乙醇引起蛋白质变性实验的实验步骤. 如题.
乙醇引起的变性与沉淀
取3支试管,编号.依顺序加入试剂:
试管一:5%卵清蛋白溶液、95%乙醇、pH4.7缓冲溶液各1mL
试管二:5%卵清蛋白溶液、95%乙醇、0.1mol/L的NaOH溶液各1mL
试管三:5%卵清蛋白溶液、95%乙醇、0.1mol/L的HCl溶液各1mL
振摇混匀后,观察各管有何变化.放置片刻,向各管内加水8毫
升,然后在第2、3号管中各加一滴甲基红.再分别用0.1当量/升醋酸溶液及0.1当星/升碳酸钠溶液中和之.观察各管颜色的变化和沉淀的生成.每管再加0.1当量/升盐酸溶液数滴,观察沉淀的再溶解.解释各管发生的全部现象.
首先,只有高浓度乙醇长时间作用才会使蛋白质变性,低浓度的乙醇会使蛋白质的亲水结构(氢键)破坏而沉淀析出,类似于盐析.其次,变性的蛋白质是不会再溶于稀酸或稀碱了,应为变性即意味着结构的永久改变.你的试验中乙醇的最终浓度是95%*1ml/3ml=32%,而且最后蛋白会再溶解.因此,这个实验不足以证明蛋白质变性.
后来继续加盐酸是为了使pH值偏离等电点,增大蛋白质的溶解度,进而使蛋白质再溶解.
首先,只有高浓度乙醇长时间作用才会使蛋白质变性,低浓度的乙醇会使蛋白质的亲水结构(氢键)破坏而沉淀析出,类似于盐析。其次,变性的蛋白质是不会再溶于稀酸或稀碱了,应为变性即意味着结构的永久改变。你的试验中乙醇的最终浓度是95%*1ml/3ml=32%,而且最后蛋白会再溶解。因此,这个实验不足以证明蛋白质变性。
后来继续加盐酸是为了使pH值偏离等电点,增大蛋白质的溶解度,进而使蛋白质再溶解。
定浓度酒精才使蛋白质变性(比医院用75%乙醇消毒液)并所浓度酒精都使蛋白质变性些浓度酒精使蛋白质沉淀析已
其次,乙醇使得蛋白质的二级、三级、四级结构变化,但是不改变蛋白质的一级结构,也就是说,蛋白质还是原来的两性物质(既有酸性又有碱性,所以能够溶于酸和碱)。
好了
1号管有乙醇,还有缓冲液(缓冲液就是由酸碱组成的),1号管沉淀了,你要说明这是因为乙醇而不是缓冲液啊。
所以你需要二号三号管来证明,酸和碱都没有使蛋白质沉淀(因为变性的蛋白质被酸碱溶解了),而且中和之后就发现沉淀出现了,说明沉淀是因为乙醇而不是酸碱。
至于甲基红,是为了指示酸碱度,你不是要中和嘛,没有指示剂你怎么滴定?