抗坏血酸相关酶活性的测定
实验四 抗坏血酸含量及抗坏血酸过氧化物酶活性的测定
一、抗坏血酸含量测定
【原理】
还原型抗坏血酸(AsA)可以把铁离子还原成亚铁离子,亚铁离子与红菲咯啉(4,7-二苯基-1,10-菲咯啉,BP)反应形成红色螯合物。在534nM波长的吸收值与AsA含量正相关,故可用比色法测定。脱氧抗坏血酸(DAsA)可由二硫苏糖醇(DTT)还原成AsA。测定AsA总量,从中减去还原型AsA,即为DAsA含量。
【仪器与用具】
离心机;分光光度计;研钵;试管。
【试剂】
5%三氯乙酸(TCA);
20%TCA;
无水乙醇溶液;
0�4%磷酸—乙醇溶液;
0�5%BP—乙醇溶液;
0�03%FeCl3—乙醇溶液;
0�6g/L DTT;
NA2HPO4—NAOH溶液:以0�2Mol/L NA2HPO4和1�2Mol/L NAOH等量混合;
60MMol/L DTT—乙醇。
【方法】
1.制作标准曲线配制浓度为2mg/L,4mg/L,6mg/L,8mg/L,10mg/L,12mg/L,14Mg/L的AsA系列标准液。取各浓度标准液1�0Ml于试管中,加入1�0Ml 5%TCA、1.0ml乙醇摇匀,再依次加入0�5Ml 0�4%H3PO4—乙醇、1�0Ml 0�5%BP—乙醇、0�5Ml 0�03%FeCl3—乙醇,总体积5�0Ml。将溶液置于30℃下反应90Min,然后测定A534。以AsA浓度为横坐标,以A534为纵坐标绘制标准曲线,求出线性方程。
2.提取取植物叶片1�0g,按1∶5(W/V)加入5%TCA研磨,4000r/Min离心10Min,上清液供测定。
3.测定
(1)AsA测定取1.0Ml样品提取液于试管中,按上述相同的方法进行测定,并根据标准曲线计算AsA含量。
(2)DAsA测定向1.0Ml样品液中加入0�5Ml 60MMol/L DTT—乙醇溶液,用NA2HPO4—NAOH混合液,将溶液PH调至7~8,置于室温下10Min,使DAsA还原。然后加入0�5Ml 20%TCA,把PH调至1~2。按AsA相同方法进行测定,计算出总AsA含量,从中减去AsA,即得DAsA含量。
二、抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)活性
【原理】
AsA-POD催化AsA与H2O2反应,使AsA氧化成单脱氢抗坏血酸(MDAsA)。随着AsA被氧化,溶液中290nM波长下的消光值(A290)下降,根据单位时间内A290减少值,计算AsA-POD活性。AsA氧化量按消光系数2�8(MMol/L)/CM计算,酶活性可用每克鲜重每小时氧化AsA的微摩尔数μMol/g·H表示。
【仪器】
离心机;紫外分光光度计;研钵;试管。
【试剂】
50MMol/L K2PO4—KH2PO4缓冲液(PH7�0,内含0�1MMol/L EDTA-NA2)�
0�3MMol/L AsA;
20μMol/L AsA;
0�06MMol/L H2O2。
【方法】
1�酶液制备取1�0g植物叶片剪碎,按1∶3(W/V)加入预冷的50MMol/L K2HPO4—KH2PO4缓冲液进行研磨提取,用两层纱布过滤,滤液在4000r/Min下离心10Min,上清液作酶粗提液供测定。
2.酶活性测定3Ml反应混合液中含50MMol/L K2HPO4—KH2PO4缓冲液(PH7�0),0.1MMol/L EDTA-NA2,0.3MMol/L AsA,0�06MMol/L H2O2和0.1Ml酶液。加入H2O2后立即在20℃下测定10~30s内的A290变化,计算单位时间内AsA减少量及酶活性。
【思考题】
1.抗坏血酸在植物体内有何生理意义�
2.简述抗坏血酸过氧化物酶活性的测定原理。
苯基乙醇理化属性是什么,对人有什么作用
1-苯基乙醇性状:具花香液体;熔点:20℃;沸点:203.6℃,85-86℃(0.93千帕);相对密度(20/4℃):1.013;特征:易溶于醇,醚,不溶于水.是香料用芳香化合物中较为重要和应用广泛的一种食用香料,因它具有柔和、愉快而持久的玫瑰香气而广泛用于各种食用香精和烟用香精中.
