请问“酚：水”作为纸层析中的展开剂时，酚指的是哪种酚啊

在苯酚硫酸钠溶液中，天冬氨酸、甘氨酸和脯氨酸的迁移顺序是：天冬氨酸（最下面）、甘氨酸（中间）、脯氨酸（最上面）。如果使用 FeCl3 溶液，则迁移顺序是：脯氨酸（最下面）、甘氨酸（中间）、天冬氨酸（最上面）。

在纸层析法中，用来比较天冬氨酸、甘氨酸和脯氨酸迁移顺序的试剂通常是苯酚硫酸钠溶液（FeCl3 溶液也可以）。溶液中的铁离子会与这三种氨基酸中的硫酸根结合形成复合物，从而改变这三种氨基酸的电荷，从而影响它们在纸上的迁移速率。

具体来说，在苯酚硫酸钠溶液中，天冬氨酸的电荷比较小，它的迁移速率较快，因此它会在纸上向下迁移，在最下面。脯氨酸的电荷比较大，它的迁移速率较慢，因此它会在纸上向上迁移，在最上面。而甘氨酸的电荷介于两者之间，它的迁移速率也在两者之间，因此它会在中间。

纸层析分离氨基酸时，有的氨基酸几乎静止不动的原因：纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。当有机相流经固定相时，物质在两相间不断分配而得到分离。

溶质在滤纸上的移动速度用Rf值表示：Rf=原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离，在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构，性质，溶剂系统，层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。

氨基酸纸层析法

中指的是在蛋白质氨基酸的组成分析中引入了纸层析分析的技术，使氨基酸分析获得了决定性的进展。在滤纸纤维上吸附着一层水保持成为固定相，另一部分是能溶于水的有机溶剂，如苯酚或正丁醇作为流动相，它沿着滤纸长的方向向上或向下流动。

1、在滤纸条上端边缘约1厘米的中央剪一小孔。

2、将滤纸条平放于洁净的纸上，在距离滤纸下端25px处用铅笔轻画一横线，并在横线的中央画一直径为2mm的小圆圈。

3、用毛细管吸取氨基酸混合液，在滤纸条下端的小圆圈内点样。

4、取干燥大试管，加入被水饱和的酚溶液10ml，注意勿使溶液沾到试管壁上，将试管垂直固定在距滤纸条下端12.5px处穿大头针。从滤纸条上端小孔处穿棉线并左右分开，调节线的高度使滤纸垂直悬于试管内且下湍浸入溶液12.5px，注意勿使点样点浸入溶液中，亦勿使滤纸条接触试管壁。

5、此时即可看到溶剂向上移动，溶剂升到一定高度时，小心将纸条取出，以铅笔标出溶剂上升的前沿。

6、将滤纸条两端，用大头针钉在小木框上，吹干后用喷雾器均匀地喷一层0.2%茚三酮乙醇溶液，然后再将滤纸条吹干，即可看到纸上显出三色点，每个色点代表一种氨基酸。

在层析时，将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配，由于分配系数不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。

纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动。

扩展资料：

在滤纸纤维上吸附着一层水保持成为固定相，另一部分是能溶于水的有机溶剂，如苯酚或正丁醇作为流动相，它沿着滤纸长的方向向上或向下流动。

氨基酸的亲脂性愈强，则与有机溶剂一起移动的倾向愈大氨基酸的亲水性愈强，则被保留在固定相中的趋势愈大。

以纸为载体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。

当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离（Rf值）与已知样比较，进行定性。

用斑点扫描仪或将组分点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量（如光度法、比色法等）。

参考资料来源：百度百科-氨基酸纸层析法

百度百科-纸层析法

主要是为了防止层析后氨基酸斑点过度扩散和重叠，吹风温度不宜过高，否则斑点变黄。

在蛋白质氨基酸的组成分析中引入了纸层析分析的技术，使氨基酸分析获得了决定性的进展。在滤纸纤维上吸附着一层水保持成为固定相。

另一部分是能溶于水的有机溶剂，如苯酚或正丁醇作为流动相，它沿着滤纸长的方向向上或向下流动。

扩展资料：

蛋白质水解产物中的氨基酸则分配于这两相之间。氨基酸的亲脂性愈强，则与有机溶剂一起移动的倾向愈大；氨基酸的亲水性愈强，则被保留在固定相中的趋势愈大。

利用待分离物质中不同组分的某些理化性质的差异而建立起来的一种分离技术。所有的层析系统均是由固定相和流动相组成，固定相为固体物质或固定于固体物质上的成分，流动相是可以流动的物质如水和各种溶剂。

