冰乙酸过滤是无菌过滤吗
是无菌过滤冰乙酸(纯净物)，即无水乙酸，乙酸是重要的有机酸之一，有机化合物。其在低温时凝固成冰状，俗称冰醋酸。凝固时体积膨胀可能导致容器破裂。闪点39℃，爆炸极限4.0%~16.0%，空气中最大允许浓度不超过 25mg/m3。纯的乙酸在低于熔点时会冻结成冰状晶体，所以无水乙酸又称为冰醋酸。
都可以的，还要看你的实验条件。
灭完菌再加入冰乙酸对实验结果来判断显然更有价值，因为可能的干扰因素又少了一项，不过如果你的无菌条件不好，灭菌完再加则可能造成污染，对实验的影响更大。
我们高温灭菌并不是让培养基暴露着灭的，你可以加个硅胶塞使培养基与外界隔离，不过要塞得紧一点，不然高温下会冲出来。另外，加入到培养基里之后的醋酸含量显然不会有很多，稀的醋酸挥发没有这么大，加了硅胶塞之后的挥发完全可以忽略了。
另外你还要考虑ph的测量问题，灭菌后加要等到其冷却后才能测ph，灭菌前加就可以直接进行测量，也可以在灭菌完成后待其冷却再测量（为了避免污染可以测空白对照管，灭菌前应该分装好培养基）。
1、使用液（0.5×）
0.045mol/L Tris-硼酸 0.001mol/L EDTA 采用无菌水溶解混匀，溶液体积为1L。
2、浓贮存液（5×）
54gTris碱 27.5g硼酸 20ml 0.5mol/L EDTA 采用无菌水溶解混匀，NaOH调pH至8.0，溶液体积1L。
扩展资料组成缓冲溶液的两组分的比值不为1∶1时，缓冲作用减小，缓冲能力降低，当c（盐）/c（酸）为1∶1时△pH最小，缓冲能力大。不论对于酸或碱都有较大的缓冲作用。缓冲溶液的pH值可用下式计算：
此时缓冲能力大。缓冲组分的比值离1∶1愈远，缓冲能力愈小，甚至不能起缓冲作用。对于任何缓冲体系，存在有效缓冲范围，这个范围大致在pKaφ（或pKbφ）两侧各一个pH单位之内。
弱酸及其盐（弱酸及其共轭碱）体系pH=pKaφ±1
弱碱及其盐（弱碱及其共轭酸）体系pOH=pKbφ±1
参考资料来源：百度百科-tbe
参考资料来源：百度百科-缓冲液
（1） DNA的浓度和纯度必须经过琼脂糖凝胶电泳或荧光法测定, 样品应与已知量DNA一起电泳。
（2） 分光光度法对于很多DNA提取物包括质粒小量制备来说，并不能给出一个可信的DNA浓度估计，混杂的染色体DNA、蛋白、RNA、有机物及无机化合物均可能有260 nm光吸收。因此，分光光度法常常错误地高估DNA浓度。
（3） DNA制备过程中用核糖核酸酶处理所产生核糖核苷酸，虽然它们在电泳后DNA样品的前面，并不能观察到，但它们仍会有260nm光吸收。
（一）测序反应：
1. 对于每组测序反应，标记四个0.5ml eppendorf管(G、A、T、C)。每管加入2ml适当的d/ddNTP混合物(d/ddNTP Mix)。各加入1滴(约20ml)矿物油，盖上盖子保存于冰上或4℃备用。
2. 对于每组四个测序反应,在一个eppendorf管中混合以下试剂：
（1） 样品反应：
质粒模板DNA 2.1pmol
5×测序缓冲液 5ml
引物 4.5pmol
无菌ddH2O 至终体积16ml
（2）对照反应
pGEM-3Zf(+)对照DNA(4mg) 4.0ml
5×测序缓冲液 5ml
pUC/M13正向引物(4.5pmol) 3.6ml
无菌ddH2 O 至终体积 16 ml
3. 在引物/模板混合物(以上第2步)中加入1.0ml测序级Taq DNA聚合酶(5u/ml)。用吸液器吸动几次混匀。
4. 从第3步的酶/引物/模板混合物中吸取4ml加入每一个d/ddNTP混合物的管内。
5. 在微量离心机中离心一下，使所有的溶液位于eppendorf管底部。
