薄层层析检验水溶液中苯酚和水杨酸的萃取效果
1、薄层层析检验水溶液中苯酚苯酚可杀灭细菌及部分真菌，杀灭芽胞和病毒的效果较差，苯酚对小范围的皮肤有止痒、止痛的作用。
2、水杨酸是植物的一种次生代谢产物，具有多种生理调节作用，属于酚类化合物有一个苯环，在一定波长的紫外光激发下有一个特定的荧光发射峰起到了萃取的效果。
薄层色谱显色问题
常洪勋
显色剂可以分成两大类：一类是检查一般有机化合物的通用显色剂另一类是根据化合物分类或特殊官能团设计的专属性显色剂。显色剂种类繁多，本章只能列举一些常用的显色剂。
l.通用显色剂
①硫酸常用的有四种溶液：硫酸-水(1：1)溶液硫酸-甲醇或乙醇(1：1)溶液1.5mol/L硫酸溶液与0.5-1.5mol/L硫酸铵溶液，喷后110oC烤15min，不同有机化合物显不同颜色。
②0.5%碘的氯仿溶液 对很多化合物显黄棕色。
③中性0.05%高锰酸钾溶液 易还原性化合物在淡红背景上显黄色。
④碱性高锰酸钾试剂 还原性化合物在淡红色背景上显黄色。
溶液I：1%高锰酸钾溶液溶液Ⅱ：5%碳酸钠溶液溶液I和溶液Ⅱ等量混合应用。
⑤酸性高锰酸钾试剂 喷1.6%高锰酸钾浓硫酸溶液(溶解时注意防止爆炸)，喷后薄层于180oC加热15～20min。
⑥酸性重铬酸钾试剂 喷5%重铬酸钾浓硫酸溶液，必要时150oC烤薄层。
⑦5%磷钼酸乙醇溶液 喷后120oC烘烤，还原性化合物显蓝色，再用氨气薰，则背景变为无色。
⑧铁氰化钾-三氯化铁试剂 还原性物质显蓝色，再喷2mol/L盐酸溶液，则蓝色加深。
溶液I：1%铁氰化钾溶液溶液Ⅱ：2%三氯化铁溶液临用前将溶液I和溶液Ⅱ等量混合。
2.专属性显色剂
由于化合物种类繁多，因此专属性显色剂也是很多的，现将在各类化合物中最常用的显色剂列举如下：
(1) 烃类
①硝酸银/过氧化氢
检出物：卤代烃类。
溶液：硝酸银O.1g溶于水lml，加2-苯氧基乙醇lOOml，用丙酮稀释至200ml，再加30%过氧化氢1滴。
方法：喷后置未过滤的紫外光下照射
结果：斑点呈暗黑色。
②荧光素/溴
检出物：不饱和烃。
溶液：I.荧光素0.1g溶于乙醇lOOmlⅡ.5%溴的四氯化碳溶液。
方法：先喷(I)，然后置含溴蒸气容器内，荧光素转变为四溴荧光素(曙红)，荧光消失，不饱和烃斑点由于溴的加成，阻止生成曙红而保留荧光，多数不饱和烃在粉红色背景上呈黄色。
③四氯邻苯二甲酸酐
检出物：芳香烃。
溶液：2%四氯邻苯二甲酸酐的丙酮与氯代苯(10：1)的溶液。
方法：喷后置紫外光下观察。
④甲醛/硫酸
检出物：多环芳烃。
溶液：37%甲醛溶液O.2ml溶于浓硫酸l0ml。
(2)醇类
①3，5一二硝基苯酰氯
检出物：醇类。
溶液：I.2%本品甲苯溶液Ⅱ.0.5%氢氧化钠溶液Ⅲ.O.002%罗丹明溶液。
方法：先喷(I)，在中干燥过夜，用蒸气薰2min，将纸或薄层通过试液(Ⅱ)30s，喷水洗，趁湿通过(Ⅲ)15s，空气干燥，紫外灯下观察。
②硝酸铈铵
检出物：醇类。
溶液：I.1%硝酸铈铵的0.2mol/L硝酸溶液Ⅱ.N,N-二甲基-对苯二胺盐酸盐1.5g溶于甲醇、水与乙酸(128m1+25m1+1.5m1)混合液中，用前将(I)与(Ⅱ)等量混合。喷板后于105oC加热5min。
③香草醛/硫酸
检出物：高级醇、酚、甾类及精油。
