，在波长420nm处，用光程20mm比色皿，已水作参比 测定 吸光度。
由测得 的 吸光度，减去零浓度空白管 的 吸光度后，得到校正吸光度，绘制以 氨氮 含量（mg）对校正吸光度 的 标准曲线。
3、水样 的 测定
（1）分取适量经絮凝预处理后的水样（使 氨氮 含量不超过0.1mg），加入50mL比色管 中 ，稀释至标线，加0.1mL酒石酸钾钠溶液。
（2）分取适量经蒸馏预处理后 的 馏出液，加入50mL比色管 中 ，加一定量 的 1mol/L氢氧化钠溶液以 中 和硼酸，稀释至标线，加1.5mL纳氏试剂，混匀。放置10min后，同标准曲线步骤测量吸光度。
4、空白实验：以无氨水代替水样，做全程序空白 测定 。
五、计算
由水样测得 的 吸光度减去空白实验 的 吸光度后，从标准曲线上查得 的 氨氮 含量（mg）。
氨氮 （N,mg/L）=1000m/V
式 中 ：m——由校准曲线查得 的 氨氮 量（mg）；V——水样体积（mL）
水质检测氨氮值多少为正常视情况而定。水体正常水质氨氮应
一、水质检测氨氮值多少为正常
1、水质检测氨氮值多少为正常要根据情况决定。水体正常水质氨氮一定要
2、氨氮检测方法主要有纳氏比色法、苯酚-次氯酸盐(或水杨酸-次氯酸盐)比色法和电极法等。纳氏试剂比色法的操作具有简单、灵敏等特点，但是要注意，水中的钙、镁和铁等金属离子、硫化物、醛和酮类、颜色，以及浑浊都会干扰测定，使用该方法时一定要做相应的预处理。
3、人工合成的化学肥料是水体中氮营养元素的主要来源，大量没有被农作物利用的氮化合物大部分都会被农田排水和地表径流带入到地下水和地表水中。目前随着石油、化工、食品和制药等工业发展，以及人民生活水平不断提高，城市生活污水和垃圾渗滤液里面的氨氮含量也在急剧上升。
二、水质检测指标有哪些
1、水体的颜色色度:国家规定饮用水的色度一定要小于15°。
2、臭味程度:有机物如果存在于水体中会导致臭味产生，主要原因是原水水质改变以及处理不充分。
3、浑浊度:一般浑浊度越高，说明水体中的有机物、病毒、细菌等的微生物含量就会越高，消毒杀菌效果也就越差反之微生物含量越少，就说明消毒杀菌效果越好。
4、肉眼可见物:一般肉眼可见的水里面悬浮的物质、水中存在的垃圾，就说明水质很差。
5、化学需氧量:化学氧化剂在氧化有机污染物的过程中，所需氧量被称为化学耗氧量，一般化学耗氧量越高，则说明水中的有机污染物越多。
6、余氯:污水经过加氯消毒并反应一定时间后，留在水中的有效氯量则被称为余氯，加氯消毒可以保证供水水质。
7、细菌数量:一般水中含有很多种细菌，而且来源特别广泛，国家规定饮用水含细菌标准为1毫升水中细菌总数应少于100个。
8、总大肠菌群:检测情况可说明水中是否含有粪便污染，以及污染的程度。
9、耐热大肠菌群:耐热大肠菌群可以反映食物受人和动物粪便污染的程度，和总大肠菌群一样也是水体粪便污染的指示菌。
蒸馏是为了将水中的氨氮蒸馏出来。
