巯基乙醇的用途
α-巯基乙醇主要用于血清学检查凝集试验。其临床意义：当其实验值>1∶50为阳性健康搜索，布氏杆菌病符合率为93.88%。 β-巯基乙醇主要用于生产低聚合度聚氯乙烯的链转移剂，腈纶的终止剂。也可用于合成高分子材料的调聚剂、聚合催化剂、交联剂及树脂固化剂等，也可用于合成橡胶、照相、医药、油漆、纺织、金属钝化剂等行业。
巯基乙醇 危险品！经皮肤、吞咽吸收有致命危险；刺激眼睛、呼吸道粘膜，引起慢性咽炎！
β-巯基乙醇在生物实验上的意义：二硫键被打开后可以使蛋白质的四级或三级结构被破坏。由于β-巯基乙醇能够打开蛋白质的结构，它常常被用于蛋白质分析。而β-巯基乙醇也常常被用于保护蛋白质中自由的半胱氨酸巯基之间不会错误形成二硫键。
作为还原剂，2-巯基乙醇常常可以与二硫苏糖醇（DTT）或三(2-甲酰乙基)膦盐酸盐（TCEP）互换使用。
β-巯基乙醇是少数几种被发现可以延长小鼠寿命的化合物。在微克量级水平上，2-巯基乙醇被观察到对实验鼠的生命具有多种可能的正面效应。
抗氧化。巯基乙醇能够提供还原力，保护二硫键，从而使蛋白质不被氧化掉而失活，此外在骨髓间充质干细胞向神经细胞诱导培养时使用2-巯基乙醇可以进行预诱导。
这是个还原剂，可以打开二硫键，破坏二级结构。SDS电泳是根据蛋白质的线性大小来看分子量大小的。SDS包裹，全部带负电，所以不考虑蛋白质本身的电荷情况。二级结构破坏后，唯一影响分子量的就是线性大小了，除了巯基乙醇， 还可以用DTT，目的是一样的。
电泳现象
在确定的条件下，带电粒子在单位电场强度作用下，单位时间内移动的距离（即迁移率）为常数，是该带电粒子的物化特征性常数。不同带电粒子因所带电荷不同，或虽所带电荷相同但荷质比不同，在同一电场中电泳，经一定时间后，由于移动距离不同而相互分离。分开的距离与外加电场的电压与电泳时间成正比。
y＝－60.28x＋其中x－蔗糖转化成葡萄糖的浓度（M）y－蔗糖转化进程中体系的旋光度值－不同浓度蔗糖溶液的旋光度值，其值可以测定，也可以通过下式计算。＝66.6×L×C（L＝10cm，C是蔗糖浓度g/mL）通过上述的直线方程，可以测定任何浓度蔗糖转化体系的旋光度值，求出其转化成葡萄糖的浓度x，从而可以求得不同反应时间的葡萄糖浓度。3． 酶比活性的测定配制2.5％的蔗糖溶液100 mL，测定其旋光度。在20℃的条件下加入蔗糖酶5 mL，反应3分钟测定体系旋光度值y，用公式 y＝－60.28x＋ 求出葡萄糖浓度x，及生成葡萄糖的毫克数，即可求出酶的比活性。（上述方法制备的酶，其活性约每毫升20单位。）比活性(单位/mL)＝(生成葡萄糖的毫克数)/(酶的体积)4． 蔗糖酶进程曲线的制作取200 mL 0.1 M的蔗糖溶液，在35℃水浴条件下恒温，加10 mL蔗糖酶溶液，每5分钟取出20 mL反应液加5滴5 M NaOH灭活后，测定一次体系的旋光度。求出葡萄糖的浓度，用葡萄糖的浓度对时间作图，得到蔗糖酶催化反应的进程曲线。
时间（分） 5 10 15 20 25 30 35 40
旋光度
葡萄糖浓度
5． 蔗糖酶米氏常数的测定用缓冲溶液稀释0.5 M的蔗糖溶液成为一系列不同浓度的蔗糖溶液各50 mL，在35℃恒温条件下加入10 mL已知活性的蔗糖酶，反应5分钟，加入1 mL 5 M NaOH溶液终止反应，测定此时溶液的旋光度，从而求出葡萄糖的生成速度V，根据米氏方程用反应速度V对（V/S）作图，直线的斜率-Km，直线的截距为Vmax，从而可以求出米氏常数Km。
加入蔗糖体积(mL) 蔗糖浓度（M） 起始旋光度 结束旋光度 葡萄糖浓度（M） 反应速度V(M/分) V/S
1 1.20 0.01
2 3.60 0.03
3 7.20 0.06
4 10.8 0.09
5 14.4 0.12
6 18.0 0.15
7 21.6 0.18
8 25.2 0.21
五、 数据处理1． 利用(3)中的数据计算酶的比活性。
2． 利用(4)中的数据作酶催化反应进程曲线。3． 利用(5)中的数据计算蔗糖酶米氏常数。六、参考文献[1] 沈同等，“生物化学”，上册，人民教育出版社，1980年版。[2] 复旦大学，“物理化学实验”，上册，人民教育出版社，1979年版。[3] 朱俭等，“生物化学实验”，上海科技出版社，1981年版。附录一直线直线方程一般可表示为：y＝a＋bx（1）式中y和x为由实验数据可确定的量；a和b为待定参数或函数。例如，对Arrhenius公式指数式，y和x分别为lnk和1/T；a和b分别为lnA和（－E/k）。对式[lnr=lnk＋nlnC]，y和x分别为lnr和lnC；a和b分别为lnk和n。由于有实验误差，用n对由实验确定的yi与xi值作y对x图时，一般说来，所得各点并不严格的在同一直线上，于是存在着这样的问题：应如何更合理地作出直线，从而更准确地求解a和b的值？应当指出，若直线选择不当（直线位置画的不当），不大的偏离，将可能导致a和b重大偏差。尤其是当试验测定的x区间范围相对较小时，外推至x＝0，将可使截距a产生较大的误差。例如依Arrhenius对数式以lnk对1/T作图，由实验测定的温度范围外推至1/T＝0，即T＝∞时，所选的直线斜率的较小的偏差将会引起截距lnA产生很大的偏差，致使指前因子A产生更大的偏差。怎样方能使直线位置选择（画）的得当呢？通俗地说，实测点（yi~xi）应均匀分布在直线两侧。严格的说，可采用下述“最小二乘法”确定最佳a、b值，作出最佳直线。若取得的数据实验值yi与xi（i=1、2、…n），一般来说，yi与a＋bxi值并不相等，令其误差为i，则i=yi―a―bxi线性回归，要求适当选择a与b之值，使各对元数据的偏差i之平方和之值为最小。即（2）（3）式中yi、bxi均为已知值。令与分别为yi与xi的平均值。则式（2）、（3）联立，可得（4）（5）由式（4）、（5）确定的a和b，称之为线性回归系数。用线性回归系数确定的直线方程y＝a＋bx，称为回归直线方程。其对应的直线，称为回归直线。