溶液：香草醛1g溶于硫酸lOOml。
方法：喷后于120oC加热至呈色最深。
④二苯基苦基偕肼 ’
检出物：醇类、萜烯、羰基、酯与醚类。
溶液：本品15mg溶于氯仿25ml中。
方法：喷后于110oC加热5～lOmin。
结果：紫色背景呈黄色斑点。
(3)醛酮类
①品红/亚硫酸
检出物：醛基化合物。
溶液：I.0.01%品红溶液，通入二氧化硫直至无色Ⅱ.0.05mol/L氯化溶液
Ⅲ.O.05mol/L硫酸溶液。
方法：将I、Ⅱ、Ⅲ以1：1：10混合，用水稀释至l00ml。
②邻联茴香胺
检出物：醛类、酮类。
溶液：本品乙酸饱和溶液。
③2，4-二硝基苯肼
检出物：醛基、酮基及酮糖。
溶液：I.0.4%本品的2mol/L盐酸溶液Ⅱ.本品O.1g溶于乙醇l00ml中，加浓盐酸lml。
方法：喷溶液I或Ⅱ后，立即喷铁氰化钾的2mol/L盐酸溶液。
结果：饱和酮立即呈蓝色饱和醛反应慢，呈橄榄绿色不饱和羰基化合物不显色。
④绕丹宁
检出物：类胡萝卜素醛类。
溶液：I.1%～5%绕丹宁乙醇溶液Ⅱ.25%氢氧化铵或27%氢氧化钠溶液。
方法：先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ，干燥。
(4)有机酸类
①溴甲酚绿
检出物：有机酸类。
溶液：溴甲酚绿0.1g溶于乙醇500ml和0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml。
方法：浸板。
结果：蓝色背景产生黄色斑点。
②高锰酸钾/硫酸
检出物：脂肪酸衍生物。
溶液：见通用显色剂酸性高锰酸钾。
③过氧化氢
检出物：芳香酸。
溶液：0.3%过氧化氢溶液。
方法：喷后置紫外光(365nm)下观察。
结果：呈强蓝色荧光。
④2，6-二氯苯酚-靛酚钠
检出物：有机酸与酮酸。
溶液：0.1%本品的乙醇溶液。
方法：喷后微温。
结果：蓝色背景呈红色。
(5)酚类
①Emerson 试剂(4-氨基安替比林/铁氰化钾(Ⅲ))
检出物：酚类、芳香胺类及挥发油。
溶液：I.4-氨基安替比林1g溶于乙醇100mlⅡ.铁氰化钾(Ⅲ)4g溶于水50ml，用乙醇稀释至100ml。
方法：先喷溶液I，在热空气中干燥5min，再喷溶液Ⅱ，再于热空气中干燥5min，然后将板置含有氨蒸气(25%氨溶液)的密闭容器中。
结果：斑点呈橙-淡红色。挥发油在亮黄色背景下呈红色斑点。
②Boute 反应
检出物：酚类、氯、溴、烷基代酚。
方法：将薄层置有NO2蒸气(含浓硝酸)的容器中3～10min，再用NH2蒸气(浓氨液)处理。
③氯醌(四氯代对苯醌)
检出物：酚类。
溶液：1%本品的甲苯溶液。
④DDQ(二氯二氰基苯醌)试剂
检出物：酚类。
溶液：2%本品的甲苯溶液。
⑤TCNE (四氰基乙烯)试剂
检出物：酚类、芳香碳、杂环类、芳香胺类。
溶液：0.5%～1%本品的甲苯溶液。
⑥Gibb’s(2，6-二溴苯醌氯亚胺)试剂
检出物：酚类。
溶液：2%本品的甲醇溶液。
⑦氯化铁
检出物：酚类、羟酰胺酸。
溶液：1%～5%氯化铁的
ztlhy
4楼: Originally posted by Lee631015 at 2013-10-23 00:33:29
有共轭不是254nm荧光，是365nm，好好查查书吧
...
