为什么硫酸铵沉淀法纯化蛋白质中利用固体硫酸铵而不用硫酸铵溶液？
用硫酸铵沉淀法纯化蛋白质，利用固体硫酸铵，而不用硫酸铵溶液，是因为固体硫酸铵效率比硫酸铵溶液效率高得多。
总硫酸铵沉淀法纯化蛋白质采用的是盐析法。当硫酸铵溶液达到饱和时，蛋白质大量析出。采用硫酸铵，因为不含有水，可以很快达到饱和度，从而使蛋白质析出。而采用硫酸铵溶液，会带入大量的水，即使能够使蛋白质析出，因为硫酸铵溶液带入的大量的水，也会导致溶液大量稀释，使析出效率大大降低。因此，必需使用无水的固体氯化铵作为析出剂。
包和硫酸铵多抗纯化原理：高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。
这相当于是蛋白质胶体发生盐析，从而可以分离出来。
蛋白质分离主要根据五种原理：
分子大小、溶解度、电荷、吸附性质、对配体分子的生物学亲和力等。
一、根据分子大小不同的纯化方法
透析和超过滤：
透析是利用蛋白质分子不能通过半透膜的性质，使蛋白质和其它小分子物质分开。常用的半透膜是玻璃纸或称赛璐玢纸、火棉纸和其它改型纤维素材料。
2.密度梯度离心；
3.凝胶过滤；
二、利用溶解度差别的纯化方法
1.等电点沉淀和pH控制；
2.蛋白质的盐溶和盐析；
3.有机溶剂分级分离法；
4.温度对蛋白质溶解度的影响；
三、根据电荷不同的纯化方法
1.电泳；
2.聚丙烯酰胺凝胶电泳；
3.毛细管电泳；
4.等电聚焦；
5.层析聚焦；
6.离子交换层析；
四、利用选择性吸附的纯化方法
1.羟磷灰石层析；
2.疏水作用层析；
五、利用对配体的特异性生物学亲和力的分离纯化
六、高效液相层析和快速蛋白质液相层析
两次冰浴？我只知道在加硫酸铵时候应该在冰上进行。低温防止酶变性失活。
还有冰浴吗？在4°C离心的。沉淀溶解后要进行透析的。也应该在冰上进行。就是这样。