回归直线有下列性质1． 当x＝时，由式（1）、（5）可知y＝，即回归直线必通过（，）点。2． 由式（2）知，回归直线要求y的各次实验值yi与计算值a＋bxi偏差之总和为零，即各实验点均匀分布于回归直线的两侧。欲度量一组实测点与回归直线的相符程度，常引用所谓的相关系数“”作为定量指标，其定义为：（6）当||值在0～1之间，||值越接近于1，表明该组实测点与回归直线吻合性越好。当||=1时，表示所有的实测点均严格地落在回归直线上；||<0.482，则该组x、y间线性关系不明显，此时推求回归直线方程已无意义了。较精密的小型计算器一般配有直线方程的回归计算标准程序，使用十分方便。附录二酶催化反应一、 酶酶与其他催化剂不同，能在机体内十分温和的条件下高效率地起催化作用，使生物体内的各种物质处于不断的新陈代谢之中。所以说，酶在生物体的生命活动中占有极为重要的地位，研究酶的化学性质及其作用机理，对于人们了解生命活动的规律，从而进一步指导有关的医学实践及工农业生产具有重大意义。酶的本质是蛋白质，酶是具有催化作用的蛋白质。酶蛋白主要由氨基酸组成，同其他蛋白质一样，具有两性电解质的性质，并具有一、二、三、四级结构，也受热、紫外线照射等物理因素及酸、碱、有机溶剂等化学因素的影响而变性或沉淀，丧失酶活性。酶的分子量也很大，其水溶液具有亲水胶体的性质，不能透析。在体外，酶能被胰蛋白酶等水解而失活。根据酶的组成，酶可以分成简单蛋白质和结合蛋白质两类。脲酶、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、核糖核酸酶等属于简单蛋白质，其活性仅仅取决于它的蛋白质结构；另一类酶，其中的蛋白质部分——酶蛋白不具有活性，需要加入非蛋白的组分——辅助因子后，才表现出酶的活性，这就是结合蛋白质。酶蛋白与辅助因子结合后形成的复合物称为全酶。例如酪氨酸酶就是以Cu+或Cu2+为辅助因子的全酶。在催化反应中，酶蛋白与辅助因子所起的作用不同，酶反应的专一性及高效率取决于酶蛋白本身，而辅助因子则直接对电子、原子或某些化学基团起传递作用。酶的辅助因子包括金属离子（Zn+、Mg2+、Mn2+、Fe2+、Fe3+、Cu2+等）及小分子复杂有机化合物。它们本身无催化作用，但参与氧化还原或运载酰基载体的作用。在大多数情况下，可以通过透析等方法将全酶中的辅助因子除去，这种与酶蛋白分子松弛结合的辅助因子称为辅酶。在少数情况下，有一些辅助因子以共价键和酶蛋白较牢固地结合在一起，难以透析除去，这种辅助因子称之为辅基。细胞色素氧化酶与铁卟啉辅基就结合的比较牢固。酶母提取物经透析除去辅酶I(Co I)后，便失去了催化葡萄糖发酵的能力。
根据酶蛋白分子的特点可将酶分为单体酶、寡聚酶和多酶体系。单体酶只有一个多肽链，分子量在1.3万到3.5万之间，一般是催化水解反应的多肽链。寡聚酶由几个甚至几十个亚基组成，亚基之间不是共价键结合，彼此很容易分开，分子量从3.5万到几百万，如磷酸化酶a。多酶体系是由几种酶彼此嵌合形成的复合体。多酶复合体的分子量一般都在几百万以上，它有利于一系列反应的连续进行，如在脂肪酸合成中的脂肪酶合成酶复合体。在酶促反应中被酶作用的物质称为酶的底物。根据酶促反应的性质可将酶分为六大类：1． 氧化还原酶类——催化氧化还原反应A·2H＋BA＋B·2H例如黄嘌呤׃氧化还原酶（习惯称为黄嘌呤氧化酶）2． 移换酶类——催化功能基团的转移反应AB＋CA＋BC例如丙氨酸׃酮戊二酸转移酶（习惯称为谷丙转氨酶或丙氨酸氨基转移酶）3． 水解酶类——催化水解反应AB＋HOHAOH＋BH这类酶包括淀粉酶、蛋白酶等。例如ATP磷酸水解酶：ATP＋H2OADP ＋ 正磷酸ATP是腺苷三磷酸（腺三磷），ADP腺苷二磷酸（腺二磷）。4． 裂合酶类——催化从底物上移去一个基团而留下双键的反应或其逆反应，这类酶包括水化酶、脱羧酶和脱氨酶等。5． 异构酶类——催化异构反应AB例如催化D、L互交，、互交的酶6． 合成酶——催化合成反应，催化一切必须与ATP分解相偶联，并由两种物质（双分子）合成一种物质的反应X＋Y＋ATPXY＋ADP＋Pi二、 酶的分离提纯及活性测定药物用酶、生化试剂用酶，对酶的纯度要求较高；对酶的物理化学性质和催化反应进行研究，亦需要纯度较高的酶或纯酶，所以必须对酶进行分离和提纯。生物体内的酶分为胞内酶和胞外酶两类。胞内细胞存在于细胞之内，必须使细胞破碎才能进行分离。胞外酶则容易分离，例如由动物胰液可分出各种蛋白酶和酯酶。因为酶是蛋白质，故可以用提纯蛋白质的方法来提纯酶。盐析法是最常用的，盐析沉淀的蛋白质保持其天然构象，能再溶解。用于盐析的中性盐以硫酸铵为最好，因为它在水中的溶解度很高（20℃，760g/L）且其温度系数较小。其他提纯方法还有调节pH、等电点沉淀、有机溶剂（乙醇、丙酮、异丙醇等）分级分离等。因为酶是生物活性物质，所以在提纯时必须要减少活性的损失，全部操作需在0～5℃低温下进行。用有机溶剂分级分离则在-15～-20℃进行。为防止重金属使酶失活，有时需在抽提溶剂中加入少量的EDTA螯合剂；为了防止酶蛋白－SH基被氧化失活，需要在抽提溶剂中加入少量的巯基乙醇；为避免产生大量泡沫使酶变性，在分离提纯过程中不能过度搅拌。
为进一步提纯得到纯度更高的酶制剂，常用磷酸钙凝胶吸附、离子交换纤维素分离、葡聚糖凝胶层析、离子交换－葡聚糖凝糖胶层析，凝胶电泳分离及亲和层析分离法。为便于保存，需将酶制品浓缩、结晶。有三种保存方法：1、保存浓缩的酶液：用硫酸铵沉淀或硫酸铵反透析法使酶浓缩，使用前再透析除去硫酸铵。2、冷冻干燥：对于已除去盐分的酶液可以先在低温结冻，再减压使水分升华，制成酶的干粉，保存于冰箱中。3、浓缩液加入等体积甘油，于-20℃保存。在分离提纯过程中，必须经常测定酶的比活性，以指导提纯工作的进行。酶活性的大小也称为酶活力，是指酶催化一定化学反应的能力。酶活性的高低是研究酶的特性、进行酶制剂的生产及应用时的一项必不可少的指标。酶的活性的大小可以用在一定条件下，它所催化的某一化学反应的反应速度来表示。酶催化的反应速度愈大，酶的活性就愈高。所以测定酶的活性就是测定酶促反应的速度，这实质上就是酶的定量测定。酶反应速度可用单位时间内底物浓度的减少或产物浓度的增加来表示。以产物浓度C对反应时间t作图（见图1－1）。酶反应速度即为该曲线的斜率。图1-1 酶反应的速度曲线从酶反应的速率曲线可以看出，反应速度在开始一段时间内保持恒定，随着反应时间的延长，酶反应速度逐渐下降。下降的原因是由于底物浓度的降低、酶在一定pH及温度下部分失活、产物对酶的抑制、产物浓度的增加而加速了逆反应的进行等。因此，研究酶的反应速度应以酶促反应的初速度为准。这时上述各种干扰因素尚未起作用，速度保持不变。在测定酶反应速度时，常常测定的是产物浓度的增加而不是底物浓度的减少。这是由于实验中，底物的浓度往往是过量的，反应时底物浓度的减小微乎其微，难以准确测定；而产物则从无到有，只要方法足够灵敏，其浓度就可以准确测定。酶活性的高低用酶活性单位来表示。酶含量可以用每克或每毫克酶制剂含有多少个活性单位来表示（单位/克或单位/毫克）。例如淀粉酶，可用每小时催化1克可溶性淀粉液化所需要的酶量来表示，也可以用每小时催化1毫升2％可溶性淀粉液化所需要的酶量作为一个酶单位。
