hplc现在有用乙醇做流动相的吗

甲醇的活性也较大(容易与体内反应,

故毒性比较大),

但甲醇的极性(polarity)较大,

容易带走你要分离的小分子,

若改用乙醇为流动相,

会产生下列情况:

待测物流动缓慢,

RP-HPLC分析时间较长,

实验时间增加.

但若甲醇分析的结果不理想(化合物分离不完全时),

则可能是甲醇极性过高,

仪器可分析时间过短

此时用乙醇可得到较为清晰的结果

希望能对你有帮助

（1）先粗略配样品溶液，进一针，选好柱子（对极性保留强点的，保留时间至少要在3-4min左右，与溶剂峰分开），选择GC条件

（2）选择峰形正常，且峰面积适宜的样品浓度（粗略的），然后精确配制样品溶液2-3份

（3）再配标准溶液，浓度跟你的样品浓度相近，若与样品相差太大就会测的不准，且配制要尽量准确，配制2份

（4）然后就测含量，把用容量瓶配好的标准溶液和样品溶液每个进两针，然后计算就可以了。

液相色谱的话，要选对极性物质保留强的柱子（可以查安捷伦的手册），粒径小或柱子长的。比较麻烦且不太准，因为保留极小，受流动相和杂质影响大，误差大。

HPLC是高效液相色谱，英文全称是High Performance Liquid Chromatography。该方法在化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中被用来做重要的分离分析技术。

用途：高效液相色谱更适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质，因而广泛应用于核酸、肽类、内酯、稠环芳烃、高聚物、药物、人体代谢产物、表面活性剂，抗氧化剂、杀虫剂、除莠剂的分析等物质的分析。

原理：高效液相色谱以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析和分离。

操作方法：如下图所示，溶剂贮器中的流动相被泵吸入，经梯度控制器按一定的梯度进行混合然后输出，经测其压力和流量，导入进样阀（器）经保护柱、分离柱后到检测器检测，由数据处理设备处理数据或记录仪记录色谱图，馏分收集器收集馏分，废液瓶收集废液。

液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。

HPLC根据固定相和流动相的成分分为正相色谱和反向色谱。

正相色谱法

采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。

反相色谱法

一般用非极性固定相（如C18、C8)；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。RPC在现代液相色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。

原理：

储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别。

被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据就可以以图谱形式打印出来，以便研究人员分析。

扩展资料：

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。

①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。

②高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。

③高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。

④高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。

⑤应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。

⑥柱子可反复使用：用一根柱子可分离不同化合物

⑦样品量少、容易回收：样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。

此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，但也有缺点，与气相色谱相比各有所长，相互补充。

高效液相色谱的缺点是有“柱外效应”。在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。

HPLC使用的色谱柱是很细的(1~6 mm)，所用固定相的粒度也非常小（几μm到几十μm)，所以流动相在柱中流动受到的阻力很大，在常压下，流动相流速十分缓慢，柱效低且费时。

为了达到快速、高效分离，必须给流动相施加很大的压力，以加快其在柱中的流动速度。为此，须用高压泵进行高压输液。高压、高速是高效液相色谱的特点之一。HPLC使用的高压泵应满足下列条件：

a. 流量恒定，无脉动，并有较大的调节范围（一般为1~10 mL/min)；

b. 能抗溶剂腐蚀；

c. 有较高的输液压力；对一般分离，60×10^5Pa的压力就满足了，对高效分离，要求达到150~300×10^5Pa。

⑴往复式柱塞泵

当柱塞推入缸体时，泵头出口（上部）的单向阀打开，同时，流动相进入的单向阀（下部）关闭，这时就输出少量的流体。

反之，当柱塞向外拉时，流动相入口的单向阀打开，出口的单向阀同时关闭，一定量的流动相就由其储液器吸入缸体中。这种泵的特点是不受整个色谱体系中其余部分阻力稍有变化的影响，连续供给恒定体积的流动相。

⑵气动放大泵

其工作原理是：压力为 p1 的低压气体推动大面积（ SA ）活塞A ，则在小面积（ SB ）活塞 B 输出压力增大至 p2 的液体。压力增大的倍数取决于 A 和 B 两活塞的面积比，如果 A 与 B 的面积之比为 50 : 1 ，则压力为 5 × Pa 的气体就可得到压力为 250×Pa 的输出液体。这是一种恒压泵。

参考资料：百度百科——高效液相色谱

要是不用算折干的就不用扣除水分了

外标法分为工作曲线法和外标一点法。当标准曲线过原点，就可以用外标一点法（直接对照法），当标准曲线不过原点是就用工作曲线法（外标二点法）。一般做出来的标准曲线都不过原点，所以笼统的用直接对照法的公式会给数据造成很大的误差的

c=1438.9X50/1066.9=67.43 μg/ml

假设样品浓度为a μg，则第一次用稀乙醇稀释后的浓度为 a/50 μg/ml

10 ml的滤液则含有样品a/5 μg

则第二次流动相稀释后浓度变为 a/125 μg/ml

此时的浓度便是进样浓度，a/125=67.43，算出a=8.429 mg

样品含量为8.429mg/1.9423gX100%=0.434%

望采纳，谢谢

气相色谱定量检测一般就两种，一个是外标法，一个是标法，对于没有标准物质的，就只能靠容面积归一法粗略定量。

通过对人类和环境有影响的各种物质的含量、排放量的检测，跟踪环境质量的变化，确定环境质量水平，为环境管理、污染治理等工作提供基础和保证。简单地说，了解环境水平，进行环境监测，是开展一切环境工作的前提。

HPLC根据固定相和流动相的成分分为正相色谱和反向色谱。

正相色谱法

采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。

1、如果流动相中有乙醇成分，一定要使用色谱纯。

2、如果流动相中没有乙醇成分，可以使用分析纯。

3、配制样品用的乙醇由于进入色谱系统的量不是很大，理论上对色谱系统的影响可以忽略，所以可以使用分析纯，但如果流动相中有乙醇成分则一定要使用色谱纯，否则对色谱系统的影响不能忽略。

色谱纯一般是指色谱专用溶剂或者试剂，在低波长处的透光率比较好。色谱纯是指进行色谱分析时使用的标准试剂，在色谱条件下只出现指定化合物的峰，不出现杂质峰。质量指标注重干扰液相色谱峰的杂质。主成分含量高。

分析是化学试剂的纯度规格，属于二级品，标签为金光红，用于重要分析和一般性研究工作。分析纯纯度略低于优级纯，杂质含量略高于优级纯，适用于重要分析和一般性研究工作，如一般实验室、研究所等地方常用试剂。常以AR表示。