苯酚为什么不能溶解RNA
这个……DNA因为本身结构的缘故,将一些极性的集团暴漏在外边,容易和苯酚上的羟基发生作用,所以易溶于苯酚,也能溶于一定浓度的乙醇(乙醇浓度如果太大就会争夺DNA上的结合水而导致DNA沉淀)。而RNA本身第一是个单链的,在一个他没有将自身的非极性集团隐蔽起来,所以对于苯酚等有极性的物质有排斥作用,不易溶于苯酚、氯仿等溶剂。
希望对你的理解有帮助!
细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起,以核蛋白的形式存在。因此,提取RNA时要把RNA与蛋白质分离并除去。将细胞置于含有十二烷基磺酸钠(Sodium dodecyl sulfate,SDS)的缓冲液中,加等体积水饱和酚,通过剧裂振荡,然后离心形成上层水相和下层酚相。核酸溶于水相,被苯酚变性的蛋白质或者溶于酚相,或者在两相界面处形成凝胶层。
本实验采用的0.15mol/L 缓冲液系统可使大部分RNA-蛋白复合物解离,而DNA-蛋白复合物只有极少部分解离;用酚处理时DNA-蛋白复合物变性,在低温条件下从水相中除去,这样得到的RNA 制品中混杂的DNA 极少。用氯仿-异戊醇继续处理RNA 制品,可进一步除去其中少量的蛋白质。最后用乙醇使RNA 从水溶液中沉淀出来。本法得到的RNA 不仅纯度高,而且多呈自然状态,可供继续研究之用。
苯酚法提取rna的缺点细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起,以核蛋白的形式存在。因此,提取RNA时要把RNA与蛋白质分离并除去。
将细胞置于含有十二烷基磺酸钠(Sodium dodecyl sulfate,SDS)的缓冲液中,加等体积水饱和酚,通过剧裂振荡,然后离心形成上层水相和下层酚相。核酸溶于水相,被苯酚变性的蛋白质或者溶于酚相,或者在两相界面处形成凝胶层。
RNA提取时,就变性剂的选择来说,CTAB(CTAB法)比异硫氰酸胍(RIZOL试剂法)和 SDS(改良热硼酸法)更有效。
就CTAB法来说,由于以CTAB为变性剂,同时加入PVP和β一巯基乙醇共同作用变性蛋白、抑制RNase的活性,使用无水乙醇或异丙醇沉淀杂蛋白和总核酸等,然后再选择性地分离出RNA。
1、采用多种方法降解水体中的苯酚以使其浓度降低至符合国家标准,从而实现无害化排放。这种思路一般是针对酚类物质浓度较低的废水。
2、将酚类物质从废水中提取出来,对其进行回收再利用。这种思路一般是针对酚类物质浓度较高的废水。
3、在产生酚类物质的生产过程中添加其他工艺,直接将含有酚类物质的废水循环利用,从而实现含酚废水的零排放。
工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA,用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA,主要用作制备核苷酸的原料,其工艺比较简单。浓盐法使用10%左右氯化钠溶液,90℃提取3-4h,迅速冷却,提取液经离心后, 上清液用乙醇沉淀RNA。稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解,然后用酸中和,除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。
酵母含RNA达2.67-10.0%,而DNA含量仅为0.03-0.516%,为此,提取RNA多以酵母为原料。
RNA含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮可使RNA水解,从水解液中可用定糖,定磷和加银沉淀等方法测出上述组份的存在。