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实验一 酶催化蔗糖转化反应
实验一 酶催化蔗糖转化反应（~28学时）
一、 目的和要求
1． 用旋光仪对酶催化蔗糖转化反应进行测定。
2． 了解掌握蔗糖酶的制备和酶活力的测定。
3． 学会米氏常数的测定。
二、 实验原理
蔗糖转化反应
蔗糖 ＋ 水 ——→ 葡萄糖 ＋ 果糖
第 1 页
这个反应在H+或蔗糖酶的催化下可以很快的进行。蔗糖及其转化产物都有不对称的碳原子，它们都有旋光性，但是它们的旋光能力不同，所以可以利用体系在反应过程中旋光度的变化来描述反应进程。
溶液的旋光度与溶液中所含旋光物质的旋光能力、溶剂的性质、溶液的浓度、测量样品管的长度等均有关系。当其他条件不变时，旋光度与反应物浓度C成线形关系，即
＝kC
作为反应物的蔗糖是右旋性物质，其比旋光度为66.6；生成物的葡萄糖也是右旋性的物质，其比旋光度为52.5，但是果糖是左旋性物质，其比旋光度为－91.9。由于生成物中果糖左旋性比葡萄糖右旋性大，所以生成物呈现左旋性质。因此，随着反应的进行，体系的右旋角不断减小，反应到某一时刻，体系的旋光度可恰好等于零，而后就变成左旋，直到蔗糖完全转化，这时体系的左旋角达到最大值。
会。
一、简介
TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。TRIZOL的主要成分是苯酚。TRIZOL在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，因此对纯化RNA及标准化RNA的生产十分有用。
二、主要成分
TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。
TRIZOL是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，在样品裂解或匀浆过程中，TRIZOL能保持RNA完整性。加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA。
※0.1%的8－羟基喹啉可以抑制RNase，与氯仿联合使用可增强抑制作用。
※异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。
※β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。
以上内容参考：百度百科——TRIZOL
1, 乙醇 需求也为玉米价格的一飞冲天出了力。
2, 罪魁祸首便是制造生物燃料如 乙醇 的粮食使用的增加。
3, 处置办法，在出产历程洋答尽不定不天把持 乙醇 等否反响型溶剂的参加度，同时答采取纯度较矮的乙醇。
4, 润湿剂包括 乙醇 、异丙醇、丁醇等有机原料.
5, 本文用两种浓度 乙醇 从大黄中提取泻下作用的总甙。
6, 通过硫酸二乙酯诱变，选得一株抗苯 乙醇 的DNA复制突变型FD105。
7, 研究了以硫酸氢钠为催化剂，庚醛和 乙醇 为原料来制备庚醛二乙缩醛。
8, 目的研究苦荞麦叶中总黄酮类物质的 乙醇 提取工艺。
9, 结论急性子 乙醇 提取液具有促进盐酸达克罗宁透皮吸收的作用。
10, 为什么要选择树木而不是蜀黍或蔗糖作为 乙醇 原料?
11, 采用直接复分解法合成葡萄糖酸锌，通过滴加 乙醇 降低它在水溶液中的溶解度从而得到它的晶体。
12, 利用 乙醇 法制备颗粒状冷水可溶性葛根粉，在可溶性葛根粉中添加奶粉、蔗糖，用感官分析评定与正交实验法研制葛根奶茶。
13, 结论 乙醇 冷浸为越鞠丸方药抗抑郁活性部位的较佳提取方法。
14, 以无水 乙醇 为浸提溶剂时，茄尼醇浸提率高于以冰乙酸为浸提溶剂时的溶剂。
15, 滤过，回收 乙醇 ，得稠浸膏后真空低温干燥，即可得成品。
16, 本文通过一系列实验，对 乙醇 汽油对发动机性能的影响进行了探讨。
17, 对怠速工况下使用 乙醇 汽油汽车尾气中污染物进行了检测.
18, 在此基础上，针对车用 乙醇 汽油在使用过程中常见的一些问题，提出了具体的解决方法。
19, 以不同量的冷 乙醇 对白鲢鱼糜处理不同的次数和时间后,经干燥得到模拟牛肉.
20, 在许多细胞中，含量最高的磷脂是磷脂酰 乙醇 胺或脑磷脂。
21, 而水提物活性不明显。结论 乙醇 冷浸为越鞠丸方药抗抑郁活性部位的较佳提取方法。
22, 目的研究中药急性子 乙醇 提取液对盐酸达克罗宁促透皮作用。
23, 以铁钾矾为催化剂，通过葵酸与 乙醇 反应合成了癸酸乙酯。
24, 春节饮酒小贴士：喝酒别忘多吃饭，补充足量的碳水化合物，减少 乙醇 性脂肪肝的发生。多吃蔬菜和水果，补充维生素C等，减少酒精对人体的伤害。
25, 该报告指出，截至4月份，美国大约有1,557座E85加油站，大部分位于中西部地区，距离一个 乙醇 供应地较近。
26, 采用加入无机酸、碱中和以及精馏技术，考察了从制药废液中分离 乙醇 和二异丙胺的工艺条件。
27, 方法对30例老年上腹部晚期癌痛病人,在CT引导下行腹腔神经丛无水 乙醇 阻滞术.
28, 如今巴西不再使用单纯靠汽油驱动的汽车，政府要求所有机动车均采用含四分之一 乙醇 的混合燃料。
29, 性状Characters:白色至浅粉红色结晶体.不溶于水,溶于 乙醇 等有机溶剂.