额，貌似是254nm显色是低共轭体系的有机物，365nm的是高共轭体系（某些聚合物）的有机物，关键是这程度，不是共轭的有无。
yi_wang
小木虫中应该有此类文章或者电子书下载吧。
yi_wang
发给你看看。
Lee631015
8楼: Originally posted by ztlhy at 2013-10-23 12:19:00
额，貌似是254nm显色是低共轭体系的有机物，365nm的是高共轭体系（某些聚合物）的有机物，关键是这程度，不是共轭的有无。...
254nm时是薄层硅胶有荧光，暗点是物质；不共轭，含派键，230-270nm，荧光较微弱，越近真空紫外区的，肉眼越难看到；共轭，在270-400，显荧光；共轭体系更大，可见光显色，直接有颜色，不用紫外定位仪；以上数据均为大概，薄层定位254的暗点有弱荧光，但是定位靠的不是那弱荧光，是因为薄层板上其他荧光比它强，亮
792193347
11楼: Originally posted by Lee631015 at 2013-10-23 14:17:20
254nm时是薄层硅胶有荧光，暗点是物质；不共轭，含派键，230-270nm，荧光较微弱，越近真空紫外区的，肉眼越难看到；共轭，在270-400，显荧光；共轭体系更大，可见光显色，直接有颜色，不用紫外定位仪；以上数据均为 ...
这位是高手
chenyayun
杩欎釜澶锛屽叿浣扑粈涔堢墿璐ㄥ叿浣揿垎鏋愶紝鍙煡镄勩€傞吨瑕佺殑鏄紝涓嶆樉鑹茬殑锛屾湁鍚告敹镄勫氨鍦ㄧ传澶栦笅锛屾病链夌殑链夎崸鍏夌┖鐧芥澘
Lee631015
11楼: Originally posted by Lee631015 at 2013-10-23 14:17:20
254nm时是薄层硅胶有荧光，暗点是物质；不共轭，含派键，230-270nm，荧光较微弱，越近真空紫外区的，肉眼越难看到；共轭，在270-400，显荧光；共轭体系更大，可见光显色，直接有颜色，不用紫外定位仪；以上数据均为 ...
谢谢，你不知道我有多高兴，从未有人在这方面肯定过我，我只是个曾经在植化实验室呆过10个月的本科小喽啰，没发过一篇文章的小喽啰，真心感谢啊！
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薄层色谱法问题求助
1、关于薄层色谱法中用三用紫外仪观察薄层板的工作原理，尽量详细点；
2、如何判断薄层板上看到的深紫和亮紫哪条带是产物哪条是副产物,有没有经验可供分享。
廉洁考研必胜
一般来说共轭结构才能在紫外下显色，你可以看看紫外光谱的介绍。平时也不会根据颜色的深浅来判断产物与副产物的，再说紫外下判断颜色的深浅也没有那么容易，都是根据产物的极性大小来预判断的，然后会通过核磁等手段进行验证
xujun9998
紫外分析仪是荧光技术的应用
首先了解一下什么是荧光，荧光又作“萤光”，是指一种光致发光的冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光（通常是紫外线或X射线）照射，吸收光能后进入激发态，并且立即退激发并发出比入射光的的波长长的出射光（通常波长在可见光波段）；而且一旦停止入射光，发光现象也随之立即消失。具有这种性质的出射光就被称之为荧光。
荧光技术是某些物质受一定波长的光激发后，在极短时间内（10-8秒）会发射出波长大于激发波长的光，这种光称为荧光。这一发光现象在各方面的应用及有关的方法称为荧光技术（fluorescent technique）。
物质经过紫外线照射后发出荧光的现象可分为两种情况，第一种是自发荧光，如叶绿素、血红素等经紫外线照射后，能发出红色的荧光，称为自发荧光；第二种是诱发荧光，即物体经荧光染料染色后再通过紫外线照射发出荧光，称为诱发荧光。
紫外荧光技术应用主要包括以下几个方面：
