什么是MR试验
MR检查
一、常规MRI检查
高场磁共振成像速度快,组织分辨率高,能直接多方位清晰地分辨不同组织图像,有解剖图谱的美称.头颅图像可清晰的分辨脑灰质、白质等不同的组织结构腹部图像可以清楚的观察肝、胆、胰、脾、肾;脊柱图像可清晰地显示脊髓及马尾神经根骨关节图像可清晰地区分骨皮质、松质、软骨韧带关节间隙等组织结构。
二、磁共振血管成像(MRA)
常规磁共振血管造影(MRA)无需依赖造影,其图像类似于数字血管减影成像(DSA),对比增强MRA利用高压注射器经静脉快速注射顺磁性造影剂,产生明显高信号MRA图像,更加真实反映血管情况。
三、弥散成像与灌注成像
通过计算表面弥散系数(ADC)值和eADC值,反映活体组织弥散程度及组织的灌注并以图像及数据予定性定量显示。临床对梗塞早期及中风预报有极高价值。
四、磁共振水成像(MRH)
可在不用造影剂的情况下,显示含水管腔结构.例如:磁共振胰胆管成像(MRCP)、磁共振尿路成像(MRU)、磁共振椎管水成像(MRM)、磁共振泪管成像等,成像时间短,图像清晰。
五、心脏MRI新技术
黑血、白血及标记技术的应用能清晰地显示心脏的解剖,判断活体心肌功能.常用于先天性心脏病,心肌缺血、心肌病及心脏肿瘤等;冠状动脉成像能清晰的观察冠脉的狭窄情况。
六、磁共振波谱成像(MRSI)
目前唯一能无创伤的探测活体组织化学特性。在许多疾病过程中,代谢改变先于病理形态改变,而MRS对这种代谢改变的潜在敏感度很高,故能提供信息以早期检测病变,并以图像显示,同时提供数据曲线。
七、磁共振脑功能成像(fMRI)
fMRI研究是目前人脑功能开发应用最活跃的领域之一.可以观察视觉、嗅觉、听觉、学习、记忆、推理决策等过程中大脑的活动情况,还可以用于痴呆、精神和心理障碍甚至中医针灸疗效监测等多方面临床应用。
八、张力成像
通过采集多方位数据,可以观察大脑内白质情况和其分布。
九、血流敏感反转恢复技术(Fair)
应用血流敏感反转恢复技术可以在不打造影剂的情况下观察大脑组织的血流供应情况,为经济困难者提供了方便,所以又称为“不打药的灌注”。
十、仿真内窥镜技术
对一些不适合做支气管镜和胃镜肠镜的患者,可以通过采集数据进行后处理采用仿真内窥镜技术很好的显示气管支气管、胃肠道等官腔器官。
十一、全身弥散技术(Diffusion Weighted Imaging,STIR-DWI)
把弥散技术应用于体部MRI检查,其内容包括利用ADC值对肿瘤良恶性的评估,放化疗疗效的评估等。弥散技术的一个特点,就是对病变,特别是恶性肿瘤,转移瘤有很高的敏感性及特异性(依靠ADC值),因此非常适合对肿瘤病人的筛查与肿瘤鉴别。而且弥散序列扫描无需造影剂,也非常适合临床推广。
如果苯含量很少的话直接进就行了,如果是一半一半这种变态含量推荐溶于其他易于分离溶剂稀释,这样就有稀释倍数了.但是要判断好溶剂的出峰时间不能与待测物重合.然后不管你内标外标都可以了. 校正因子:f= (As/ms)/(Ar/mr) 其中As和Ar分别为内标物和对照品的峰面积或峰高,ms和mr分别为加入内标物和对照品的量. 再取各品种项下含有内标物的待测组分溶液进样,记录色谱图,再根据含内标物的待测组分溶液色谱峰响应值. 计算含量:mi=f×Ai/(As/ms) 其中 Ai和As分别为供试品和内标物的峰面积或峰高,ms为加入内标物的量.必要时,再根据稀释倍数、取样量和标示量折算成为标示量的百分含量,或根据稀释倍数和取样量折算成百分含量.