6. 把反应管放入预热至95℃的热循环仪，以[注意]中循环模式为基准，开始循环程序。对于每个引物/模板组合都必须选择最佳退火温度。下列程序一般能读出从引物开始350碱基的长度。
7. 热循环程序完成后，在每个小管内加入3μl DNA测序终止溶液，在微量离心机中略一旋转，终止反应。
[注意] 1、测序所用模板DNA的量一般按下面要求加入：
模板种类/长度 模板量
200bp (PCR产物) 16ng(120fmol)
3000-5000bp（超螺旋质粒DNA) 4mg (2pmol)
48000bp(λ,粘粒DNA) 1mg(31fmol)
由于超螺旋质粒产生的信号比松弛的线性双链DNA弱，因此使用超螺旋质粒作为模板时其用量要比其它模板大一些。
2、计算与4.5pmol相当的引物纳克数可用以下一般公式：
4.5pmol=1.5ng×n,其中n为引物碱基数
计算与1pmol相当的引物微克数可用以下一般公式：
dsDNA:1pmol=(6.6×10-4 mg)×n,其中n为模板碱基对数
ssDNA:1pmol=(3.3×10-4 mg)×n,其中n为模板碱基数
3、为阻止Taq DNA聚合酶延伸非特异性退火引物， 热循环仪必须预热至95℃。温度变换应越快越好。下面的循环时间不包括变温时间。如果你无法确定使用何种模式，建议从模式1开始。
模式1：适用于引物<24碱基或GC含量<50%
95℃ 2分钟。然后： 95℃ 30秒(变性), 42℃ 30秒(退火), 70℃ 1分钟(延伸)。
模式2:适用于≥24碱基或略短的GC含量≥50%的引物。
95℃ 2分钟, 然后: 95℃ 30秒(变性), 70℃ 30秒(退火/延伸)。 4. 在加入终止溶液之后样品可在4℃保存过夜。
（二）、 测序凝胶板的制备
1、玻璃板的处理：
银染测序的玻璃板一定要非常清洁，一般先用温水和去污剂洗涤，再用去离子水冲洗玻璃板，除去残留的去污剂，最后用乙醇清洗玻璃板。玻璃板上遗留的去污剂微膜可能导致凝胶染色时背景偏高(棕色)。短玻璃板经粘合溶液处理可将凝胶化学交联于玻璃板上。这一步对于在银染操作过程中防止凝胶撕裂至关重要。
（1）短玻璃板的处理
A. 在1ml 95%乙醇, 0.5%冰乙酸中加入5ml粘合硅烷(Bind Silane), 配成新鲜的粘合溶液。
B. 用经浸透新配的粘合溶液浸透的吸水棉纸擦拭仔细清洗过并已经自然干燥的玻璃板, 整个板面都必须擦拭。
C. 4-5分钟后, 用95%乙醇单向擦玻璃板, 然后略用力沿垂直方向擦拭。重复三次这一清洗过程, 每次均须换用干净的纸, 除去多余的粘合溶液。
[注意] 1. 在95%乙醇单向擦玻璃板时过度用力会带走过多的粘合硅烷, 使凝胶不能很好地粘附。
2. 准备长玻璃板之前要更换手套，防止粘染粘合硅烷。
3、防止粘合溶液沾染在长玻璃板上是很重要的, 否则将导致凝胶撕裂。
(2)、长玻璃板的处理
A. 用浸透Sigmacote溶液的棉纸擦拭清洗过的长玻璃板。
B. 5-10分钟后用吸水棉纸擦拭玻璃板以除去多余的Sigmacote溶液。
[注意] 1. 用过的凝胶可在水中浸泡后用剃须刀片或塑料刮刀刮去。玻璃板须用去污剂完全清洗。或者凝胶用10% NaOH浸泡后除去。为防止交叉污染, 用于清洗短玻璃板的工具必须与清洗长玻璃板的工具分开, 如果出现交叉污染, 以后制备的凝胶可能撕裂或变得松弛。
2、凝胶的制备：
（1）玻璃板经粘合硅胶和Sigmacote处理后，即可固定玻璃板。该方法是用0.2mm或0.4mm厚的边条置于玻璃板左右两侧，将另一块玻璃板压于其上。在长玻璃板的一侧插入鲨鱼齿梳平的一面边缘，用夹子固定住。