30, 性状：深绿色结晶或结晶性粉末，带青铜光泽，无气味，溶于水、 乙醇 、氯仿；不溶于乙醚，水溶液为蓝色。
31, 着重探讨了 乙醇 法葛根奶茶里葛根粉的生产工艺参数，确定了葛根奶茶的配方。
32, 该文研究了在低温条件下，用 乙醇 作为溶剂，通过冷冻结晶去杂，从粗制大豆磷脂中精制磷脂酰胆碱的方法。
33, 他解释道：“不只是生产单一产品，相反的，一套设施能够生产 乙醇 、有机汽油或者有机柴油、喷气式发动机燃料和类似异戊二烯的化工原料。”。
34, 氯仿、异戊醇、 乙醇 、醋酸钠等购自杭州长征化学试剂厂。
35, 甲基丙烯酸甲酯进行自由基溶液聚合，巯基 乙醇 为链转移剂，然后用丙烯酰氯封端制备了聚甲基丙烯酸甲酯大分子单体。
36, 高浓度 乙醇 延长其绝对不应期。
37, 研究了以钼醇配合物为催化剂，过氧化氢异丙苯为环氧化剂， 乙醇 为溶剂的丙烯一步氧化制环氧丙烷的反应。
38, 利用无水 乙醇 作为溶剂，比较了冰乙酸、氯化钙这两种添加剂对悬浮液以及沉积过程的影响。
39, 在 乙醇 介质中，以氨作为催化剂，正硅酸乙酯作为硅源，制备了单分散的二氧化硅溶胶微球。
40, 用气相色谱质谱和场解吸质谱方法研究聚碳酸酯的 乙醇 萃取物。
41, 结论：连钱草 乙醇 提取物具有抑制肠蠕动作用，这种作用可能由胃肠道的胆碱能受体和组胺受体介导，或直接作用于回肠平滑肌细胞。
42, 以 乙醇 水溶液为提取剂，应用超声波技术从荞麦壳中提取色素。
43, 香蕉皮经不同方法提取而得果胶提取液,分别以 乙醇 沉淀法和盐析法从提取液中沉淀果胶.
44, 以 乙醇 为沉淀剂，测定水溶液中葡聚糖溶液浊度的方法测定葡聚糖的浓度。
45, 本研究使用铁氟?阳极电化学蚀刻槽，配合氢氟酸与 乙醇 混合溶液进行阳极电化学反应，在矽晶片表面形成多孔矽的结构。
46, “杜康基因”是 乙醇 脱氢酶的一种，它可以分解酒或腐烂的食品中的有毒物质。
47, 在贮藏期间, 乙醇 处理抑制了桃果实PPO活性,减少果实褐变和腐烂病的发生.
48, 结果表明，氧化物类无机粒子对水和 乙醇 无选择性，炭粉对乙醇具有较好的选择性。
49, 森川仁的研究发现， 乙醇 增强了大脑中的突触可塑性的关键领域的能力。
50, 目的探索贯叶金丝桃药材中金丝桃苷的 乙醇 提取工艺.
51, 试点工作的开展，将为我国全面推广 乙醇 汽油奠定一定的基础。
52, 莰烯在阳离子交换树脂固定床催化下与 乙醇 反应生成异菠基乙醚。
53, 该方法与索氏提取法、溶剂分批提取法等进行了比较,以采用 乙醇 回流浸提法较好.
54, 根据化妆品成分评估报告的分类法，当人类被给予口服或是经由皮肤接触苯氧 乙醇 几乎都是无毒害的。
55, 研究用巯基 乙醇 还原法提取羊毛角蛋白问题，探讨了巯基乙醇的浓度对羊毛溶解率的影响规律。
56, 通过双极性膜电渗析技术，把一 乙醇 胺脱氢氧化生产氨基乙酸过程中产生的氨基乙酸钠盐转化为氨基乙酸和氢氧化钠。
57, 中世纪的欧洲炼金术士有了一些新发现，包括无机酸和 乙醇 。
58, 采用水作萃取溶剂，正丁醇作内标，毛细管柱气相色谱法测定伊维菌素中残留溶剂 乙醇 和甲酰胺的含量。
59, 在一辆排量为1.6L的汽车上进行了燃用不同基础汽油配制的车用 乙醇 汽油对汽车性能影响的试验研究。
60, 研究海蜇皮经酶法水解、 乙醇 沉淀得到糖蛋白的最佳提取工艺。
61, 乙醇 作为一种生物燃料相对来说容易生产。但是与汽油相比它的能量密度较低，而且不能够通过现有的化石燃料管线来运输。
62, 将 乙醇 脱水加入适量变性剂形成“变性燃料乙醇”，再和一定比例的汽油进一步混合，生产清洁燃料“车用燃料乙醇汽油”。
63, 目的研究巯基 乙醇 和维生素C能否阻断镉对红细胞SOD的抑制。
64, 这样就可以通过对植物的专门培育，将强度高的纤维素用于生产煤饼和木材替代品，将强度低的纤维素用于生产纤维质 乙醇 。
65, 研究以 乙醇 为溶剂超声波辅助提取柑橘皮黄酮的工艺.
66, 我国目前燃料 乙醇 生产的主要原料是陈化粮，但我国陈化粮可用于燃料乙醇生产的量十分有限。
67, 在高温的 乙醇 超临界流体中，曙红发生脱溴反应，得到产物荧光黄。
68, 目的对锦灯笼宿萼 乙醇 提取物进行体外抗菌试验研究，了解其抗菌谱。
69, 结果表明：样品中银杏酚酸含量符合药典限度要求，未检出二乙烯苯和 乙醇 的残留。
70, 方法：用主动免疫、 乙醇 、去氧胆酸钠及热糊灌胃同时进行的综合方法，制成大鼠CAG模型。
71, 人类胚胎期暴露于 乙醇 对胎儿的生长发育有严重致畸作用.
72, 乙醇 被ADH代谢分解，而NAD常被认为是代谢过程中的辅因子。
73, 制造较高水平的 乙醇 混合燃料不只是给驾车者多一个选择，也减少了进口外国的石油和发展绿色能源经济。
74, 保绿处理之桂竹材所含铜离子的微量分析结果得知，甲醇溶剂将氯化铜中的铜离子渗入试材中的效果较 乙醇 溶剂为佳。
75, 但是，Tyner认为，除了生产 乙醇 的玉米粒之外，玉米芯和玉米皮还可以用作动物饲料。
76, 乙醇 溶液在紫外光照射下可以发射荧光。
77, 为了检验林檎叶中有效成分在人体内的抑菌作用，分别将林檎叶用水、 乙醇 、石油醚浸泡，再以上述提取物质对小白鼠进行动物体内抗菌试验。
78, 溶解度:溶于甲醇、 乙醇 .难溶于甲苯、二甲苯.
79, 研究了在室温条件下通过不同助溶剂的作用，柴油与工业甲醇或工业 乙醇 的互溶性。
80, 目的：探讨三 乙醇 胺乳膏保留灌肠对于急性放射性肠炎疗效。
81, 研究分成两部分，分别以苯甲基 乙醇 外用药水或是局部安慰剂进行10分钟的治疗一周。
82, 连翘中的苯 乙醇 苷类化合物含量很高,具有很强的抗菌活性.
83, 丹麦一家使用单 乙醇 胺做二氧化碳吸收剂的实验厂已经运行了两年.
84, 介绍了BTCA整理条件的研究进展，包括无磷催化剂的研究、整理过程中添加剂三 乙醇 胺和柔软剂的作用。
85, 目的比较纤维素酶、半仿生、 乙醇 回流提取方法对川乌中乌头碱、乌头总碱的影响，筛选最佳方法。
86, 目的观察五倍子 乙醇 提取物对表皮葡萄球菌的体外抗菌活性.
87, “杜康基因”是 乙醇 脱氢酶的一种，它能够合成酒或腐朽的食物中的有毒物质。
88, 利用正交试验研究了酯交换法制备卤虾油脂肪酸乙酯的工艺，分析了催化剂用量、反应温度、反应时间、无水 乙醇 用量等对醇解率的影响。
89, 在五水四氯化锡存在下，肉桂酸和 乙醇 发生酯化反应合成肉桂酸乙酯。
90, 灰黑或黑色粉未，不溶于水、 乙醇 ，溶于酸。
91, 在 乙醇 介质中由硝酸锰与植酸反应，合成六个新的二价锰配合物。
92, 把紫胶溶解在 乙醇 里形成的一种稀薄的清漆通常作为面漆涂在木料上.