1、物质的定性：不同的荧光物质有不同的激发光谱和发射光谱，因此可用荧光进行物质的鉴别。与吸收光谱法相比，荧光法具有更高的选择性。
2、研究生物大分子的物理化学特性及其分子的结构和构象：荧光的激发光谱、发射光谱、量子产率和荧光寿命等参数不仅和分子内荧光发色基团的本身结构有关，而且还强烈地依赖于发色团周围的环境，即对周围环境十分敏感。利用此特点可通过测定上述有关荧光参数的变化来研究荧光发色团所在部位的微环境的特征及其变化。在此研究中，除了利用生物大分子本身具有的荧光发色团（如色氨酸、酪氨酸、鸟苷酸等，此类荧光称为内源荧光）以外，可将一些特殊的荧光染料分子共价地结合或吸附在生物大分子的某一部位，通过测定该染料分子的荧光特性变化来研究生物大分子，这种染料分子被称为“荧光探针”，它们发出的荧光一般称为外源荧光。荧光探针的应用，大大地开拓了荧光技术在分子生物学中的应用范围。
紫外灯功率：波长为365nm的紫外灯，功率为28W；波长为300nm的紫外灯，功率为8W；波长为254nm的紫外灯，功率为28W
薄层板上看到的深紫和亮紫哪条带是产物哪条是副产物,这个要根据具体结构，如果共轭双键多，荧光强度大，点浓而且会红移
dxddcl521520
4楼: Originally posted by xujun9998 at 2014-12-04 08:00:14
紫外分析仪是荧光技术的应用
首先了解一下什么是荧光，荧光又作“萤光”，是指一种光致发光的冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光（通常是紫外线或X射线）照射，吸收光能后进入激发态，并且立即退激发 ...
波长为365nm的紫外灯，波长为300nm的紫外灯，波长为254nm的紫外灯，在什么情况下需要开哪种波长的紫外灯？
xujun9998
5楼: Originally posted by dxddcl521520 at 2014-12-04 22:30:14
波长为365nm的紫外灯，波长为300nm的紫外灯，波长为254nm的紫外灯，在什么情况下需要开哪种波长的紫外灯？...
我一般都开，只有一个苯环的254nm
dxddcl521520
6楼: Originally posted by xujun9998 at 2014-12-05 10:32:29
我一般都开，只有一个苯环的254nm...
对于同一块薄层板来说，你分别用上中波长的紫外灯，你没发现色带的位置、颜色会有区别吗？
sjq1234
一般只要化合物含有不饱和共轭键就会在紫外下显色，至于亮紫和深紫，这个不能单纯这样看，万一你做的实验产路很低杂质很多呢？
soulink
刮下来送LC－Ms 或送核磁啊，如果看颜色就能判断产物是哪个还要仪器干么
（二）：根据苯甲酮和氯苯的极性区别，用薄层色谱(TLC)估算极性大小差别，再用层析色谱柱进行分离，用大约30% - 50%乙酸乙酯/石油醚洗脱即可，用TLC进行跟踪。
对硝基苯酚和硝基苯胺的异构体的极性及其在吸附薄层色谱法中，与固定相的吸附力，进行了24例吸附薄层色谱分析，结果表明，它们的迁移速度，除有2例特殊外，其余22例皆为：邻位最快，间位次之，对位最慢。说明其吸附力对位最强，间位次之，邻位最弱。利用“矢量加合原理”，对硝基苯酚异构体偶极矩计算得到；对位5．67D，间位5．10D，邻位3．71D。因此，其极性强弱顺序与上一致。
Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Ether,
Petroleumether/CH2Cl2, ethylacetate/MeOH,CHCl3/ethylacetate