醋里面含有醋酸,所以才会酸,也就是酸性。
乙酸又称醋酸,它是一种有机化合物,乙酸(acetic acid)分子中含有两个碳原子的饱和羧酸,是烃的重要含氧衍生物。分子式C2H4O2,结构 乙酸分子模型简式CH3COOH。
甘氨酸—盐酸缓冲液(0.05mol/L)
x ml 0.2mol/L甘氨酸+y ml 0.2mol/L HCl,再加水稀释至200ml
pH x/ml y/ml pH x/ml y/ml
2.2 50 44.0 3.0 50 11.4
2.4 50 32.4 3.2 50 8.2
2.6 50 24.2 3.4 50 6.4
2.8 50 16.8 3.6 50 5.0
甘氨酸Mr = 75.07,0.2mol/L甘氨酸溶液含15.01g/L
2.甘氨酸—氢氧化钠缓冲液(0.05mol/L)
x ml 0.2mol/L甘氨酸+y ml 0.2mol/L NaOH,加水稀释至200ml
pH x/ml y/ml pH x/ml y/ml
8.6 50 4.0 9.6 50 22.4
8.8 50 6.0 9.8 50 27.2
9.0 50 8.8 10.0 50 32.0
9.2 50 12.0 10.4 50 38.6
9.4 50 16.8 10.6 50 45.5
甘氨酸Mr = 75.07,0.2mol/L甘氨酸溶液为15.01g/L
3.邻苯二甲酸—盐酸缓冲液(0.05mol/L,20℃)
x ml 0.2mol/L邻苯二甲酸氢钾+y ml 0.2mol/L HCl,再加水稀释到20ml
pH x/ml y/ml pH x/ml y/ml
2.2 5 4.670 3.2 5 1.470
2.4 5 3.960 3.4 5 0.990
2.6 5 3.295 3.6 5 0.597
2.8 5 2.642 3.8 5 0.263
3.0 5 2.032
邻苯二甲酸氢钾Mr = 204.23,0.2mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液含40.85g/L
4.柠檬酸—氢氧化钠—盐酸缓冲液
pH Na+浓度
/mol/L 柠檬酸/g
C6H8O7•H2O 氢氧化钠/g
NaOH(97%) 盐酸/ml
HCl(浓) 最终体积/L*
2.2 0.20 210 84 160 10
3.1 0.20 210 83 116 10
3.3 0.20 210 83 106 10
4.3 0.20 210 83 45 10
5.3 0.35 245 144 68 10
5.8 0.45 285 186 105 10
6.5 0.38 266 156 126 10
使用时可以每升中加入1g酚,若最后pH值有变化,再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节,置冰箱保存。
5.磷酸氢二钠—柠檬酸缓冲液
pH 0.2ol/L Na2HPO4/ml 0.1mol/L
柠檬酸/ml pH 0.2mol/L Na2HPO4/ml 0.1mol/L
柠檬酸/ml
2.2 0.40 19.60 5.2 10.72 9.28
2.4 1.24 18.76 5.4 11.15 8.85
2.6 2.18 17.82 5.6 11.60 8.40
2.8 3.17 16.83 5.8 12.09 7.91
3.0 4.11 15.89 6.0 12.63 7.37
3.2 4.94 15.06 6.2 13.22 6.78
3.4 5.70 14.30 6.4 13.85 6.15
3.6 6.44 13.56 6.6 14.55 5.45
3.8 7.10 12.90 6.8 15.45 4.55
4.0 7.71 12.29 7.0 16.47 3.53
4.2 8.28 11.72 7.2 17.39 2.61
4.4 8.82 11.18 7.4 18.17 1.83
4.6 9.35 10.65 7.6 18.73 1.27
4.8 9.86 10.14 7.8 19.15 0.85
5.0 10.30 9.70 8.0 19.45 0.55
Na2HPO4 Mr = 141.98,0.2mol/L溶液为28.40g/L,