93, 研究了以对羟基苯甲酸、 乙醇 为原料、对甲苯磺酸铜为催化剂、合成对羟基苯甲酸乙酯，并讨论了催化酯化的影响因素。
94, 第十二堂： 乙醇 ，乙醚，环氧化物，硫化物。
95, 结论：除了左鼻孔的一个测试顺序外，酚基乙基 乙醇 气味测知阈值测试方法的结果并不受到重复测试的影响。
96, 珠芽蓼根茎具有明显的抗超氧自由基作用，其活性主要来自它的 乙醇 提取物部分。
97, 特别选用 乙醇 溶液浸取硫酸镉，降低了氧化镉的干扰。
98, 采用无水 乙醇 、乙醚、丙酮及水作溶剂，对四川汉源花椒作了精油提取研究。
99, 研究以三 乙醇 胺为增感剂，原子吸收光谱法测定含铝、铁试样中钙量。
100, 对用外购或委托加工收回的已税汽油生产的 乙醇 汽油免税。
101, 研究了在微波辐射下莰烯与 乙醇 加成生成异菠基乙醚的反应。
102, 目的考察 乙醇 回流提取法提取黄连中盐酸小檗碱时主要影响因素.
103, 通过对其吸收光谱的研究，证明荧光素钠在 乙醇 溶液中存在多种互变异构体。
104, 乙醇 氧化经裂解反应、脱氢反应最终形成支链反应，乙氧基C2H5O的三种同分异构体在链分支中决定了链分支的进行方向。
105, 目的：探讨 乙醇 提取石榴皮中总黄酮的最佳工艺条件。
106, 世界银行和其他机构的研究标明，美国的 乙醇 生产等国内的玉米消费推高了全球的玉米价格。
107, 采用水合肼和硼氢化钾为共还原剂，适当比例的甲醇、 乙醇 和水的混合物为溶剂，制备得到负载催化剂P1。
108, 测定了喹 乙醇 在鱼饲料和鲤鱼组织中的残留量。
109, 结论：薜荔药材 乙醇 提取物的抗炎效果优于水提取物。
110, 以双蒸水和巯基 乙醇 作为提取液处理花粉，均未发现自交不亲和系共有的特征带。
111, 比较在流动相正己烷中，极性添加剂分别为 乙醇 、正丙醇、异丙醇、正丁醇时流动相对手性分离的影响。
112, 概述：本司可可流浸膏主要采用贵州产的可可豆研制成可可粉，用 乙醇 浸提制得可可流浸膏。
113, 前言：结合双分子亲核取代反应机理，对 乙醇 和盐酸反应过程进行分析，合理确定了工业生产乙基氯的工艺路线。
114, 设计正交实验，用 乙醇 水溶液回流溶出芦荟甙，用减压蒸馏的方法得到产品，并找出最佳反应条件。
115, 桑叶中 乙醇 酸氧化酶活性是筛选低光呼吸桑品种的重要指标。
116, 乙醇 替代汽油,将从人类、动物口中夺食?
117, 本文研究了二缩二乙二醇二甲基丙烯酸酯在空气存在下，用过硫酸钾在 乙醇 溶液中对真丝的接枝。
118, Lima称,中国公司还有意投资冶炼和生物燃料项目,他们或可借此进口混入 乙醇 的车用汽油.
119, 发动机台架试验表明：加入此种添加剂后对各种汽油的燃油经济性有大幅改善作用，对 乙醇 汽油的效果尤甚。
120, 也就是说，要跑同洋距离的话，你需要烧掉的 乙醇 比汽油多一半。
1 分离方法
采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化，同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物质分析中常用的手段，如层析、叫泳等。
1.1 高效液相色谱（HPLC）
HPLC的出现为肽类物质的分离提供了有利的方法手段，因为蛋白质、多肽的HPLC应用与其它化合物相比，在适宜的色谱条件下不仅可以在短时间内完成分离目的，更重要的是HPLC能在制备规模上生产具有生物活性的多肽。因此在寻找多肽类物质分离制备的最佳条件上，不少学者做了大量的工作。如何保持多肽活性、如何选择固定相材料、洗脱液种类、如何分析测定都是目前研究的内容。
1．1．1 反相高效液相色谱（RP-HPLC）
结果与保留值之间的关系：利用RP-HPLC分离多肽首先得确定不同结构的多肽在柱上的保留情况。为了获得一系列的保留系数，Wilce等利用多线性回归方法对2106种肽的保留性质与结构进行分析，得出了不同氨基酸组成对保留系数影响的关系，其中极性氨基酸残基在2～20氨基酸组成的肽中，可减少在柱上的保留时间；在10～60氨基酸组成的肽中，非极性氨基酸较多也可减少在柱上的保留时间，而含5～25个氨基酸的小肽中，非极性氨基酸增加可延长在柱上的保留时间。同时有不少文献报道了肽链长度、氨基酸组成、温度等条件对保留情况的影响，并利用计算机处理分析得到每种多肽的分离提取的最佳条件。
肽图分析（Peptide Mapping）：肽图分析是根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸组成特点，使用专一性较强的蛋白水解酶[一般未肽链内切酶（endopeptidase）]作用于特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断，通过一定的分离检测手段形成特征性指纹图谱，肽图分析对多肽结构研究合特性鉴别具有重要意义。利用胰蛋白酶能特意性作用于Arg和Lys羧基端的肽链的性质，通过RP-HPLC法采用C18柱检测了重组人生长激素特征性胰肽图谱。同时胰岛素的肽图经V8酶专一裂解也制得，并可鉴别仅相差一个氨基酸残疾的不同种属来源的胰岛素。人类肿瘤坏死因子的单克隆抗体结构也应用酶解法及在线分析技术确定了肽图，便于鉴定分析。此项技术已经在新药开发中得到广泛应用。
1.1.2 疏水作用色谱（Hydrophobic interaction chromatogrphy，HIC）
HIC是利用多肽中含有疏水基因，可与固定相之间产生疏水作用而达到分离分析的目的，其比RP-GPLC具有较少使多肽变性的特点。利用GIC分离生产激素（GH）产品的结构与活性比EP-GPLC分离的要稳定，活性较稳定。Geng等利用HIC柱的低变性特点，将大肠杆菌表达出的经盐酸胍乙啶变性得到人重组干扰素-γ。通过HIC柱纯化、折叠出高生物活性的产品。不同人尿表皮生长因子（EGF）也利用HIC纯化到了，均具有良好的生物活性。HIC可将未经离子交换柱的样品纯化。而RP-HPLC则不能达到这一要求。
1.1.3 分子排阻色谱（Sizs-Exclusion chromatogrphy，SEC）
SEC是利用多肽分子大小、形状差异来分离纯化多肽物质，特别对一些较大的聚集态的分子更为方便，如人重组生长激素（hgH）的分离，不同结构、构型的GH在SEC柱上分离行为完全不同，从而可分离不同构型或在氨基酸序列上有微小差异的变异体，利用SEC研究修饰化的PEG的分离方法，此PEC具有半衰期长、作用强的特点。一些分子量较大的肽或蛋白均可利用此法分离分析。
1．1．4离子交换色谱（Iron-Exchange chromatography,IEXC）
IEXC可在中性条件下，利用多肽的带电性不同分离纯化具有生物活性的多肽。其可分为阳离子柱与阴离子柱两大类，还有一些新型树脂，如大孔型树脂、均孔型树脂、离子交换纤维素、葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶树脂等。在多肽类物质的分离分析研究中，对多肽的性质、洗脱剂、洗脱条件的研究较多，不同的多肽分离条件有所不同，特别是洗脱剂的离子强度、盐浓度等对纯化影响较大。Wu等报道利用离子交换柱层析法，探讨分离牛碳酸酐异构体和牛血清白蛋白、鸡血清白蛋白酶的提取条件，获得了有价值的数据供今后此类物质分离研究。
1．1．5膜蛋白色谱（Chromatography of Membrane Protein,CMP）