1.掌握转氨基作用基本原理

2.掌握氨基酸纸层析的操作技术

二、原理

1.转氨基作用：

2.纸层析法（分配层析），根据不同物质在不同溶剂间的分配系数（某溶质与两种互不相溶的溶剂震荡混合，达到平衡时，该物质在两种溶剂中所溶解的一定的比例）或溶解度不同来达到分离的目的；本实验采用上行纸层析法，茚三酮作为显色剂。

3.表示氨基酸在滤纸上的移动速率：

由公式可知：Rf值越大，溶质分子移动速率越大；反之，移动速率越小。

影响Rf值的因素有二

4. 谷氨酸是酸性氨基酸，即亦为极性氨基酸，亲水性强，在水中溶解度更高；因具有脂肪族侧链，丙氨酸为非极性氨基酸，疏水性强，在苯酚中溶解度更高。

三、操作步骤

（1）转氨基作用

1.取两支小试管（离心管）并分别做好标记（1号、2号），按下表内容依次加入试剂。混匀后，将两管同时置于37℃水浴中保温30min，并常震荡使之反应充分。

2.反应完毕后，每管加入4滴2%醋酸，置于100℃水浴锅中加热5min，蛋白质沉淀。

3.置于离心机中（中心对称原则），3000r/min离心3min；离心去除蛋白质后，将上清液（含所需反应产物）转移至洁净且做好标记的相同试管中，作为纸层析的点样样品。

（2）氨基酸的纸层析（对实验1结果的验证）

1.标记，在滤纸一端1.5cm处用铅笔画一条水平线作起点线，在线上画四个等间隔的4个直径为3mm的小圆圈，并标明序号；注意手指勿接触滤纸面，防止氨基酸留在滤纸面上，影响实验结果美观，甚至产生误差。

2.点样，分别使用四支毛细玻璃管蘸取1号上清液、2号上清液、谷氨酸溶液（标准品）、丙氨酸溶液（标准品），点在小圆圈内；注意勿要使溶液超出圆圈，导致斑点间重合；点样干燥后，重复点一次。

3.层析，点样完全干燥后，将滤纸条上端对折后悬挂于层析缸内的棉线上，使滤纸下端浸入到层析液中而层析液未接触到点样；注意勿使滤纸弯折，导致斑点位置误差、Rf值不精确；放置完毕后，盖紧层析缸盖，等待1h。

4. 显色，层析完毕，取出滤纸，在溶剂达到的前缘处用铅笔画线作记号；滤纸条用吹风机吹干，使层析液蒸发完毕为止；用喷雾器在滤纸条上均匀喷透茚三酮酒精溶液，后将滤纸在烘干机上均匀烘干（烘干后显色），当紫红色斑点完全显色时烘干结束。

5.记录相关数据，计算各斑点的Rf值。

四、结果

Rf值的计算

实际层析图

五、讨论分析

（1）注意事项

1.使用吹风机干燥滤纸时，可用试管夹固定滤纸条，并顺着滤纸条的方向吹风，可有效防止滤纸条晃动幅度过大而使苯酚（层析液）溅至人体。

2.向试管加入试剂时，溶液直接滴入至管底最优，若液滴悬于管壁上，可微微晃动使小液滴落下或大幅晃动使管底溶液直接与其合并。

（2）认识启发

1.在温和条件下，转氨酶可催化加快氨基转移作用，是极其高效的催化剂。

2.通过纸层析法，得到各斑点，可检验溶液内是否含有多种物质，甚至可通过计算Rf值明确溶液内含有何种物质。

六、思考题

（1）分析1号及2号试管各有什么氨基酸？

1.1号试管内同时存在谷氨酸和丙氨酸：一号有两个显色印记，一高一低，且所在高度分别与标准品高度吻合。

2. 2号试管内只含有谷氨酸：2号仅有一个显色印迹，且其所在高度与谷氨酸高度接近。

（2）纸层析法是否不仅可以用于氨基酸的分离和定性，还可以用于定量测定？

是，把紫色斑点剪下后，用硫酸铜乙醇溶液洗脱比色。

（3）Rf值相同的斑点是否为同一物质？

是，Rf值相同或相近的斑点为同一物质。显色后，滤纸条上有明显的两组不同高度的斑点，根据加入的已知材料可知，高度较低的一组物质即为谷氨酸，较高的即为丙氨酸。