（2）根据所需要的凝胶浓度，按下表制备测序凝胶，一般6%-8%的胶浓度可获得较好的结果。配制过程中，先用适量双蒸水溶解尿素，再加入 Acr&Bis和10×TBE缓冲液，再用双蒸水调终体积至99.2ml，并用0.45mm的滤膜过滤，然后加过硫酸铵和TEMED。溶解尿素时不必加热。如果确需加热则应等溶液完全冷却后，方可加入TEMED和过硫酸铵。一般在胶灌制后4-6分钟，即开始聚合，如果聚合不好，则应使用高浓度的 TEMED和过硫酸铵。
凝胶终浓度
3 4 5 6 8 12 16 18
尿素(g) 42.0 42.0 42.0 42.0 42.0 42.0 42.0 42.0
Acr&Bis(ml) 7.5 10.0 12.0 14.5 20.0 30.0 40.0 50.0
10×TBE缓冲液(ml) 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0
双蒸水(ml) 47.5 45.0 43.0 40.5 35.0 25.0 15.0 5.0
10%过硫酸铵(ml) 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.7 0.7
TEMED(ml) 87 80 80 80 80 70 47 40
(3)胶配制好后，即可灌制胶板。一般是将凝胶沿着压条边缘缓慢地倒入玻璃板的槽中，倒完后，静止放置使之聚合完全。
[注意] 1、使用夹子固定玻璃板时，最好夹子的力量稍大一些，防止因力量不足使灌胶的过程中出现漏胶液现象。
2、灌制凝胶的过程中要严防产生气泡，否则影响测序的结果。
（三）电泳：
1、预电泳
（1）当凝胶聚合完全后，拨出鲨鱼齿梳，将该梳子反过来，把有齿的一头插入凝胶中，形成加样孔。
（2）立即将胶板固定在测序凝胶槽中，一般测序凝胶槽的上下槽是分开的，因而只有在固定好凝胶板后，方能加入TBE缓冲液。
（3）稀释10×TBE缓冲液至1×TBE，将该缓冲液加入上下二个电泳槽中，去除产生的气泡，接上电源准备预电泳。
（4）有些电泳槽，如LKB的Macrophor等是使用水浴加热的，则应先将水浴加热至55℃后进行预电泳。有的不使用水浴加热，依靠电泳过程中自身产生的热进行保温，如上海求精有机玻璃仪器生产的测序电泳槽，这种槽需夹上二块散热铝板，使整个凝胶板的温度一致。
（5）按30V/cm的电压预电泳20-30分钟。预电泳的过程是去除凝胶的杂质离子，同时使凝胶板达到所需的温度。高温电泳可防止GC丰富区形成的发夹状结构，影响测序的结果。
[注意]
（1）. 用鲨鱼齿梳制作加样孔时，应注意将齿尖插入胶中0.5mm左右，千万注意不能使加样孔渗漏，否则得不到正确的结果。
（2）. 应时刻注意上面电泳槽中的缓冲液是否渗漏，否则极易造成短路而损坏电泳仪。
2、样品的制备：
当在预电泳时，即可进行样品的制备，将反应完毕的样品在沸水浴中加热1-3分钟，立即置于冰上即可。如果样品长时间不用，则应重新处理。可使用4- 6%聚丙烯酰胺凝胶，胶厚0.4mm。厚度小于0.4mm的胶可能导致信号太弱。加样时不必吸去上层覆盖的矿物油，但要小心地吸取矿物油下的蓝色样品。
3、上样及电泳
关闭电泳仪，用移液枪吸缓冲液清洗样品孔，去除在预电泳时扩散出来的尿素，然后立即用毛细管进样器吸取样品，加入样品孔中。上样顺序一般为G、A、 T、C。加样完毕后，立即电泳。开始可用30V/cm进行电泳，5分钟后可提高至40-60V/cm，并保持恒压状态。一般来说，一个55cm长， 0.2mm厚的凝胶板，在2500V恒压状态下电泳2小时即可走到底部，同时在电泳过程中，电流可稳定地从28mA降至25mA。为了能读到更长的序列，可采用两轮或多轮上样。
[注意]
1、上样电泳时，一定要注意凝胶板的温度是否达到55℃左右，如果还没有达到，则应等温度达到后才能上样电泳。
2、一般来说电泳时，不宜使用太高的电压，因为太高的电压会使凝胶的分辨率降低，并且使带扩散。电泳中可进行恒功率电泳。