CMP+分离强蔬水性蛋白、多肽混合物的层析系统，一般有去垢剂（如SDS）溶解膜蛋白后形成SDS-融膜蛋白，并由羟基磷灰石为固定相的柱子分离纯化。羟基磷灰石柱具有阴离子磷酸基团（P-端），又具有阳离子钙（C-端），与固定相结合主要决定于膜蛋白的大小、SDS结合量有关。利用原子散射法研究cAMP的分离机制发现，样品与SDS结合后在离子交换柱上存在SDS分子、带电荷氨基酸与固定相中带电离子间的交换，从而达到分级分离的目的。
1．1．6高效置换色谱（High-Performance Displacement Chromatography,HPDC）
HPDC是利用小分子高效置换剂来交换色谱柱上的样品，从而达到分离的目的。它具有分离组分含量较少成分的特性。利用HPDC鉴定分离了低于总量1%组分的活性人重组生长激素（rHG ）。在研究非毒性交换剂时Jayarama发现硫酸化葡萄糖（Detran Sulfate，DS）是对β乳球蛋白A和B的良好置换剂，一般DS的相对分子质量为1×104和4×104最宜。研究表明置换剂的相对分子质量越低，越易于与固定相结合，因此在分离相对分子质量小的多肽时，需要更小的置换剂才能将其置换纯化出来。
1.1.7 灌注层析（Perfusion Chromatography，PC）
PC是一种基于分子筛原理与高速流动的流动相的层析分离方法，固定相孔径大小及流动相速度直接影响分离效果。试验证明其在生产、制备过程中具有低投入、高产出的特性。目前市场上可供应的PC固定相种类较多，适合于不同分子量的多肽分离使用。
1.2 亲和层析（Affinity Chromatography，AC）
AC是利用连接在固定相基质上的配基与可以和其特异性产生作用的配体之间的特异亲和性而分离物质的层析方法。自1968年Cuatrecasas提出亲和层析概念以来，在寻找特异亲和作用物质上发现了许多组合，如抗原-抗体、酶-催化底物、凝集素-多糖、寡核苷酸与其互补链等等。对多肽类物质分离目前主要应用其单抗或生物模拟配基与其亲和，这些配基由天然的，也有根据其结构人工合成的。Patel等人利用一系列亲和柱分离纯化到了组织血浆纤维蛋白酶原激活剂蛋白多肽。
固定金属亲和层析（Immobilized Metal Affinity Chromatography.LMAC）是近年来发展起来的一种亲和方法。其固定相基质上鳌合了一些金属离子，如Cu2+、Ni2+、Fe3+等，此柱可通过配为键鳌合侧链含有Lys、Met、Asp、Arg、Tyr、Glu和His的多肽，特别是肽序列中含有His-X-X-X-His的结构最易结合到金属离子亲和柱上，纯化效果较好。其中胰岛素样生长因子（Insylin Like Growth Factor，IGF）、二氢叶还原酶融合蛋白等均用此方法分离到纯度较高的产品。
Chaiken等人报道了另一种亲和层析方法，利用反义DNA表达产生，其与正链DNA表达产生的肽或蛋白具有一定的亲和性，如Arg加压素受体复合物，已用此法分离得到。DNA与蛋白、多肽复合物之间的作用也是生物亲和中常用的方法。将人工合成的寡核苷酸结合在固定相基质上，将样品蛋白或多肽从柱中流过，与之结合可达到分离特定结构多肽的目的。
1.3 毛细管电泳（Capillary electrophoresis，CE）--分离分析方法
CE是在传统的电泳技术基础上于本世纪60年代末由Hjerten发明的，其利用小的毛细管代替传统的大电泳槽，使电泳效率提高了几十倍。此技术从80年代以来发展迅速，是生物化学分析工作者与生化学家分离、定性多肽与蛋白类物质的有利工具。CE根据应用原理不同可分为以下几种；毛细管区带电泳Capillary Zone electrophoresis，CZE）、毛细管等电聚焦电泳（Capillary Isoeletric Focusing，CIEF）毛细管凝胶电泳（CapillaryGelElectrophoresis，CGE）和胶束电动毛细管层析（Micellar Electokinetic Electrophoresis Chromatorgraphy,MECC）等。
1.3.1 毛细管区带电泳（Capillary Zone Electrophoresis，CZE）
CZE分离多肽类物质主要是依据不同组分中的化合物所带电性决定，比传统凝胶电泳更准确。目前存在于CZE分离分析多肽物质的主要问题是天然蛋白或肽易与毛细管硅胶柱上的硅醇发生反应，影响峰形与电泳时间，针对这些问题不少学者做了大量实验进行改进，如调节电池泳液的PH值，使与硅醇反应的极性基团减少；改进毛细管柱材料的组成，针对多肽性质的不同采取不同的CZE方法研究分离5个含9个氨基酸残基的小肽，确定了小肽分析的基本条件，即在低PH条件下，缓冲液中含有一定浓度的金属离子如Zn2+等，此时分离速度快而且准确。
1．3．2细管等电聚电泳（Capillary Isleletric Focusing,CIEF）
由于不同的蛋白、多肽的等电点（PI）不同，因此在具有不同pH梯度的电泳槽中，其可在等电点pH条件下聚集沉淀下来，而与其他肽类分离开来。CIEF在分离、分析混合多肽物质中应用不多，主要应用与不同来源的多肽异构体之间的分离，如对rHG不同异构体分离。由于在CIEF柱表面覆盖物的不稳定性限制了此法的广泛应用。
1．3. 3毛细管凝胶电泳 (Capillary Gel Electrophoresis,CGE)
CGE是基于分子筛原理，经十二烷基磺酸钠（SDS）处理的蛋白或多肽在电泳过程中主要靠分子形状、分子量不同而分离。目前，又有一种非交联欢、线性、疏水多聚凝胶柱被用于多肽物质的分离分析，此电泳法适于含疏水侧链较多的肽分离，这种凝胶易于灌注，使用寿命长，性质较为稳定。
1．3．4胶束电动毛细管层析（Micellar Electrokinetic Electorphoresis Chromatography, MECC）
MECC的原理是在电泳液中加入表面活性剂，如SDS，使一些中性分子带相同电荷分子得以分离。特别对一些小分子肽，阴离子、阳离子表面活性剂的应用都可使之形成带有一定电荷的胶束，从而得到很好的分离效果。有文献报道在电解液中加入环糊精等物质，可使用权含疏水结构组分的多肽选择性与环糊精的环孔作用，从而利用疏水作用使多肽得到分离。
1．4多肽蛋白质分离工程的系统应用
以上提到的分离多肽的技术在实际应用过程中多相互结合，根据分离多肽性质的不同，采用不同的分离手段。特别是后基因组时代，对于蛋白质组深入的研究，人们对于分离多肽及蛋白质的手段不断改进，综合利用了蛋白质和多肽的各种性质，采用包括前面提到的常规蛋白多肽提取方法，同时利用了高效液相色谱，毛细管电泳，2-D电泳等手段分离得到细胞或组织中尽可能多的蛋白多肽。在蛋白质组学研究中系统应用蛋白和多肽分离鉴定的技术在此研究中即是分离手段也是分析方法之一。特别是以下提到的质谱技术的发展，大大的提高了蛋白多肽类物质的分析鉴定的效率。
2 分析方法
2．1 质谱分析（Mass Spectrometry, MS）
MS在蛋白、多肽分析中已经得到了广泛应用，特别是在分离纯化后的在线分析中，MS的高敏性、快速性特别适合多肽物质分析鉴定。其中连续流快原子轰击质谱（Continuous-Flow Fast Atom Bombardment, cf-FAB）和电雾离子化质谱（Electrospray Ionization, EIS）是近几年发展起来的新方法。
2．1．1连续流快原子轰击质谱（Continuous-Flow Fast Atom Bombardment, cf-FAB）