展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。展开剂的选择条件：①对的所需成分有良好的溶解性；②可使成分间分开；③待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间；④不与待测组分或吸附剂发生化学反应；⑤沸点适中，黏度较小；⑥展开后组分斑点圆且集中；⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。
我们在实验中，为了实现一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了很多种的溶剂组合，最后才找到石油醚—EtOAc—HCOOH（5.5：3.5：0.1）混合溶剂。一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里往往加一点点三乙胺，氨水，吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。（选择所添加的碱性物质，还必须考虑容易从产品中除去，氨水无疑是较好的选择。）分离效果的好坏和所用硅胶和溶剂的质量很有关系：不同厂家生产的硅胶可能含水量以及颗粒的粗细程度，酸性强弱不同，从而导致产品在某个厂家的硅胶中分离效果很好，但在另一个厂家的就不行。溶剂的含水量和杂质含量对分离效果都有明显的影响。温度，湿度对分离效果影响也很明显，在实验中我们发现有时同一展开条件，上下午的Rf截然不同展开剂的选择主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来考虑在进行薄层层析时，首先应该知道未知化学成分的类型，其极性的大致归属，从提取液或从色谱柱的流动相极性可知，另外某样品里含多种化学成分先按极性不同大致分，然后细分，对于分离未知的化学物质，展开剂的选择也是一个摸索的过程，不应该仅仅从展开剂考虑，多因素综合衡量！
溶剂：层析过程中溶剂的选择，对组分分离关系极大。在柱层析时所用的溶剂（单一剂或混合溶剂）习惯上称洗脱剂，用于薄层或纸层析时常称展开剂。洗脱剂的选择，须根据被分离物质与所选用的吸附剂性质这两者结合起来加以考虑在用极性吸附剂进行层析时，当被分离物质为弱极性物质，一般选用弱极性溶剂为洗脱剂；被分离物质为强极性成分，则须选用极性溶剂为洗脱剂。如果对某一极性物质用吸附性较弱的吸附剂（如以硅藻土或滑石粉代替硅胶），则洗脱剂的极性亦须相应降低。
在柱层操作时，被分离样品在加样时可采用于法，亦可选一适宜的溶剂将样品溶解后加入。溶解样品的溶剂应选择极性较小的，以便被分离的成分可以被吸附。然后渐增大溶剂的极性。这种极性的增大是一个十分缓慢的过程，称为“梯度洗脱”，使吸附在层析柱上的各个成分逐个被洗脱。如果极性增大过诀（梯度太大），就不能获得满意的分离。溶剂的洗脱能力，有时可以用溶剂的介电常数（ε）来表示。介电常数高，洗脱能力就大。以上的洗脱顺序仅适用于极性吸附剂，如硅胶、氧化铝。对非极性吸附剂，如活性炭，则正好与上述顺序相反，在水或亲水住溶剂中所形成的吸附作用，较在脂溶性溶剂中为强。
3．被分离物质的性质：被分离的物质与吸附剂，洗脱剂共同构成吸附层析中的三个要素，彼此紧密相连。在指定的吸附剂与洗脱剂的条件下，各个成分的分离情况，直接与被分离物质的结构与性质有关。对极性吸附剂而言，成分的极性大，吸附住强。