（四）、 测序凝胶的银染
染色过程要求凝胶浸在塑料盘中。因而至少使用两个盘子，大小与玻璃板类似。在盘中加入新鲜溶液之前须用高质量的水洗涤盘子。
1. 电泳完毕后用一个塑料片子小心地分开两板，凝胶应该牢固地附着在短玻璃板上。
2. 固定凝胶：将凝胶(连玻璃板)放入塑料盘，用固定/停止溶液浸没,充分振荡20分钟或直至样品中染料完全消失，胶可在固定/停止溶液中保存过夜(不振荡)。保留固定/停止溶液，用于终止显影反应。
3. 洗胶：用超纯水振荡洗胶3次，每次2分钟。从水中取出, 当转移至下一溶液时拿着胶板边沿静止10-20秒，使水流尽。
4. 凝胶染色：把凝胶移至染色溶液充分摇动30分钟。
5. 凝胶显影：
(1). 在显影溶液中加入甲醛(3ml)和硫代硫酸钠溶液(400μl)以完成显影液的配制。
(2). 从染色溶液中取出凝胶放入装有超纯水的盘中浸洗5-10秒。注意，把凝胶从超纯水转移到显影溶液的总时间不能长于5-10秒。浸泡时间过长则导致信号微弱或丧失信号。若浸泡时间过长,可重复第五步用染色液浸泡。
(3). 立刻将凝胶转移至1升(总量的一半)预冷的显影液充分振荡直至模板带开始显现或开始出现第一批条带,把凝胶移入剩下的1升显影液中继续显影2--3分钟,或直至所有条带出现。
6. 固定凝胶：在显影液中直接加入等体积的固定/停止溶液。停止显影反应,固定凝胶。
7. 在超纯水中浸洗凝胶两次，每次2分钟，注意在本操作中戴手套拿着胶板边缘避免在胶上印上指纹。
8. 将凝胶置于室温干燥或用抽气加热法干燥。在可见光灯箱或亮白，黄色背景(如纸)上观察凝胶，若需永久保存的记录, 则可用EDF胶片保留实验结果。
[注意] 测序产物的银染是显现序列信息的一种新方法，本系统的成败受几个因素的影响。
1. 水的质量对于染色的成功极其重要。超纯水(NANOpureR 或Milli-QR 的水)或双蒸水可获得较好的效果, 如果水中有杂质, 则低分子量条带可能无法出现。
2. 碳酸钠也非常重要。使用新鲜的，美国化学学会级碳酸钠较好，如Fisher和Kodak ACS试剂级碳酸钠(Fisher Cat #S263-500或S262-3，或Kodak Cat #109-1990)，一般可获得较好的结果。
3. 染色后的洗涤步骤是非常关键的。如果凝胶洗涤时间太长，银颗粒会脱离DNA, 产生很少或没有序列信号。如果洗涤时间过长，染色步骤可以重新进行。
4. 如果凝胶厚度超过0.4mm或丙烯酰胺浓度高于4-6%，则有必要延长固定和染色的时间。如果凝胶比0.4mm薄，染色反应后的洗涤必须缩短至不超过5秒。
5. 在室温下进行所有步骤，显影反应除外。显影溶液必须预冷至10-12℃以减小背景杂色。注意：临用前在显影溶液中加入甲醛和硫代硫酸钠。用新配的染色及显影溶液。不要重复使用任何溶液。
传染性软疣俗称“水猴子”，是一种病毒性传染性皮肤病。本病的传染途径可有直接接触和间接接触，直接接触也包括了性接触的内容，对于成人发生于阴股部的传染性软疣多是由于性接触引起的。故世界卫生组织将其列入性传播性疾病之中。本病好发于外生殖器、肛周、腹股沟及胸背部。
本病的病原体是传染性软疣病毒，属豆类病毒。呈“砖型”，大小为300nm×310nm，在普通显微镜下也可看到。其结构类似于天花病毒，核酸为DNA，衣壳完全对称，外包以囊膜。
传染性软疣的传染途径主要是直接接触传染，也可自体接种。往往在公共浴池或游泳池传染，成人多通过性传播。有人认为有家族性遗传过敏素体的人对此病毒比较敏感，易于泛发。儿童和青少年易发。
传染性软疣的临床特点
(1)本病的潜伏期是2～3周，接触传染性软疣的患者，经过一定的潜伏期后即可发病。