cf-FAB是一种弱离子化技术，可将肽类或小分子量蛋白离子化成MH+或（M-H）形式。主要应用于肽类的分离检测，其具有中等分辨率，精确度大于+0.2amu，流速一般在0.5-1.5μl·Ml-1。在测定使流动相需加0.5%-10%基质如甘油和高有机溶剂成分，使样品在检测探针处达到敏感化。cf-FAB常与HPLC、CEZ等方法结合使用达分离分析的目的，许多多肽的cf-FAB分析方法已经建立，并得到很好的应用。如Hideaki等利用此法研究L-Pro、L-Ala的四肽化合物系列。证明L-Pro在保持小肽构相稳定性。连接分子方面具有重要意义。
2.1.2 电雾离子化质谱（Electrospray Ionozation，EIS）
EIS可产生多价离子化的蛋白或多肽，允许相对分子质量达1×105蛋白进行分析，分辨率在1500-2000amu。精确度在0.01%左右。EIS更适合相对分子质量大的蛋白质的在线分析，且需要气化或有机溶剂使样品敏感化。利用EIS与HPLC联合分离分析GH和血红蛋白均获成功，其也可与CEZ联合应用。
2.1.3 基质辅助激光解析/离子化-飞行时间质谱（Matrix-associated laser disso-ciation/ionization time of flight mass spectrmtry，MALDI-TOF MS）
MALDI-TOF是目前蛋白质鉴定中精确测定测定分子质量的手段，特别适合对混合蛋白多肽类物质的相对分子质量的测定，灵敏度和分辨率均较高。它是目前蛋白质组学研究的必备工具。同时结合液相色谱的联用技术可以高效率的鉴定多肽物质。特别是当各种原理的质谱技术串联应用时，不但可以得到多肽的相对分子质量信息，还可以测定它的序列结构，此项技术将在未来蛋白质组学研究中起到决定性作用。
2.2 核磁共振(Nuclear Magnetic resonance，NMR)
NMR因图谱信号的纯数字化、过度的重叠范围过宽（由于相对分子质量太大）核信号弱等原因，在蛋白、多肽物质的分析中应用一直不多。随着二维、三维以及四维NMR的应用，分子生物学、计算机处理技术的发展，使NMR逐渐成为此类物质分析的主要方法之一。NMR可用于确定氨基酸序列、定量混合物中的各组分组成含量等分析中。但要应用于蛋白质分析中仍有许多问题需要解决，例如，如何使分子量大的蛋白质有特定的形状而便于定量与定性分析，如何减少数据处理的时间问题等。这些问题多有不少学者在进行研究。虽然在蛋白质分析中应用较少，NMR在分析分子中含少于30个氨基酸的小肽时是非常有用的，可以克服上述蛋白质分析中的缺点而达到快速准确分析的目的。
2.3 其他
除上述方法之外，氨基酸组成分析、氨基酸序列分析、场解析质谱、IR、UV光谱、CD、圆而色谱、生物鉴定法、放射性同位素标记法及免疫学方法等都已应用于多肽类物质的结果鉴定、分析检测之中。
以上简要的介绍了近几年多肽物质分离、分析的常用方法及最新研究方向。随着科学技术水平的不断发展，会有许多更新的分离分析手段不断涌现，因此这一领域的研究具有广阔的前景。
应用SDS-PAGE显示小分子多肽
SDS-PAGE在分离、鉴定和纯化蛋白质方面有着广泛应用，其有效分离范围取决于聚丙烯酰胺的浓度和交联度，其孔径随着双丙烯酰胺与丙烯酰胺比率的增加而减小，比率接近于1：20时，孔径达到最小值。分子量低于10kD的小分子肽类，即使用较高浓度的聚丙烯酰胺凝胶的SDS-PAGE也不能完全分离，或是显不出色，或是显带较弱，带型弥散。且分子量越小，效果也越差。
为了能在SDS-PAGE上显示测定小分子量的多肽，通常采取两种方法：一是增加凝胶的浓度和交联度，在制胶时加入一些可以降低聚丙烯酰胺凝胶网限孔径的溶质分子，使用尿素、甘油或蔗糖等物质；二是选择缓冲液中的拖尾离子的种类和浓度以达到改善多肽的分离效果。
操作步骤
1．电泳缓冲液的配制如下表所示
缓冲液Tris
(mol/L)Tricine
(mol/L)pHSDS
(%)
阳极缓冲液
阴极缓冲液
胶缓冲液0.2
0.1
3.0—
0.1
—8.9*
8.25**
8.4*—
0.1
0.3
* 用HCl调pH
** pH约为8.25
2．丙烯酰胺贮存液的配制
单丙-双丙混合物单丙的百分数双丙的百分数
49.5% T, 3%C
49.5% T, 6%C48
46.51.5
3.0
T：丙烯酰胺的总浓度
C：交联度
3．胶的制备，与一般SDS-PAGE相似，按下表配制分离胶和浓缩胶
组 份分离胶
16% T，6%C浓缩胶
6% T，3%C
49.5% T, 3%C丙烯酰胺溶液（ml）
49.5% T, 6%C 丙烯酰胺溶液（ml）
胶缓冲液（ml）
脲（g）[甘油（ml）]
水（ml）
10%过硫酸铵（μl）
TEMED（μl）
总体积（ml）—
3.3
3.3
3.6[2.4]
1
40
4.0
10.040.48
—
1.00
—
1.50
25
2.5
3.03
4．样品缓冲液
4% SDS
12%甘油
50mmol/L Tris
2%巯基乙醇
0.01% Serva blue
多肽样品与样品缓冲液混合沸煮2min（或40℃温浴30min）。
5．将灌胶的玻璃板固定在电泳装置上，用1%琼脂糖封边，倒入阴极缓冲液，依次加样。
6．将电泳装置放入电泳槽内，倒入阳极缓冲液，将正负极与电泳仪相接，恒电压50~60V，待指示剂进入分离胶后，电压可升至70~90V，恒压约3h待指示剂走出凝胶下缘停止电泳。
7．染色、脱色及胶的保存同SDS-PAGE
首先这种情况叫作『蛋白质的凝胶化』，是蛋白质分子『变性』引起的。而其最根本的原因则是生产制作过程里有无机盐或其它电解质有意无意地被添加了进来——但是它并不影响食品安全，是可以吃的，并且更容易水解吸收，提高蛋白利用率。
像这种生活中常见的，能引起蛋白质变性的因素基本出自以下两种：
1：物理因素，如：过冷，过热，过干，强烈震荡等等
2：化学因素，如：酸碱度，重金属，尿素，巯基乙醇，亚硫酸钠等有机化合物
分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。
而分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。 常用的波长范围为：(1)200～400nm的紫外光区,(2)400～760nm的可见光区,(3)2.5～25μm（按波数计为4000cm<-1>～400cm<-1>）的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。 单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比，其关系如下式： 1 A=log — =ECL T 式中 A 为吸收度； T 为透光率； E 为吸收系数，采用的表示方法是(E1％ 1cm),即吸收度换算成溶液浓度为1％(g/ml)，液层厚度为1cm的数值； C 为100ml溶液中所含被测物质的重量，g(按干燥品或无水物计算）； L 为液层厚度 ，cm。 物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后,可用同样条件将该供试品配成溶液，测定其吸收度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收,但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多，且常使用单色光纯度较差的仪器，故测定时应用标准品或对照品同时操作。