当然，中草药成分的整体分子观是重要的，例如极性基团的数目愈多，被吸附的住能就会更大些，在同系物中碳原子数目少些，被吸附也会强些。总之，只要两个成分在结构上存在差别，就有可能分离，关键在于条件的选择。要根据被分离物质的性质，吸附剂的吸附强度，与溶剂的性质这三者的相互关系来考虑。首先要考虑被分离物质的极性。如被分离物质极性很小为不含氧的萜烯，或虽含氧但非极性基团，则需选用吸附性较强的吸附剂，并用弱极性溶剂如石油醚或苯进行洗脱。但多数中药成分的极性较大，则需要选择吸附性能较弱的吸附剂（一般Ⅲ～Ⅳ级）。采用的洗脱剂极性应由小到大按某一梯度递增，或可应用薄层层析以判断被分离物在某种溶剂系统中的分离情况。此外，能否获得满意的分离，还与选择的溶剂梯度有很大关系。现以实例说明吸附层析中吸附剂、洗脱剂与样品极性之间的关系。如有多组分的混合物，象植物油脂系由烷烃、烯烃、舀醇酯类、甘油三酸醋和脂肪酸等组份。当以硅胶为吸附剂时，使油脂被吸附后选用一系列混合溶剂进行洗脱，油脂中各单一成分即可按其极性大小的不同依次被洗脱。
又如对于C-27甾体皂甙元类成分，能因其分字中羟基数目的多少而获得分离：将混合皂甙元溶于含有5％氯仿的苯中，加于氧化铝的吸附柱上，采用以下的溶剂进行梯度洗脱。如改用吸附性较弱的硅酸镁以替代氧化铝，由于硅酸镁的吸附性较弱，洗脱剂的极牲需相应降低，亦即采用苯或含5％氯仿的苯，即可将一元羟基皂甙元从吸附剂上洗脱下来。这一例子说明，同样的中草药成分在不同的吸附剂中层析时，需用不同的溶剂才能达到相同的分离效果，从而说明吸附剂、溶剂和欲分离成分三者的相互关系。
（二）簿层层析：薄层层析是一种简便、快速、微量的层析方法。一般将柱层析用的吸附剂撒布到平面如玻璃片上，形成一薄层进行层析时一即称薄层层析。其原理与柱层析基本相似。
1．薄层层析的特点：薄层层析在应用与操作方面的特点与柱层析的比较。
2．吸附剂的选择：薄层层析用的吸附剂与其选择原则和柱层析相同。主要区别在于薄层层析要求吸附剂（支持剂）的粒度更细，一般应小于250目，并要求粒度均匀。用于薄层层析的吸附剂或预制薄层一般活度不宜过高，以Ⅱ～Ⅲ级为宜。而展开距离则随薄层的粒度粗细而定，薄层粒度越细，展开距离相应缩短，一般不超过10厘米，否则可引起色谱扩散影响分离效果。
3．展开剂的选择：薄层层析，当吸附剂活度为一定值时（如Ⅱ或Ⅲ级），对多组分的样品能否获得满意的分离，决定于展开剂的选择。中草药化学成分在脂溶性成分中，大致可按其极性不同而分为无极性、弱极性、中极性与强极性。但在实际工作中，
显色剂：
碘：
适用于不饱和或者芳香族化合物
配制方法：在100ml 广口瓶中，放入一张滤纸，少许碘粒。
或者在瓶中，加入10g 碘粒，30g 硅胶
高锰酸钾
适用于含还原性基团化合物，比如羟基，氨基，醛
配制方法：1.5g KMnO4 + 10g K2CO3 + 1.25mL 10% NaOH +
200mL 水. 使用期3 个月
磷钼酸(PMA)
广谱
配制方法：10 g of 磷钼酸+100 mL 乙醇
紫外灯
适用于含共轭基团的化合物，芳香化合物
硫酸铈：
生物碱
配制方法：10%硫酸铈(IV)+15%硫酸的水溶液
氯化铁
苯酚类化合物
配制方法：1% FeCl3 + 50% 乙醇水溶液.
桑色素(羟基黄酮)
广谱, 有荧光活性
配制方法：0.1% 桑色素+甲醇
茚三酮
适用于氨基酸
配制方法：1.5g 茚三酮+ 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸
二硝基苯肼(DNP)
适用于醛和酮
配制方法：12g 二硝基苯肼+ 60mL 浓硫酸+ 80mL 水+ 200mL
乙醇
香草醛(香兰素)
广谱
配制方法：15g 香草醛+ 250mL 乙醇+2.5mL 浓硫酸
溴甲酚绿
适用于羧酸，pKa<=5.0
配制方法：在100ml 乙醇中，加入0.04g 溴甲酚绿，缓慢滴加0.1M的NaOH 水溶液，刚好出现蓝色即至。
钼酸铈
广谱
配制方法：235 mL 水+ 12 g 钼酸氨+ 0.5 g 钼酸铈氨+ 15 mL
浓硫酸
茴香醛(对甲氧基苯甲醛)1
广谱
配制方法：135 乙醇+ 5 mL 浓硫酸+ 1.5 mL of 冰醋酸+ 3.7 mL
茴香醛，剧烈搅拌，使混合均匀.