(2)以性传播者发病初起多局限于会阴、小腹、肛门、腹股沟、乳房等处，然后全身播散。损害数目多少不等，散在不融合处。
(3)皮损为米粒至豌豆大小的半球形丘疹，中心微凹，表面有蜡样光泽，呈淡红、灰白、珍珠色或正常皮色。
(4)在软疣顶端中央挑破后可挤出白色乳酪样物质，此称为“软疣小体”，这是本病的特征性损害。
(5)少数患者其损害偶尔可角化，而像小的皮角，此称为“角化性传染性软疣”。损害有时可长大到10～15mm，此种巨大的损害多为单发，常常继发细菌感染发生炎症反应。
(6)一般经过6～9个月即可消退，但也可持续3～4年，甚至个别皮损可持续5年以上。病程与数目无关，愈后不留疤痕。
(7)有的病人在发病几个月以后，在某些皮损四周出现斑片状湿疹样损害。若眼睑或其附近有皮损时，可引起慢性结膜炎，软疣消退后，此种湿疹或结膜炎可自然消退。
(8)自觉轻度瘙痒，可由于搔抓等原因引起继发感染，出现脓疱疮样损害，甚至引起更严重的疾病如肾炎等。
鉴别诊断：
1、水痘：透明清亮的水庖，周边有红晕，顶端无脐窝，皮疹分批发生。
2、多发性角化棘皮瘤：青年男性多见，有家族史，质坚硬，消退后留轻度萎缩性疤痕。
西医治疗传染性软疣的方法
局部治疗：
(1)在无菌条件下，挑破传染性软疣的顶端，可见到乳酪样的软疣小体，然后用镊子轻轻挤出。或直接用小镊子夹住疣体将其拔出，而后涂2％-2.5％碘酊，压迫止血即可。数目多者，皮损消毒后，将软疣刺破，涂以5%-10%碘酊，每日1次，可在7天内干涸脱落。
(2)酞丁安霜具有抗病毒的作用，以之涂于疣体表面，每日2～3次，连用3周。如疗程结束后软疣仍不能消除，要刮除或拔出。
(3)1％的5-氟尿嘧啶溶液外用，每日2～3次，连用2周。用时以棉签蘸药液少许，直接点于疣体的顶端。
(4)0.1％的维生素A酸溶液外用，每日2次，连用2周。要注意保护周围皮肤。
(5)70％苯酚酒精局部外用，用吸有药液的小针管，对准皮损逐个点药，点于疣体中央。一般一个疣体点2次即可，10天后皮损可自行脱落。
(6)液氮冷冻，用冷冻器将液氮喷于疣体表面，解熔3次即可。一般1周后疣体脱落。
(7)灭菌竹签蘸少许浓来苏水直接点涂软疣表面。较大皮疹，夹出软疣小体再行治疗。10天后复点一次。
(8)99%冰乙酸15ml加入20g食用面粉中，拌匀成糊状，外涂于疣体。
一般不需全身用药。若皮疹过多可采用以下办法：
1、抗病毒：①病毒唑0.2，日2次肌注；②聚肌胞2mg，隔日1次肌注；③病毒灵0.2，甲氰咪胍0.2，口服每日3次。
2、促进免疫：左旋咪唑50mg，1日3次口服，连用3天，间歇11天。
中医的治疗传染性软疣的方法
(1)取雄黄少许，兑入白酒中，涂于疣体表面。每日1次，连用5天。
(2)百部酊。百部30g兑入75％的酒精100mL中浸泡1周后，用其液涂于疣体表面。每日2次，连用10天。
(3)红花30g，补骨脂10g，干姜10g，吴萸15g，樟脑10g，生半夏30g；用75％的酒精1000mL 浸泡1周，滤渣后即可外用于患处。每日2次，连用10天。
(4)马齿苋30g，苍术10g，蜂房10g，苦参10g，雄黄10g；水煎液待温，擦洗患处。这种方法适宜于皮损泛发有瘙痒者，或继发湿疹化者。
(5)鸦胆子40g，连壳打碎，然后装瓶加入80mL水，煮沸，取液40mL。用时以棉签点于疣体上。
(6)板蓝根30g，芒硝10g，红花10g，生薏仁30g，马齿苋30g，水煎服。本方有清热解毒抗病毒的作用，对于皮损泛发者特别实用。
(7)马齿苋30g，蒲公英30g，水煎洗浴患处。每日1次，每次20分钟。
防护传染性软疣
(1)杜绝不洁性交和其他性乱。
(2)洁具不混用。洗澡勿用搓澡巾搓澡，以免损伤皮肤，引起病毒的感染。
(3)患病后衣服要煮沸消毒。
(4)患病后禁止抓搔，以免抓破感染和传染。