Na2HPO4•2H2O Mr = 178.05,0.2mol/L溶液为35.61g/L
C6H8O7•H2O Mr = 210.14,0.1mol/L溶液为21.01g/L
6.柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液(0.1mol/L)
pH 0.1mol/L
柠檬酸/ml 0.1mol/L
柠檬酸钠/ml pH 0.1mol/L
柠檬酸/ml 0.1mol/L
柠檬酸钠/ml
3.0 18.6 1.4 5.0 8.2 11.8
3.2 17.2 2.8 5.2 7.3 12.7
3.4 16.0 4.0 5.4 6.4 13.6
3.6 14.9 5.1 5.6 5.5 14.5
3.8 14.0 6.0 5.8 4.7 15.3
4.0 13.1 6.9 6.0 3.8 16.2
4.2 12.3 7.7 6.2 2.8 17.2
4.4 11.4 8.6 6.4 2.0 18.0
4.6 10.3 9.7 6.6 1.4 18.6
4.8 9.2 10.8
柠檬酸C6H8O7•H2O,Mr = 210.14,0.1mol/L溶液为21.01g/L
柠檬酸钠Na3C6H5O7•2H2O,Mr = 294.12,0.1mol/L溶液为29.41g/L
7.乙酸—乙酸钠缓冲液(0.2mol/L,18℃)
pH 0.2mol/L
NaAc/ml 0.2mol/L
HAc/ml pH 0.2mol/L
NaAc/ml 0.2mol/L
HAc/ml
3.6 0.75 9.25 4.8 5.90 4.10
3.8 1.20 8.80 5.0 7.00 3.00
4.0 1.80 8.20 5.2 7.90 2.10
4.2 2.65 7.35 5.4 8.60 1.40
4.4 3.70 6.30 5.6 9.10 0.90
4.6 4.90 5.10 5.8 9.40 0.60
NaAc•3H2O,Mr = 136.09,0.2mol/L溶液为27.22g/L
8.邻苯二甲酸氢钾—氢氧化钠缓冲液
50ml 0.1mol/L邻苯二甲酸氢钾+x ml 0.1mol/L氢氧化钠,加水稀释到100ml
pH x/ml pH x/ml pH x/ml
4.1 1.3 4.8 16.5 5.5 36.6
4.2 3.0 4.9 19.4 5.6 38.8
4.3 4.7 5.0 22.6 5.7 40.6
4.4 6.6 5.1 25.5 5.8 42.3
4.5 8.7 5.2 28.8 5.9 43.7
4.6 11.1 5.3 31.6
4.7 13.6 5.4 34.1
邻苯二甲酸氢钾Mr = 204.23,0.1mol/L溶液为20.42g/L
9.磷酸盐缓冲液
(1)磷酸氢二钠—磷酸二氢钠缓冲液(0.2mol/L)
pH 0.2mol/L
Na2HPO4/ml 0.2mol/L
NaH2PO4/ml pH 0.2mol/L
Na2HPO4/ml 0.2mol/L
NaH2PO4/ml
5.8 8.0 92.0 7.0 61.0 39.0
5.9 10.0 90.0 7.1 67.0 33.0
6.0 12.3 87.7 7.2 72.0 28.0
6.1 15.0 85.0 7.3 77.0 23.0
6.2 18.5 81.5 7.4 81.0 19.0
6.3 22.5 77.5 7.5 84.0 16.0
6.4 26.5 73.5 7.6 87.0 13.0
6.5 31.5 68.5 7.7 89.5 10.5
6.6 37.5 62.5 7.8 91.5 8.5
6.7 43.5 56.5 7.9 93.0 7.0
6.8 49.0 51.0 8.0 94.7 5.3
6.9 55.0 45.0
Na2HPO4•2H2O,Mr = 178.05,0.2mol/L溶液为35.61g/L
Na2HPO4•12H2O,Mr = 358.22,0.2mol/L溶液为71.64g/L
NaH2PO4•H2O,Mr = 138.01,0.2mol/L溶液为27.6g/L
NaH2PO4•2H2O,Mr = 156.03,0.2mol/L溶液为31.21g/L
