甲醇和冰乙酸3:1配置固定液作用的原理?为什么现用现配?
1、在实验中使用两种混和的固定液。由于Carnoy首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而称的卡诺氏固定液是效果良好的固定液。
Carnoy固定液(甲醇:冰乙酸=3:l)每次使用前需临时配制,长时间放置影响固定效果,固定时间15分钟至24小时,冰箱、室温均可。
必要时可改变甲醇和冰乙酸的比例,冰乙酸比例增加,利于细胞膨胀、染色体铺展,但易导致细胞破裂、染色体散失。
2、甲醇与冰醋酸(乙酸)能反应生成乙酸甲酯,所以要现配现用
扩展资料:
1、卡诺氏固定液(Carnoy's Fluid/carnoys fixative)适用于一般植物组织和细胞的固定,常用于根尖、花药压片及子房石蜡切片等,有极快的渗透力。
有极快的渗透力,根尖材料固定15—20min即可,花药则需1h左右,此液固定最多不超过24h,固定后用95%酒精冲洗至不含冰醋酸为止;
2、如果材料不马上用,需转入70%酒精中保存。固定液的重要特性是能迅速穿透细胞,将其固定并维持染色体结构的完整性,还要能够增强染色体的嗜碱性,达到优良染色效果。
3、乙酸可用作酸度调节剂、酸化剂、腌渍剂、增味剂、香料等。它也是很好的抗微生物剂,这主要归因于其可使pH降低至低于微生物最适生长所需的pH。
4、甲醇可用作分析试剂,如作溶剂、甲基化试剂、色谱分析试剂。还用于有机合成。
参考资料来源:百度百科-卡诺氏固定液
参考资料来源:百度百科-乙酸
参考资料来源:百度百科-甲醇
乙醇对组织细胞的处理既有固定作用又有脱水作用,乙醇借沉淀作用使蛋白质变性,固定组织以80%~95%浓度为好
冰醋酸:5%水溶液可作固定用。不能沉淀白蛋白,但能沉淀核蛋白。渗透性强,固定快,能使红细胞膨胀而破碎,常与其它液体配合使用。
FAA固定液配制方法:
配方:福尔马林(38%甲醛)、5ml冰醋酸、5ml70%、酒精90ml、5ml甘油(丙三醇)。
将上述液体混合即可。
固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等,较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。
FAA固定液又称酒精醋酸福尔马林混合固定液或AAF、AAF固定液,主要由乙醇(A)、乙酸(A)、甲醛(F)组成,兼有脱水作用。AAF固定液常用于快速脱水和固定以及冷冻切片的快速固定。
扩展资料:
FAA固定液注意事项:
1、AAF固定液对人体有一定的损害,请在通风好的环境下小心操作,避免吸入。
2、固定液pH最好接近用中性,pH范围6~8。
3、组织取材的厚度不同,固定时间也不同,对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。常规活
检组织比较适合的厚度为2~4mm,一般不超过6mm。
4、温度对固定的影响很明显,提高温度可以加速固定作用,但温度不宜过高。
5、取出新鲜组织后,应及时固定,无法及时固定时,应保存于生理盐水中及时送检。
参考资料:百度百科-FAA
⑴迅速渗入组织内杀死细胞,并兼有保存作用。
⑵对于细胞内含物,特别是要研究部分尽可能少产生变化,对于细胞和组织不发生或尽可能少发生膨胀和收缩作用,使其保持与生活时期相似的面貌。
⑶能够获得良好的染色效果。
冰醋酸有以下优点① 价格便宜易买到 配制和保存简
便-且比较稳定-不象其他染色荆那样因受光照和氧气
的髟响而发生变化一以致产生沉淀I@对x染色质着色
力强,显色效果好,物象清晰,利于观察I④ 染色时间一
般在1~2分钟内(若染色过探.可用驳管吸取少许
95 酒精洗击)。由于染色时间短,可避免因久置而弓I
起标幸的变化和离解}@ 不会因去承(晾干)后结晶而
髟响装片的清洁.