2-苯基乙醇溶解性 溶于乙醇、乙醚、甘油,略溶于水,微溶于矿油.熔点:-27℃相对密度:1.02溶解性:20 g/L (20℃)用途:用于日化和食用香精,广泛用于调配皂用和化妆品香精上
中文名 β-苯乙醇
英文名 Phenethyl alcohol
别名 苄甲醇
苯乙醇
苯甲原醇
β-苯乙醇
2-苯乙醇
2-苯基乙醇
Β-苯乙醇-GCS
无色粘稠液体,沸点219℃,相对密度1.0230,折光率1.5310~1.5340。在苹果、杏仁、香蕉、桃子、梨子、草莓、可可、蜂蜜等天然植物中发现。它具有清甜的玫瑰样花香。建议应用在蜂蜜、面包、苹果、玫瑰花香型香精等中。
百科图谱
苯乙醇
有机化合物
苯乙醇
α-苯乙醇
三苯甲醇
肉桂醇
查看更多
中文名苯乙醇外文名Phenethyl alcohol分子式C8H10O分子量122.17?CAS号60-12-8EINECS200-456-2
目录
1 理化特性
▪ 物理特性
▪ 化学特性
2 安全性依据:
3 制备方法:
4 使用用途
5 配伍禁忌
6 使用注意事项
▪ 危险性概述
▪ 防护措施
▪ 急救措施
▪ 消防措施
▪ 泄漏应急处理
▪ 操作处置与储存
7 制备
理化特性编辑 播报
物理特性
中文同义词:2-苯乙醇;β-苯乙醇;β-苯基乙醇;2-苯基乙醇;苄基甲醇。 [1]
英文同义词:2-Phenylethanol;β-Phenylethanol;β-Phenylethyl alcohol;2-Phenyl ethyl alcohol; beta.-Phenylethanol [1]
主要成分: 纯品
外观与性状: 无色液体,有花香味。
熔点(℃): -27
沸点(℃): 219.5
相对密度(水=1): 1.02(15℃)
EINECS号 200-456-2 [1]
相对蒸气密度(空气=1): 4.21
饱和蒸气压(kPa): 0.13(58℃))
闪点(℃): 102
溶解性: 溶于水,可混溶于醇、醚,溶于甘油。 [2]
化学特性
遇明火、高热可燃。与氧化剂能发生强烈反应。其蒸气比空气重,能在较低处扩散到相当远的地方,遇火源会着火回燃。若遇高热,容器内压增大,有开裂和爆炸的危险。 [2]
安全性依据:编辑 播报
FEMANo.2858,FDA172.515,CoE68,GB/T14156-2009 [3] 。
制备方法:编辑 播报
方法一:在500mL的四口烧瓶中加入一定量的苯、催化剂,体系温度冷却至约5℃后,由恒压滴液漏斗滴加苯与环氧乙烷的混合液,控制滴加速度以维持恒定的反应温度,滴加完毕,水解,分出有机相,常压蒸出苯,再减压蒸馏得产品。
方法二:在置有带汞封的搅拌器、温度计、长回流冷凝管和滴液漏斗的1000mL四口烧瓶中,加入60mL先用无水氯化钙后用金属钠干燥过的二甲苯及21g(0.9mol)金属钠丝。用油浴加热至二甲苯层下的金属钠全部熔化(钠熔点为97.5℃),缓慢地开动搅拌器,使钠分散为细小的球珠。去掉油浴,待冷却到60℃以后,用滴液漏斗尽快地加入25g(0.15m01)苯乙酸乙酯和150g无水乙醇的混合液,然后经回流冷凝管上口再倒入200g无水乙醇。当反应趋于缓慢时,用水浴加热至钠全部溶解。蒸馏回收乙醇,在减压下蒸馏回收苯和二甲苯,瓶中残余物用水稀释。然后用苯萃取2次。苯萃取液用无水硫酸镁干燥,常压蒸馏回收苯,减压蒸馏,在116~118℃/3.3kPa下收集β-苯乙醇 [3] 。
使用用途编辑 播报
苯乙醇是我国规定允许使用的食用香料,用量按正常生产需要。主要用以配制蜂蜜、面包、桃子和浆果类等型香精。 也可用于调配玫瑰香型花精油和各种花香型香精,如茉莉香型、丁香香型、橙花香型等,几乎可以调配所有的花精油,广泛用于调配皂用和化妆品香精。此外,亦可以调配各种食用香精,如草莓、桃、李、甜瓜、焦糖、蜜香、奶油等型食用香精。 [1]