(2)磷酸氢二钠—磷酸二氢钾缓冲液(1/15mol/L)
pH 1/15mol/L
Na2HPO4/ml 1/15mol/L
KH2PO4/ml pH 1/15mol/L
Na2HPO4/ml 1/15mol/L
KH2PO4/ml
4.92 0.10 9.90 7.17 7.00 3.00
5.29 0.50 9.50 7.38 8.00 2.00
5.91 1.00 9.00 7.73 9.00 1.00
6.24 2.00 8.00 8.04 9.50 0.50
6.47 3.00 7.00 8.34 9.75 0.25
6.64 4.00 6.00 8.67 9.90 0.10
6.81 5.00 5.00 8.18 10.00 0
6.98 6.00 4.00
Na2HPO4•2H2O,Mr = 178.05,1/15mol/L溶液为11.876g/L
KH2PO4,Mr = 136.09,1/15mol/L溶液为9.078g/L
10.磷酸氢二钠—氢氧化钠缓冲液
50ml 0.05mol/L磷酸氢二钠+x ml 0.1mol/L NaOH,加水稀释至100ml
pH x/ml pH x/ml pH x/ml
10.9 3.3 11.3 7.6 11.7 16.2
11.0 4.1 11.4 9.1 11.8 19.4
11.1 5.1 11.5 11.1 11.9 23.0
11.2 6.3 11.6 13.5 12.0 26.9
Na2HPO4•2H2O,Mr = 178.05,0.05mol/L溶液为8.90g/L
Na2HPO4•12H2O,Mr = 358.22,0.05mol/L溶液为17.91g/L
11.磷酸二氢钾—氢氧化钠缓冲液(0.05mol/L,20℃)
x ml 0.2mol/L KH2PO4+y ml 0.2mol/L NaOH,加水稀释至20ml
pH x/ml y/ml pH x/ml y/ml
5.8 5 0.372 7.0 5 2.963
6.0 5 0.570 7.2 5 3.500
6.2 5 0.860 7.4 5 3.950
6.4 5 1.260 7.6 5 4.280
6.6 5 1.780 7.8 5 4.520
6.8 5 2.365 8.0 5 4.680
12.硼砂—盐酸缓冲液(0.05mol/L硼酸根)
50ml 0.025mol/L硼砂+x ml 0.1mol/L 盐酸,加水稀释至100ml
pH x/ml pH x/ml pH x/ml
8.00 20.5 8.4 16.6 8.8 9.4
8.10 19.7 8.5 15.2 8.9 7.1
8.20 18.8 8.6 13.5 9.0 4.6
8.30 17.7 8.7 11.6 9.1 2.0
硼砂Na2B4O7•10H2O,Mr = 381.43,0.025mol/L溶液为9.53g/L
13.巴比妥钠—盐酸缓冲液(18℃)
pH 0.04mol/L
巴比妥钠溶液/ml 0.2mol/L
盐酸/ml pH 0.04mol/L
巴比妥钠溶液/ml 0.2mol/L
盐酸/ml
6.8 100 18.4 8.4 100 5.21
7.0 100 17.8 8.6 100 3.82
7.2 100 16.7 8.8 100 2.52
7.4 100 15.3 9.0 100 1.65
7.6 100 13.4 9.2 100 1.13
7.8 100 11.47 9.4 100 0.70
8.0 100 9.39 9.6 100 0.35
8.2 100 7.21
巴比妥钠盐Mr = 206.18,0.04mol/L溶液为8.25g/L
14.Tris—盐酸缓冲液(0.05mol/L,25℃)
50ml 0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液与x ml 0.1mol/L 盐酸混匀后,加水稀释至100ml
pH x/ml pH x/ml
7.10 45.7 8.10 26.2
7.20 44.7 8.20 22.9
7.30 43.4 8.30 19.9
7.40 42.0 8.40 17.2
