常有的蛋白浓缩方法有哪些

原理：蛋白质通过盐析的办法沉淀的原理是降低蛋白质的溶解度，使蛋白质凝聚而从溶液中析出。

蛋白质分子聚集而从溶液中析出的现象，称为蛋白质的沉淀。由于水化层和双电层的存在，蛋白质溶液是一种稳定的胶体溶液。如果向蛋白质溶液中加入某种电解质，以破坏其颗粒表面的双电层或调节溶液的pH，使其达到等电点，蛋白质颗粒因失去电荷变得不稳定而将沉淀析出。

蛋白沉淀法是毒物分析过程中对生物样品进行前处理的一种常用方式。对于富 含蛋白质的检材，在进行分离、提取时要将 大量干扰测定的蛋白质沉淀除去，使待测毒 物仍留存于溶液中。

操作时一般要先将检材组织磨碎，然后再加入蛋白沉淀剂进行蛋白质沉淀，组织中的蛋白质与沉淀剂形成疏松的絮状沉淀物，而毒物则留在溶液中。

扩展资料：

有机溶剂易使蛋白质或酶变性，常采用降低温度的方法进行有效控制， 而且有机溶剂使用量大，溶剂的使用及回收；储存都比较困难或 麻烦。 盐析法：盐析法简单方便，可用于蛋白质抗原的粗提、丙种 球蛋白的提取、蛋白质的浓缩等。

盐析法提纯的抗原浓度不高，只用于抗原的初步纯化。 金属离子沉淀法纯度高,太耗电，沉淀效果很好，容易使生物分 子变性，复合物难分解。

选泽性变性沉淀法：溶解度下降、粘度 增加、紫外线吸收增加、侧链反应增强、对酶的作用敏感，易被 水解 （这就是为何蛋白类食品在被加热至变性后人体对其中氨基 酸的吸收。能力增强） 等电点沉淀法无机酸会引起较大的蛋白质不可逆变性的危险等电点装置复杂,也比较纯。

蛋白质变性指在某些物理和化学因素如热、有机溶剂、重金属离子、生物碱试剂等作用下，蛋白质特定的空间构象被破坏，也即有序的空间结构变成无序的空间结构，从而导致其理化性质改变和生物活性的丧失。

参考资料：百度百科——蛋白沉淀法

糖链抗原72-4——检查项目的不适宜人群：

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糖链抗原72-4——检查项目的注意细节：

CA72-4对诊断胃癌的特异性优于糖链抗原19-9和CEA。

糖链抗原72-4——检查项目的一般步骤：

本法分三个步骤，即抗原与抗体反应、B和F分离和放射性测定。

（1）抗原与抗体反应：将标本（非标记抗原）、标记抗原和抗血清顺序定量加入小试管内，置室温（15～30℃）作用24h，使其充分竞争结合。

（2）B、F分离：分离技术多种多样，常用沉淀法。①第二抗体沉淀法：又称双抗体法，在受检抗原与第一抗体特异性反应后加入相应的第二抗体，使形成的抗原-第一抗体-第二抗体的复合物共沉，一经离心即可使结合标记抗原B与游离抗原F分离。本法是特异性沉淀，分离完全，非特异性结合力低。但第二抗体用量较大，成本较高。此外血清浓度、抗凝剂的有无因素可在一定程度上影响结果。②聚乙二醇（PEG）沉淀法：使蛋白质处于等电点状态，水化层破坏而导致蛋白质沉淀。本法优点是PEG制备方便、价廉、分离快速，缺点是非特异沉淀物较多，分离不完全。③第二抗体-聚乙二醇沉淀法：本法既有PEG法的快速沉淀优点，且保持第二抗体特异性沉淀的作用，又减少第二抗体用量，并降低PEG浓度，使非特异沉淀物减少。④活性炭吸附法：利用活性炭表面活性将小分子的游离部分吸附。如在活性炭表面涂上一层葡聚糖，使它表面具有一定孔径的网眼，从而允许小分子游离抗原或半抗原逸入而被吸附，而大分子复合物则被排斥在外。在抗原与抗体反应后，加入葡聚糖-活性炭，放置5～10min，使游离抗原吸附在活性炭颗粒上，离心使颗粒沉淀，上清液中含有结合的标记抗原。