茴香醛(对甲氧基苯甲醛)2
适用于萜烯，桉树脑(cineoles), withanolides, 出油柑碱(acronycine)
配制方法：茴香醛:HClO4:丙酮:水(1:10:20:80)经常需要利用溶剂的极性大小，对展开剂的极性予以调整
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有许多不同的分析技术用于糖的分离和测定,包括化学分析、比色分析、纸色谱、薄层色谱、气相色谱和高效液相色谱等。本文总结了近十年植物组织中糖类化合物的研究进展，为其含量测定提供理论依据。
1 分光光度分析法
分光光度法是基于长链多糖在水溶液中离解后可与染料等阳离子相互结合发生反应，从而引起染料吸收光谱的变化进行测定。这种方法具有较好的选择性，可以用于实际样品的测定，通常有两种常见方法。
1.1 蒽酮 - 硫酸比色法
糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糖醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。糖类与蒽酮反应生成的有色物质，在可见光区的吸收峰为 630 nm，可在此波长下进行比色。该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖和己糖而且可以测寡糖和多糖，在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量。蒽酮比色法是一种快速而简便的定糖方法，但测定结果误差较大，只能测定样品中可溶性糖总量。陈鸿英等人用蒽酮硫酸法测定淫羊藿多糖的含量，得到的结果较稳定。
1.2 苯酚 - 硫酸比色法
植物体内的糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。苯酚法测定糖的原理是在浓硫酸作用下，糖脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10mg～100 mg 范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485 nm 波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，试剂便宜，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色可稳定 160 min 以上。
2 气相色谱法
气相色谱法是以气体作为流动相的一种色谱分析方法气相色谱法测定糖类，具有选择性好、样品用量少、分辨率高、快速准确、灵敏等优点。曾昭睿采用三 - 端烯丙基 - 不对称二苯并 14- 冠 - 4- 二羟基冠醚做固定相分离了鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖的乙酸酯衍生物。吴建元等人利用气相色谱法分析茯苓多糖的单糖组成结果 6 种标准单糖的衍生物实现了良好的分离并具有良好的峰形。胡磊等人用 1 一甲基咪唑为溶剂和催化剂、盐酸羟胺和乙酸酐为肟化和乙酰化试剂，对植物样品中糖与糖醇进行乙酰化衍生化利用气相色谱分离和质谱鉴定的分析方法。
3 高效毛细管电泳法
除了少数带有羧基和磺酸基的糖类化合物，绝大多数糖类化合物不带电荷，极性很大且没有发色基团。所以用一般的高效毛细管电泳系统无法得到分离和检测。为了使糖类化合物能产生电迁移而得以相互分离，可采用的方法有：（1）衍生化使之带上发色、荧光基团或电荷；（2）与硼酸盐等络合；（3）与缓冲液中的添加剂形成包合配合物；（4）高 pH缓冲条件下使之电离；（5）加入表面活性剂使形成胶束。20世纪 90 年代以来毛细管电泳因具备分离快速，所需样品量少和自动化程度高的特点，已广泛应用于糖化合物的分析。
4 高效液相色谱法
HPLC 用于糖的定性和定量分析具有快速、灵敏、样品处理简单等优点。从大量的文献报道和综述中可以看出，由于糖的特殊结构及它本身不含强紫外和荧光吸收的官能团，到目前为止还没有建立一个统一的方法来分析所有的单糖和低聚糖。分析糖的色谱柱有化合键合烷基柱、阴阳离子交换柱、氨基键合硅胶柱和硅胶柱等。
文献来源：孙艳涛，由欣. 植物组织中糖化合物测定方法的研究进展.科教文汇(上旬刊). 2011,10(上旬刊) ：134-135.网页链接