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
分光光度计的简单原理
分光光度计计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
核酸的定量
核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。
事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。
除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如A260/A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A320一般是0。
蛋白质的直接定量（UV法）
这种方法是在280nm波长，直接测试蛋白。选择Warburg 公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质，一般要消除320nm 的“背景”信息，设定此功能“开”。与测试核酸类似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，最佳的线性范围在1.0-1.5 之间。实验中选择Warburg 公式显示样品浓度时，发现读数“漂移”。这是一个正常的现象。事实上，只要观察A280的吸光值的变化范围不超过1%，表明结果非常稳定。漂移的原因是因为Warburg 公式吸光值换算成浓度，乘以一定的系数，只要吸光值有少许改变，浓度就会被放大，从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说，速度快，操作简单；但是容易受到平行物质的干扰，如DNA的干扰；另外敏感度低，要求蛋白的浓度较高。
比色法蛋白质定量
蛋白质通常是多种蛋白质的化合物，比色法测定的基础是蛋白质构成成分：氨基酸（如酪氨酸，丝氨酸）与外加的显色基团或者染料反应，产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关，从而反应蛋白质浓度。
比色方法一般有BCA，Bradford，Lowry 等几种方法。
Lowry 法：以最早期的Biuret 反应为基础，并有所改进。蛋白质与Cu2 反应，产生蓝色的反应物。但是与Biuret 相比，Lowry 法敏感性更高。缺点是需要顺序加入几种不同的反应试剂；反应需要的时间较长；容易受到非蛋白物质的影响；含EDTA，Triton x-100，ammonia sulfate 等物质的蛋白不适合此种方法。
BCA（Bicinchoninine acid assay）法：这是一种较新的、更敏感的蛋白测试法。要分析的蛋白在碱性溶液里与Cu2 反应产生Cu ，后者与BCA形成螯合物，形成紫色化合物，吸收峰在562nm波长。此化合物与蛋白浓度的线性关系极强，反应后形成的化合物非常稳定。相对于Lowry法，操作简单，敏感度高。但是与Lowry法相似的是容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。
Bradford 法：这种方法的原理是蛋白质与考马斯亮兰结合反应，产生的有色化合物吸收峰595nm。其最大的特点是，敏感度好，是Lowry 和BCA 两种测试方法的2 倍；操作更简单，速度更快；只需要一种反应试剂；化合物可以稳定1小时，方便结果；而且与一系列干扰Lowry，BCA 反应的还原剂（如DTT，巯基乙醇）相容。但是对于去污剂依然是敏感的。最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大，无可比性。
某些初次接触比色法测定的研究者可能为各种比色法测出的结果并不一致，感到迷惑，究竟该相信哪种方法？由于各种方法反应的基团以及显色基团不一，所以同时使用几种方法对同一样品得出的样品浓度无可比性。例如：Keller等测试人奶中的蛋白，结果Lowry，BCA 测出的浓度明显高于Bradford，差异显著。即使是测定同一样品，同一种比色法选择的标准样品不一致，测试后的浓度也不一致。如用Lowry测试细胞匀浆中的蛋白质，以BSA作标准品，浓度1.34mg/ml，以a球蛋白作标准品，浓度2.64mg/ml。因此，在选择比色法之前，最好是参照要测试的样本的化学构成，寻找化学构成类似的标准蛋白作标准品。另外，比色法定量蛋白质，经常出现的问题是样品的吸光值太低，导致测出的样品浓度与实际的浓度差距较大。关键问题是，反应后1011分光光度计的重要配件—— 比色杯的颜色是有一定的半衰期，所以每种比色法都列出了反应测试时间，所有的样品（包括标准样品），都必须在此时间内测试。时间过长，得到的吸光值变小，换算的浓度值降低。除此，反应温度、溶液PH值等都是影响实验的重要原因。此外，非常重要的是，最好是用塑料的比色法。避免使用石英或者玻璃材质的比色杯，因为反应后的颜色会让石英或者玻璃着色，导致样品吸光值不准确。
细菌细胞密度（OD 600）
实验室确定细菌生长密度和生长期，多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验，需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度。OD600是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。以未加菌液的培养液作为空白液，之后定量培养后的含菌培养液。为了保证正确操作，必须针对每种微生物和每台仪器用显微镜进行细胞计数，做出校正曲线。实验中偶尔会出现菌液的OD值出现负值，原因是采用了显色的培养基，即细菌培养一段时间后，与培养基反应，发生变色反应。另外，需要注意的是，测试的样品不能离心，保持细菌悬浮状态。
分光光度计的重要配件—— 比色杯
比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根据不同的测量体积，有比色杯和毛细比色杯等。一般测试核酸和紫外定量蛋白，均采用石英杯或者玻璃杯，但是不适合比色法测定。因为反应中的染料（如考马斯亮兰）能让石英和玻璃着色，所以必须采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不适合用于在紫外范围内测试样品。
由于另外测试的样品量不同，所以一般分光光度计厂家提供不同容积的比色杯以满足用户不同的需求。目前市场已经存在一种既可用于核酸、紫外蛋白质定量，亦可用于蛋白比色法测定的塑料杯，样品用量仅需50μl，比色杯单个无菌包装，可以回收样品。如Eppendorf UVette塑料比色杯，是目前比色杯市场上一个革新。随着生命科学以及相关学科发展，对此类科学的实验研究提出更高的要求，分光光度计将是分子生物学实验室不可缺少的仪器，也成为微生物、食品、制药等相关实验室的必备设备之一。
随着科技的发展，现在比色杯已经不是使用分光光度计时的必备物品。目前国外Nanodrop公司（现已被Thermo Fisher公司收购）生产的ND1000分光光度计与旧式分光光度计相比，已经可以做到无需稀释样品，无需使用比色杯，每次测量仅需1-2μl样品即可完成测量。
