酚氯仿抽提DNA体系后出现的现象及成因,沉淀DNA时为什么要用无水乙醇
酚氯仿抽提DNA后,会使溶液分层,上层为水相,含有DNA;中间为蛋白(有时看不到);下层为有机相。
原因是酚氯仿可以使蛋白质变性,从而从溶液中析出,但是蛋白密度会小于酚氯仿,所以离心后它分布在中间;而DNA溶于水而不溶于有机相。
沉淀DNA用无水乙醇,是因为DNA不溶于乙醇,而乙醇可以夺取水,从而使得DNA聚集沉淀,如果用乙醇沉淀的话一定要用2倍以上的无水乙醇。
也可以用异丙醇沉淀。
1.DNA不溶于乙醇
2.乙醇可以吸附水分子(极性相同),使得溶液中相对的水分子减少,增大了DNA在水中的相对浓度.
3.附:乙醇沉淀DNA需要盐离子,用金属离子屏蔽DNA上磷酸的负电荷,降低DNA分子间的斥力,才能沉淀完全.
换句话就是DNA这个比较娇贵。
乙醇比较柔和,所以用乙醇。
DNA washing buffer 中为什么要加无水乙醇,是为了维持DNA的沉淀状态,把DNA沉淀上附着表面的一些盐如LiCl、NaCl等溶解去除.
脱氧核糖核酸(英语:Deoxyribonucleic acid,缩写为DNA)又称去氧核糖核酸,是一种分子,双链结构,由脱氧核糖核苷酸(成分为:脱氧核糖及四种含氮碱基)组成。可组成遗传指令,引导生物发育与生命机能运作。
主要功能是长期性的资讯储存,可比喻为“蓝图”或“食谱”。其中包含的指令,是建构细胞内其他的化合物,如蛋白质与RNA所需。