二乙酸荧光素染料毒性大吗

A．据每个C形成4个共价键，可知分子中含有12个H原子，即分子式为C21H12O7，故A正确；

B．由转化可知，-OH上的被CH3CO-取代，则发生取代反应，故B正确；

C.5-FAM中含酚-OH，而5-CFDA不含，则实验室可以利用FeCl3溶液半鉴别5-FAM与5-CFDA，故C正确；

D.1mol5-CFDA与足量NaOH溶液反应，消耗NaOH的物质的量为6mol，故D错误；

故选D．

当细胞膜的通透性发生改变时，一些正常情况下不能透过细胞膜的外部物质进入细胞的量增多，正常细胞内的有些物质也易于释放到细胞外，检测细胞通透性变化的方法也就是基于这样的原理而设计的。常用的细胞膜通透性的检测方法有：

（1）死/活细胞染色法 ： 使用选择性死/活细胞染色的特殊染料如不易穿透活细胞膜的台盼兰、苯胺黑及用于活细胞着色的中性红、健那绿、亚甲蓝、甲苯胺蓝等，通过染色区分死活细胞并计数来间接判断细胞膜通透性的改变情况。该方法简单，方便，价廉；但灵敏度和精确性差。

（2）荧光标记法 ： 使用二乙酸荧光素（FDP）、碘化丙啶（PI）或异硫氰酸荧光素钠标记的荧光染料与细胞共孵育，用流式细胞仪检测荧光染色阳性细胞的比率。此法其实是（1）法的“荧光”版，但其在灵敏性和准确性方面明显要优于后者。  

（3）硝酸镧(La)示踪法： 在正常的生物组织中镧微粒可沉积于细胞间隙，但不能穿过具有1~ 2nm 微小间隙的细胞膜性结构(包括细胞膜和细胞器膜)，也不能穿过细胞间的紧密连接。在膜性结构通透性增高时， 镧微粒则可进入细胞、细胞器和紧密连接内， 并在电镜下显示， 镧盐标记技术被认为是一种有效的监测细胞膜通透性变化的标记技术。

（4）LDH释放法： 在正常情况下，细胞内大分子物质LDH 是不能通过细胞膜的， 但在细胞膜受损伤而通透性增加时，可通过受损的细胞膜释放出来。LDH 能较好地反映细胞膜损伤程度。类似的还有检测细胞外K+的漏出率等。

还有一些检测指标是针对不同细胞的一些特殊成分变化而设计。原则都是检测正常细胞内、外某类些物质的比例变化情况。

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使用选择性死/活细胞染色的特殊染料如不易穿透活细胞膜的台盼兰、苯胺黑及用于活细胞着色的中性红、健那绿、亚甲蓝、甲苯胺蓝等，通过染色区分死活细胞并计数来间接判断细胞膜通透性的改变情况。该方法简单，方便，价廉；但灵敏度和精确性差。

（2）荧光标记法

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使用二乙酸荧光素（FDP）、碘化丙啶（PI）或异硫氰酸荧光素钠标记的荧光染料与细胞共孵育，用流式细胞仪检测荧光染色阳性细胞的比率。此法其实是（1）法的“荧光”版，但其在灵敏性和准确性方面明显要优于后者。

（3）硝酸镧(La)示踪法：

在正常的生物组织中镧微粒可沉积于细胞间隙，但不能穿过具有1~

2nm

微小间隙的细胞膜性结构(包括细胞膜和细胞器膜)，也不能穿过细胞间的紧密连接。在膜性结构通透性增高时，

镧微粒则可进入细胞、细胞器和紧密连接内，

并在电镜下显示，

镧盐标记技术被认为是一种有效的监测细胞膜通透性变化的标记技术。

（4）LDH释放法：

在正常情况下，细胞内大分子物质LDH

是不能通过细胞膜的，

但在细胞膜受损伤而通透性增加时，可通过受损的细胞膜释放出来。LDH

能较好地反映细胞膜损伤程度。类似的还有检测细胞外K+的漏出率等。

即0.2g/L，100mL加入萘乙酸20mg，也可以考虑先配制萘乙酸的储备液（萘乙酸难溶于冷水，配制前要先用少量酒精溶解），如：2g/L（10倍），以后就可以随用随取，按10倍稀释即可，如果配100ml的话，就加入10ml储备液和90ml水。首先计算出需要的甲醛质量以及稀释需要的水的质量； 然后称量出相应的质量； 最后将两者混合在烧杯中充分搅拌均匀，然后移入到容量瓶中，贴上标签附着温度以及浓度。 计算公式 一、用液体试剂配制： 根据稀释前后溶质质量相等原理得公式