三氯乙酸沉淀蛋白质是否可逆
三氯乙酸沉淀蛋白质不可逆。
三氯乙酸在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐,作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变,暴露出较多的疏水性基团,使之聚集沉淀。
三氯乙酸用作化学试剂、蛋白质沉淀及色谱分析试剂;三磷酸腺苷、细胞色素丙和胎盘脂多糖提取剂和农药除草剂;是杀虫剂毒死蜱的中间体,也是医药中间体;是医药上的除疣剂和收敛剂。
三氯乙酸沉淀蛋白方法:
加1/4体积的 TCA+DOC于蛋白质组分(置1.5-ml聚丙烯微量离心管中),至TCA的终浓度为20%(w/v),震荡混合,冰上解育20~30 min。
微型离心机,室温离心15 min。沉淀物如可见,为粘稠的带黄褐色的胶状物。用一精细的巴氏吸管吸出上清。努力除去尽可能多的上清。如取100ul样品进行沉淀,沉淀物将是可见的。
加3倍体积原样品体积的丙酮(室温),样品在室温下静置约10min,使TCA+DOC溶于丙酮。
室温离心15min,其时,沉淀物的大小和物理特性类似于一点灰尘。约10ug或更多一点的蛋白质即可看见。有时,会得到白色的盐类(如KCl等)沉淀物。
用极精细的巴氏吸管移去上清。沉淀物置冰上干燥10 min(敞开1.5-ml离心管的盖)。干燥的沉淀物可长时间(>1 个月)地保存于-20℃。
三氯乙酸沉淀蛋白质不可逆。
在酸性条件下,与蛋白质形成不溶性盐而沉淀下来;与蛋白质分子内部的疏水基团作用,使之暴露出来,造成蛋白质变性,从而相互凝聚沉淀下来。
随着蛋白质分子量的增大,其结构复杂性与致密性越大,TCA可能渗入分子内部而使之较难被完全除去,在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片,而且随时间的延长这一作用愈加明显。
三氯乙酸沉淀蛋白原理:
① 在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐。
② 作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变,暴露出较多的疏水性基团, 使之聚集沉淀。
③ 随着蛋白质分子量的增大,其结构复杂性与致密性越大,TCA 可能渗入分子内部而使之较难被完全除去,在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片,而且随时间的延长这一作用愈加明显。
1、硫酸锌沉淀蛋白质原理是:加入硫酸锌沉淀蛋白质是因为蛋白质与重金属盐发生化学反应生成不溶于水的物质。
2、三氯乙酸沉淀蛋白质的原理是:在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐;作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变,暴露出较多的疏水性基团,使之聚集沉淀。
三氯乙酸是强酸,铅离子是重金属,这2者均可以使蛋白质变性沉淀。