（3）放射性强度测定：B和F分离后，即可测定其放射性强度。测量仪器有两类：液体闪烁计数仪（测β射线）和晶体闪烁计数仪（测γ射线）。计数单位是探测器输出的电脉冲数，单位为cpm（脉冲数/min）。

每次测定均需作一标准曲线图，以标准抗原的不同浓度为横坐标，以测到的相应放射性强度为纵坐标作图。放射性强度可任选B或F，亦可采用计算值B/B＋F、B/F或B/B0。标本应作双份测定，取其平均值，在标准曲线上查出相应的受检抗原浓度。

1．抗原一抗体反应

将抗原(标准品和受检标本)、标记抗原和抗血清按顺序定量加入小试管中，在一定温度下反应一定时间，使竞争抑制反应达到平衡。不同质量的抗体和不同含量的抗原对温育的温度和时间有不同的要求。

2．B、F分离技术

在RIA反应中，标记抗原和特异性抗体的含量极微，形成的结合态标记抗原(B)不能自行沉淀，因此需用一种合适的沉淀剂使它彻底沉淀，以完成与游离标记抗原(F)的分离。另外对小分子量的抗原也可采取吸附法使B与F分离。

(1)第二抗体沉淀法 这是RIA中最常用的一种沉淀方法。将产生特异性抗体(第一抗体)的动物(例如兔)的IgG，制得羊抗兔IgG血清(第二抗体)。由于在本反应系统中采用第一、第二两种抗体，故称为双抗体法。在抗原与特异性抗体反应后加入第二抗体，形成由抗原一第一抗体一第二抗体组成的双抗体复合物。但因第一抗体浓度甚低，其复合物也极少，无法进行离心分离，为此在分离时加入一定量的与第一抗体同种动物的血清或Ig，使之与第二抗体形成可见的沉淀物。与上述抗原的双抗体复合物形成共沉淀。经离心即可使含有结合态标记抗原(B)的沉淀物沉淀，与上清液中的游离标记抗原(F)分离。

(2)聚乙二醇(PEG)沉淀法 最近各种RIA反应系统逐渐采用了PEG溶液代替第二抗体作沉淀剂。PE(；沉淀剂的主要优点是制备方便，沉淀完全。缺点是非特异性结合率比用第二抗体高，且温度高于30~C：时沉淀物容易复溶。

此外，B、F分离技术还有PR试剂法和活性炭吸附法等。．

3．放射性强度的测定

B、F分离后，即可进行放射性强度的测定。测量仪器有两类，即液体闪烁计数仪和晶体闪烁计数仪。

计数单位是探测器输出的电脉冲数，单位为cpm(计数／min)，也可用cps(计数／s)表示。如果知道这个测量系统的效率，还可算出放射源的强度，即dpm(衰变／min)或dps(衰变／s)。

每次测定均需作标准曲线图，以标准抗原的不同浓度为横坐标，以在测定中得到的相应放射性强度为纵坐标作图。放射性强度可任选B或F，也可用计算值B／(B+F)、B／F和B／B0。标本应作双份测定，取其平均值，在制作的标准曲线上查出相应的受检抗原浓度。

(二)固相放射免疫测定方法(以双层非竞争法为例)

1．抗体的包被

先将抗体吸附于固相载体表面，制成免疫吸附剂。常用的固相载体为聚苯乙烯，形状有管、微管、小圆片、扁圆片和微球等。还可根据自己的工作设计新的形状，以适应特殊的需要。

2．抗原抗体反应

免疫吸附剂与标本一起温育时，标本中的抗原与固相载体上的抗体发生免疫反应。当加入标记的抗体后，由于抗原有多个结合点，又同标记抗体结合，最终在固相载体表面形成抗体一抗原一标记抗体免疫复合物。

3．B、F分离

用缓冲液洗涤除去游离的标记抗体，使B、F分离。

4．放射性强度的测定

测定固相所带的放射性计数率(cpm)：设样品cpm值为P，阴性对照标本cpm值为N，P／N≥2．1为阳性反应。标本中的抗原越多，最终结合到固相载体上的标记抗体越多，其pm值也就越大；反之则小。当标本中不存在抗原时；其cpm值应接近于仪器的本底计数。