纯化dna的方法有哪些
纯化DNA的常用方法是用酚抽提-乙醇沉淀法，适用于普通实验室操作。它通过交替使用苯酚、氯仿两种不同的蛋白质变性剂，可以增加去除蛋白质杂质的效果；氯仿可以去除核酸溶液中的微量酚，还可以加快有机相与液相混合，去除色素和蔗糖；在氯仿中加入少量的异戊醇可以减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。
【实验材料】
待纯化的DNA溶液。
【实验仪器】
高压灭菌锅，涡旋混匀器，台式高速冷冻离心机
【试剂配制】
1、Tris饱和酚（pH8.0）：氯仿：异戊醇混合液
酚：氯仿：异戊醇按体积比25：24：1配制，现配现用。
2、氯仿：异戊醇混合液
氯仿：异戊醇按体积比24：1配制，现配现用。
3、醋酸钠溶液
配制3 mol／L的醋酸钠溶液，调节pH值至5.2。
4、TE缓冲液
10 mmol／L Tris·HCl（pH 8.0），1 mmol／LEDTA（pH 8.0），配制完成后高压灭菌，4 ℃保存。
【实验步骤】
1、在待纯化的DNA溶液中加等体积的酚：氯仿：异戊醇混合液，然后在涡旋混匀器上充分混匀。
2、将混合物12000 r／min离心10 min后，移取上层含DNA的水相到另一离心管中。如果在水相和有机相交界处有白色沉淀物，则需要重新抽提水相，直到两相交界处无明显沉淀物。
3、向上层水相中加入等体积的氯仿：异戊醇（24：1）混合液，在涡旋混匀器上充分混匀后12000 r／min离心10 min。
4、移取上层含DNA的水相到另一离心管中，加1／10体积的醋酸钠溶液，充分混匀，再向管中加入2.5倍体积的预冷无水乙醇，上下倒置混匀，于-20 ℃保存30 min。
5、12000 r/min离心5 min，弃上清液；75%的乙醇12000 r/min离心洗涤5 min，弃上清液；用吸头将管壁残留的乙醇去除，室温干燥10-15 min（不要等DNA沉淀完全干燥，否则DNA不易溶解）。
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6、在盛有干燥DNA的离心管中加入适量TE缓冲液，溶解后在-20 ℃以下长期保存。
可以这么说，先使用95%酒精和醋酸钠或异丙醇洗涤，之后用75%酒精洗涤，目的是洗去加入的盐，乙醇浓度太高达不到脱盐效果，太低DNA会融掉，异丙醇沉淀以后有人用无水乙醇洗一遍，目的是加速DNA的干燥，因为异丙醇的挥发性没有乙醇好 ，
主要目的还是为了除盐，前面沉淀DNA时加入的盐会影响你后续的克隆操作，如酶切和PCR
在质粒DNA的制备中，无水乙醇起到沉淀DNA继而达到浓缩DNA的目的，70%的乙醇是用来洗涤DNA的，进一步去除杂质。
在除去蛋白质沉淀后，要加入无水乙醇使质粒沉淀，离心除去上清，再加入70%乙醇清洗DNA沉淀，清洗两次左右。最后要把DNA沉淀溶于TE或ddH2O中。
扩展资料：
1、 测量DNA溶液的体积，按lg/ml的用量精确地加入固体CsCl, 将溶液加温至30℃助溶。温和地混匀溶液直到盐溶解。
2、 每10mlDNA溶液加入0.8ml溴化乙锭溶液（10mg/ml溶于水）；立即将溴化乙锭溶液（漂浮在表层）与DNA－氯化铯溶液混匀， 溶液的终密度应为1.55g/ml（溶液的折射率为1.3860）溴化乙锭浓度大约740μg/ml。【溴化乙锭贮存液应贮存于避光容器内（如用锡箔完全包裹的瓶子），于室温保存。
参考资料来源：百度百科-质粒DNA纯化
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核酸不溶于乙醇，所以可以使用乙醇对核酸进行漂洗，使残留的杂质溶解于乙醇，并最终通过离心去除。可总结为去除DNA中的残留杂质（对混杂的RNA无效）。
提取时，保证核酸一级结构的完整性；核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。
扩展资料：
通常与已知分子量的标准DNA片段一起电泳，经比较可获知DNA标本大小。如条带拖尾，系加入DNA量太多或凝胶未制好。若DNA分子量小或一片模糊，表明DNA有降解。
破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。