7.50 40.3 8.50 14.7
7.60 38.5 8.60 12.4
7.70 36.6 8.70 10.3
7.80 34.5 8.80 8.5
7.90 32.0 8.90 7.0
8.00 29.2 9.00 5.7
注:三羟甲基氨基甲烷(Tris)
Mr = 121.14,0.1mol/L溶液为12.114g/L。Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳,保存时注意密封。
15.硼酸—硼砂缓冲液(0.2mol/L硼酸根)
pH 0.05mol/L
硼砂/ml 0.2mol/L
硼酸/ml pH 0.05mol/L
硼砂/ml 0.2mol/L
硼酸/ml
7.4 1.0 9.0 8.2 3.5 6.5
7.6 1.5 8.5 8.4 4.5 5.5
7.8 2.0 8.0 8.7 6.0 4.0
8.0 3.0 7.0 9.0 8.0 2.0
硼砂Na2B4O7•10H2O,Mr = 381.43,0.05mol/L溶液(=0.2 mol/L硼酸根)为19.07g/L,硼砂易失去结晶水,必须密闭保存
硼酸H3BO3,Mr = 61.84,0.2mol/L溶液为12.37g/L
16.硼砂—氢氧化钠缓冲液(0.05mol/L硼酸根)
x ml 0.05mol/L硼砂+y ml 0.2mol/L NaOH,加水稀释至200ml
pH x/ml y/ml pH x/ml y/ml
9.3 50 6.0 9.8 50 34.0
9.4 50 11.0 10.0 50 43.0
9.6 50 23.0 10.1 50 46.0
硼砂Na2B4O7•10H2O,Mr = 381.43,0.05mol/L溶液为19.07g/L
17.碳酸钠—碳酸氢钠缓冲液(0.1mol/L)
Ca2+、Mg2+存在时不得使用
pH 0.1mol/L碳酸钠/ml 0.1mol/L碳酸氢钠/ml
20℃ 37℃
9.16 8.77 1 9
9.40 9.12 2 8
9.51 9.40 3 7
9.78 9.50 4 6
9.90 9.72 5 5
10.14 9.90 6 4
10.28 10.08 7 3
10.53 10.28 8 2
10.83 10.57 9 1
无水碳酸钠Mr = 105.99,0.1mol/L溶液为10.60g/L
碳酸氢钠Mr = 84.01,0.1mol/L溶液为8.40g/L
18.碳酸氢钠—氢氧化钠缓冲液(0.025mol/L碳酸氢钠)
50ml 0.05mol/L碳酸氢钠+x ml 0.1mol/L NaOH,加水稀释至100ml
pH x/ml pH x/ml pH x/ml
9.6 5.0 10.1 12.2 10.6 19.1
9.7 6.2 10.2 13.8 10.7 20.2
9.8 7.6 10.3 15.2 10.8 21.2
9.9 9.1 10.4 16.5 10.9 22.0
10.0 10.7 10.5 17.8 11.0 22.7
碳酸氢钠Mr = 84.01;0.05mol/L溶液为4.20g/L
19.氯化钾—氢氧化钠缓冲液
25ml 0.2mol/L KCl+x ml 0.2mol/L NaOH,加水稀释至100ml
pH x/ml pH x/ml pH x/ml
12.0 6.0 12.4 16.2 12.8 41.2
12.1 8.0 12.5 20.4 12.9 53.0
12.2 10.2 12.6 25.6 13.0 66.0
12.3 12.8 12.7 32.2
KCl Mr = 74.55;0.2mol/L溶液为14.91g/L
乙酸铅(CH3COO)2Pb是一种易溶于水的化合物,在水中可电离出铅离子。铅离子属于重金属离子,进入人体后会和人体内的蛋白质作用,使蛋白质发生不可逆的变性,从而使人体中毒。
http://www.proteomics.com.cn/tools/mwcal/
一般的方法:
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量
[原理]
