请教6M盐酸胍溶液的配置问题
如需编辑回答或插入图片，请点击标题到问题详情页1. 所含试剂： （1）胍盐：a.盐酸胍；b. 异硫氰酸胍； 作用：强烈的蛋白质变性剂； （2）重蒸酚 ★区别于饱和酚 重蒸酚加入0.1%的8-羟基喹啉(作为抗氧化剂)，并用等体积的0.5mol/L Tris-Cl (pH8.0。
晕，6M
盐酸胍
，是
强电解质
，
NH2
-
C
=
(NH2+Cl-)
-
NH2
，
怎么能够
上
离子交换柱
，建议用尿素溶解
包涵体
，尿素NH2
-
C=0
-
NH2，
非电解质
的
① 包涵体就是蛋白的变性聚集后的产物，6M盐酸胍及8M尿素是作为溶解包涵体的溶剂。
② 复性的过程是逐步去除盐酸胍或者尿素，从而使得蛋白天然构象逐步形成。
所以一般如果起始使用的是6M盐酸胍进行包涵体溶解，这个过程中逐步降低的是盐酸胍的浓度。梯度离心或者差速离心去除细胞碎片，一般1000r/min左右就差不多可以达到效果。包涵体是表达过快的蛋白来不及折叠而形成的蛋白团，所以一般蛋白纯度能够达到95%以上，用6M盐酸胍就基本把包涵体分开，再超滤一下加上缓冲液就基本上很纯了
① 包涵体就是蛋白的变性聚集后的产物,6M盐酸胍及8M尿素是作为溶解包涵体的溶剂.
② 复性的过程是逐步去除盐酸胍或者尿素,从而使得蛋白天然构象逐步形成.
所以一般如果起始使用的是6M盐酸胍进行包涵体溶解,这个过程中逐步降低的是盐酸胍的浓度.
DTT即DL-Dithiothreitol，中文名称为二硫苏糖醇，也称作Cleland’sReagent，是一种强效的还原剂，将-SH基保持在还原态，常用以还原蛋白和多肽中的二硫键，或更普遍用以防止蛋白半胱氨酸残基形成分子内和分子间的二硫键。
DTT还具有抗氧化作用，对一些隐藏的二硫键（溶剂无法渗透发挥作用），DTT可借助变性条件下来还原二硫键，如高温或钠离子变性剂，如6M盐酸胍，8M尿素，或1%SDS。
2. 各种缓冲液中不能有强螯合剂，如EDTA，EGTA，等等
3. 各种缓冲液里不能有高浓度的强还原剂，，比如DTT，防止二价Ni被还原4. 不能含离子型的去垢剂，比如SDS，防止Ni流失
-1mM的PMSF，防止目的5. 在破碎细胞的时候建议加入蛋白酶抑制剂，比如0.1
蛋白被降解
6. 缓冲液里可以加入甘油，防止蛋白之间由于疏水相互作用而发生聚集沉淀，甘油浓度最高可达50%(v/v)
7. 应避免含碳酸氢钠，柠檬酸等物质
8. 缓冲液里NaCl的浓度应在300mM到2M之间
9. 可加入变性剂促溶，盐酸胍(最高可6M)，尿素(最高可8M) 10.可加入非离子型去垢剂，如Triton，Tween，NP40等，最高2%，可以减少背景蛋白污染和去除核酸污染
组氨酸标签蛋白的纯化