广泛用于调配皂用和化妆品用香精苯乙醇是我国规定允许使用的食用香料,用量按正常生产需要。一般在13香糖中21~80mg/kg;烘烤食品中16mg/kg;糖果中12mg/kg;冷饮中8.3mg/kg。GB 2760--1996规定为允许使用的食用香料。主要用以配制蜂蜜、面包、桃子和浆果类等型香精。调配玫瑰香型花精油和各种花香型香精,如茉莉香型、丁香香型、橙花香型等,几乎可以调配所有的花精油,广泛用于调配皂用和化妆品香精。此外,亦可以调配各种食用香精,如草莓、桃、李、甜瓜、焦糖、蜜香、奶油等型食用香精。用于日化和食用香精,广泛用于调配皂用和化妆品香精
配伍禁忌编辑 播报
与氧化试剂和蛋白质如血清有配伍禁忌。聚山梨酯能引起苯乙醇部分失活,但活性降低作用次于羟苯酯类与聚山梨酯类的抗微生物活性降低。 [4]
使用注意事项编辑 播报
危险性概述
健康危害: 吸入、摄入或经皮肤吸收后对身体有害。对眼睛、皮肤、粘膜和呼吸道有强烈刺激作用。接触后可引起头痛、头晕、恶心、呕吐、咳嗽、气短等。
环境危害: 对环境有危害,对水体可造成污染。
燃爆危险: 苯乙醇可燃,有毒,具刺激性。 [2]
防护措施
工程控制: 严加密闭,提供充分的局部排风。
呼吸系统防护: 空气中浓度超标时,必须佩戴自吸过滤式防毒面具(全面罩)。紧急事态抢救或撤离时,应该佩戴空气呼吸器。
眼睛防护: 呼吸系统防护中已作防护。
身体防护: 穿防毒物渗透工作服。
手防护: 戴橡胶手套。
其他防护: 工作现场禁止吸烟、进食和饮水。工作完毕,淋浴更衣。保持良好的卫生习惯。 [2]
这是一种常用于化妆品、香皂、洗涤剂等的香精。
中文名 : 乙醇
化学式 : C2H5OH
组成 : C 52.14%, H 13.13%, O 34.73%
相对分子质量 : 46.07
相对密度 : d420 0.000789 g/cm3
熔点 : mp -114.1°C
沸点 : bp 78.5°C
折射率 : nD20 1.361
乙酸
化学式 : CH3COOH
相对分子质量 : 60.05
相对密度(d420)1.049
熔点16.604℃.
沸点117.9℃.
折射率(nD20)1.37
中文名 : 乙酸乙酯
英文名 : Ethyl Acetate
化学式 : CH3COOC2H5
组成 : C 54.53%, H 9.15%, O 36.32%
相对分子质量 : 88.11
相对密度 : d420 0.000902 g/cm3
熔点 : mp -83°C
沸点 : bp bp 77°C
折射率 : nD20 1.3719
化学式
C8H10O2
摩尔质量
138.16 g·mol
性状
为无色稍带粘性液体,微香,味涩。不溶于水,可与丙酮、乙醇和甘油任意混合。
密度
1.102 g/cm
熔点
11 - 13 °C
沸点
247 °C( 245℃)
规格
溶液剂:0.1%-2%(其中加乙醇10%)
制备
由苯酚钠与氯乙醇作用而成
苯氧乙醇是一种经常用于护肤产品的有机化合物,可由乙二醇及苯醇醚化而成,常见于护肤霜和防晒霜。苯氧乙醇是一种无色的油状液体,有抗菌功效(一般与季铵盐一起使用),经常在生物性缓冲溶液里被用作有剧毒的叠氮化钠的替代品,因为2-苯氧乙醇的毒性较低,而且在化学上对铜及铅并不活跃。在化妆品、疫苗及药品中通常用发挥着防腐剂的功用。
在香水里作固定剂用;
作驱虫剂
外用消毒剂
醋酸纤维素的溶剂
染料
油墨
树脂
防腐剂
医药用途
有机合成
它略溶于水。此外,亦在水产养殖业里用来作为鱼类的麻醉剂。
它也被美国疾病预防控制中心列为多种美国疫苗的成分之一。 在日本,当苯氧乙醇在化妆品的使用量受到监控。
1、挥发性区别:
乙醇,酒精对皮肤伤害大,酒精有挥发性,有一定的刺激性;
丙二醇是难挥发的,性质温和的,丙二醇作为溶剂多用于日化、食品添加剂等中,丙二醇无毒、无害、无刺激、味甜。
2、相溶区别:
丙二醇,市场上一般说的丙二醇为1,2-丙二醇,CAS识别号为57-55-6,为一种化学试剂,与水、乙醇及多种有机溶剂混溶, 其化学式为 C3H8O2。
乙醇:
是一种有机物,俗称酒精。
丙二醇:
为一种化学试剂。可用作不饱和聚酯树脂的原料.在化妆品、牙膏和香皂中可与甘油或山梨醇配合用作润湿剂。在染发剂中用作调湿、匀发剂,也用作防冻剂,还用于玻璃纸、增塑剂和制药工业。