十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate, 简称SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量,是六十年代末Weber和Osborn在Shapiro等人在实验基础上发展起来的一项新技术。用这种方法测定蛋白质的分子量具有快速灵便,设备简单等优点。
蛋白质的电泳迁移率在一般的电泳方法中,主要取决于它在某PH下所带的净电荷量、分子大小(即分子量)和形状的差异性,而SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对大多数蛋白质,主要取决于它们的分子量,与原有的电荷量和形状无关。
SDS是一种阴离子表面活性剂,在一定的条件下,它能打开蛋白质氢键和疏水键,并按比例地结合到这些蛋白质分子上形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物,每克蛋白质一般结合1.4克SDS。SDS与蛋白质的定比结合使蛋白质-SDS复合物均带上相同的负电荷,其量远远超过蛋白质原有的电荷量,因而掩盖了蛋白质间原有的电荷差异。在水溶液中,蛋白质-SDS复合物具有相同的构象,近似雪茄烟形的长椭园棒(短轴均为1.8nm,长轴则随蛋白质的分子量成正比变化),克服了蛋白质间原有的形状差异。这样蛋白质-SDS复合物在凝胶中的迁移率不再受原有电荷和形状的影响,而只是蛋白质分子量的函数。蛋白质分子量与电泳迁移率间的关系可用下式表示:
lgMr = K – bm
式中 Mr为分子量;K为常数;b为斜率;m为迁移率。
因此,用本法测定蛋白质的分子量只需根据待测蛋白质在已知分子量的标准蛋白质的lgMr~迁移率的图中的位置,就能得知分子量。
用本法测得的分子量,除单链蛋白质外,均不是天然蛋白质的完整分子量,而是组成这些蛋白质的亚基或肽链的分子量。本法对一些电荷异常,或构象异常,或带有大辅基的蛋白质不适用,如组蛋白F1和某些糖蛋白等。对一些结构蛋白如胶原蛋白等也不适用。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳按照凝胶电泳系统中的缓冲液、pH值和凝胶孔径的差异可分为SDS-连续系统电泳和 SDS-不连续系统电泳两类;按照所制成的凝胶形状和电泳方式又可以分为SDS-聚丙烯酰胺凝胶垂直管型电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶垂直板型电泳两类。
本实验采用SDS-不连续垂直板型操作方法。通过实验使学生掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶垂直板式电泳的原理及技术,包括制胶、灌胶、加样、剥胶及固定染色等,学会用这些方法测定蛋白质分子量。
[方法与步骤]
一、加样液的制备
1、标准蛋白质加样液的制备 称取细胞色素,胰凝乳蛋白酶原,胃蛋白酶,卵白蛋白,牛血清白蛋白各0.5~1mg,置小离心管(Eppendorf管)中,加入样品溶解液1mL,充分溶解,如有不溶物应离心除去。沸水浴热处理3min,冷却备用。
2、待测蛋白质加样液的制备
根据待测蛋白质样品存在的状况而定。
(1)固体
待测蛋白样品,如为无盐的纯蛋白质固体制剂,加样液的制备方法同标准蛋白质加样液的制备;如为含盐的纯蛋白质固体制剂,应先加水充分溶解,对透析缓冲液透析12~16h,然后吸取0.5mL(蛋白浓度应为0.5~1mg/mL),置Eppendorf管中,并加入等体积浓样品溶解液,沸水浴热处理3min,冷却备用。
(2)液体
待测蛋白样品,如为无盐的纯蛋白质液体制剂,则加入等体积浓样品溶解液,然后热处理;如为含盐的液体制剂,则需先透析。
二、凝胶的制备
1、凝胶板的准备
(1)洗板
将洗洁精用温水稀释后,用它浸透海绵擦洗玻板,然后用自来水洗净,再用酒精将板擦干。
(2)安装制胶板
制胶前将玻板与塑料嵌条和凹型陶瓷板的边缘对齐,下沿用密封胶带封口,用塑料夹子或铁夹子将两端夹好,注意要确保密封,安放在固定架上。
2、分离胶和浓缩胶溶液的配制
组 分
分离胶/mL
浓缩胶/mL
凝胶贮备液
2.5
0.26
分离胶缓冲液(pH8.8)
1.9