如果实施做临时装片的话,注意方式气泡产生应该是首要问题吧,其次动物细胞要加生理盐水,防止细胞破裂,植物细胞就加水就行了,因为有细胞壁的支撑嘛。然后先别将水吸干,在一侧滴上染色剂,用吸水纸在另一旁吸水,这都是常规操作了,稍作注意就行了
如果是做永久装片的话我有一个制水螅的方法
1.波因氏固定液的配制 75毫升苦味酸饱和水溶液中加入25毫升甲醛,在临用时再加入5 毫升冰乙酸。
2.固定 固定水螅时,先在表面皿里面放少量水,然后用吸管把水螅从培养缸中吸出,放在表面皿内。等水螅身体和触手慢慢伸展后,用加热的波因氏液(30~34℃)固定。固定液要多一些,倾倒时要迅速,也可用吸管吸取加热的波因氏液浇射在水螅上,浇射的方向必须从基部到触手端,浇射的时间必须极短,不要把固定液滴入水内,这样水螅才不至于收缩。在波因氏固定液中固定4~8小时。
3.浸入70%乙醇中,每天更换一次70%乙醇,直到洗去标本上因固定液而染上苦味酸的黄色为止。如果需要快一些去色,可以加1~2滴氨水。
如果使用氨水去色,则在黄色除去后,仍应该换两次70%乙醇,以除去氨水的碱性。
4.染色 浸入硼砂洋红染液(配制方法参见本书第836页)中,染24小时。
5.褪色 用1%盐酸乙醇褪色,时间为0.5~1分钟,褪到内部器官能看清楚为止。
6.脱水 依次浸入70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇及无水乙醇。
7.透明 用二甲苯透明。中途更换一次新液,至透明为止。
8.封片 用树胶封片,树胶可以浓一些。
注意事项
1.制作水螅整体装片最重要的步骤是固定,如果这一步骤处理不好,水螅的触手和身体都会收缩,制成的标本就不能使用,所以采取有效的方法来固定是成功的关键。
2. 在制作水螅装片时要非常小心,稍不注意就会弄碎或折断触手,特别在二甲苯中更容易弄碎或折断,所以在整个制作过程中,尽可能少用镊子夹镊,也不宜多次更换盛器,最好只换溶液(如乙醇、二甲苯)不换盛器
3.褪色时,标本不能在盐酸乙醇中停留过久,否则颜色会全部褪尽。
参考一下吧
缓冲液都是为了让细胞不会受太大刺激,导致细胞膜破裂,或者失水什么的,都会影响观察效果
你所说的B液,我不知道是什么,不好意思
生产方式不同:甲醇是用木材干馏法生产的,故甲醇,也叫木醇,现在都是用一氧化碳和氢气提取以后得到的。而乙醇的生产方法是,粮食发酵法、木材水解法、亚硫酸盐法等方式生产的。
应用不同:甲醇主要应用于精细化工,塑料等领域,也是农药、医药的重要原料之一。现在市面上大多数的酒中都基本含有乙醇。在日常生活中使用非常广泛的,可用乙醇制造醋酸、饮料、香精、染料、燃料等。医疗上也常用体积分数为70%~75%的乙醇作消毒剂等,在国防化工、医疗卫生、食品工业、工农业生产中都有广泛的用途。
固定碱 固定酸
Na+ Cl-
K+ SO4=
Ca++ HPO4=
Mg++ RCCOO-
蛋白-
2.不参加缓冲体系起作用的阴离子或阳离子称固定酸或固定碱。
固定碱 固定酸
Na+ Cl-
K+ SO4=
Ca++ RCCOO-
Mg++
(二)如何评价?
首先,上述两个定义中的酸与碱仍是与“酸是阴离子,碱是阳离子”的概念相联系的。因此,改称固定酸为固定阴离子,固定碱为固定阳离子,比较妥当,目前已逐渐采用。其次固定阴离子分两部分为妥,即固定阴离子和缓冲阴离子。因为在实际病例中,固定阴离子增多可能是AG增大类代谢性酸中毒,而缓冲阴离子增多则可能是代谢性碱中毒。这就是说,上述两种定义中,以第二种定义的规定比较更有实用意义,虽然它还不完善。
最后要说明的是阳离子全是“固定的”。因此“固定”二字实无必要,以用阳离子总量这一名词为宜。有的文献称为总碱量,这也是与“阳离子为碱”的旧概念相联系的名称,我们清楚它的含义就不会有什么误解了。