—
浓缩胶缓冲液(pH6.8)
—
0.5
10%SDS
0.075
0.02
TEMED
0.026
0.02
双蒸水
3.05
1.22
10%过硫酸铵
0.013
0.02
总体积
7.6
2
注意:①最后加入10%过硫酸铵溶液,混合制成凝胶液,迅速灌制凝胶。
②丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺均为神经毒剂,对皮肤有刺激作用。因此必须小心操作,不得吸入和接触皮肤,聚合完全聚丙烯酰胺凝胶无毒。
3、制分离胶
将制胶板垂直放好,插上与相应厚度的样品梳,在梳子下缘线1cm处做标记,卸下样品梳。将配好的分离胶溶液缓慢加入制胶板之间,直至液面达到标记处。用滴管贴近胶液界面小心而又缓慢地覆盖厚度约0.5cm的正丁醇层,以防止溶液蒸发并保证胶面平整。
4、制浓缩胶
分离胶聚合后,倒去正丁醇,用蒸馏水冲洗分离胶胶面两次,用滤纸吸去残液。用滴管将浓缩胶溶液加在分离胶面上,充满制胶板,插入样品梳。
(三)电泳
1、安装电泳槽
浓缩胶聚合后,除去梳子、密封胶带以及六个铁夹。将制胶扳、电泳糟内芯、另一对制胶板依次放入槽内。两制胶板的凹型陶瓷板均应与电泳槽内芯接触。然后插入楔型板以固定两套制胶板。如果每次电泳只用一块胶板,必须用提供的有机玻璃板代替另一套制胶板。
2、加样
在内外水槽加注缓冲液,使内外槽的水位均超过凹形板的缺口但低于塑料板的上沿。用微量加样器在梳井内加样。
3、电泳
盖好上盖,在80V~100V的电压下电泳约3h,至溴酚蓝指示的电泳前沿到达制胶板的下缘止,关掉电源。然后拔掉楔形板,取下制胶扳。
(四)染色、脱色
用刀片或薄板将白塑料板与陶瓷板轻轻撬开,用刀片沿分离胶与浓缩胶的交接处,将分离胶切下,并在分离胶的左上角切掉一小角,以标记样品顺序。然后手戴橡胶手套将分离胶小心移入染色器皿中。在染色器皿中加入100mL考马氏亮蓝染液(含0.25%考马氏亮蓝R-250,30%乙醇,10%乙酸的水溶液),加盖,在摇床上染色2h。
将染液倒回贮存瓶(可反复使用)。在染色皿中加入100mL脱色液(10%乙酸,30%乙醇),振荡脱色至蛋白条带清晰。
[结果和计算]
1、凝胶脱尽底色后,色带清晰显出。按实样描下或摄下电泳图谱。
2、根据各蛋白迁移距离和染料迁移距离的比值,求出各蛋白的相对迁移率mr,然后作出lgMr~mr关系图,从图中找出未知蛋白mr对应的分子量。
醋酸铅,亦称乙酸铅,俗称铅糖。化学式(CH3COO)2Pb,Mr=325,通常指的是三水合物,也有十水合物和无水物。
三水合醋酸铅为无色结晶、白色颗粒或粉末,略带乙酸气味,具有风化性,有毒。熔点60-62℃,沸点280℃(常压),15℃时溶解度为45.6,100℃为200。
【作用】用于制备各种铅盐、抗污涂料、水质防护剂、颜料填充剂、涂料干燥剂、纤维染色剂以及重金属氰化过程的溶剂。
1、主要用途:
用于制备各种铅盐(硼酸铅、硬脂酸铅等)、抗污涂料(醋酸铅与重铬酸钾作用可制取铬黄)、水质防护剂、颜料填充剂、涂料干燥剂、纤维染色剂以及重金属氰化过程的溶剂。
在纺织工业中,用做蓬帆布配制铅皂防水的原料。在电镀工业中,是氰化镀铜的发光剂。在颜料工业醋酸铅同红矾钠反应,是制取铬黄(即铬酸铅)的基本原料。在化学分析中用作测定三氧化铬、三氧化钼的试剂。醋酸铅也是皮毛行业染色助剂。
另外,将1g醋酸铅溶于20ml去离子水,把5mm×30mm的滤纸条浸到醋酸铅溶液中,即成乙酸铅试纸(CAS号301-04-2)。该试纸遇硫化氢气体,或沾上含硫化物的酸性溶液即变黑色,验证有硫化氢或硫化物存在。
2、物化性质:
① 三水醋酸铅,白色单斜晶体,密度2.55g·cm-3(25℃)。熔点75℃(急热)。可燃。略带乙酸气味。具有风化性。折射率1.567。是共价化合物,且为弱电解质。易溶于水,溶解度55.04g/100g水。也溶于丙三醇,不溶于乙醚。75℃时失水成无水醋酸铅。
② 十水醋酸铅,白色正交晶体,密度1.69g·cm-3(25℃)。常温下容易风化失水。弱电解质。易溶于水,溶于丙三醇,不溶于乙醚。
③ 无水醋酸铅,白色粉末,密度3.75g·cm-3(20℃)。熔点280℃。弱电解质。易溶于水,溶解度44.3g/100g水。不溶于乙醚。