血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳

临床上常用于分析血、尿等样品中的蛋白质，供临床上诊断肝肾等疾病

如急慢性肾炎、肾病综合征、肾功能衰竭时，清蛋白降低，α1、α2和β-球蛋白升高；慢性活动性肝炎、肝硬化时，清蛋白降低，β、γ-球蛋白升高；急性炎症时，α1、α2-球蛋白升高；慢性炎症时，清蛋白降低，α2、γ-球蛋白升高；红斑狼疮、类风湿关节炎时，清蛋白降低，γ-球蛋白显著升高；多发性骨髓瘤时，清蛋白降低，γ-球蛋白升高，于β和γ-球蛋白区带之间出现“M”带。

做好血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验的方法：

电泳时，电压应控制在 110 ～ 140V ，不能过高，若电压太高，产热量大，则蛋白质标本会破坏，并且电压高则带电颗粒移动速度快，分离效果不理想。

醋酸纤维素薄膜在电泳前，一定要在缓冲液中浸透，否则有碍电泳分离，最好是浸泡过夜，效果最佳。

点样时样品一定要点在无 光泽面，否则很难吸入，点样量 不宜过多（血清样品最适宜 3μl ）。其原因是醋酸纤维素薄膜承受蛋白质有限。量过多则分子量相近的物质相互争夺迁移而重叠，影响结果观察。

电泳开始后，不能再取放薄膜，以防触电。如必需进行，要先关闭电源。

影响电泳的主要因素：

电泳介质 pH 值的影响 : 对于蛋白质和氨基酸等两性分子，电泳介质的 pH 值影响蛋白质的电离情况，即可决定蛋白质的带电量 (Q) 。 pH 值小于等电点，分子带正电荷，向负极泳动，如果 pH 大于等电点，分子带负电荷，向正极泳动。 pH 值偏离等电点越远，分子所带净电荷越多，其泳动速度越快。当缓冲液 pH 等于其等电点时，分子处于等电状态，不移动。由于血清蛋白质的等电点多在 pH4 ～ 6 之间，因此，分离血清蛋白常用 pH 8.6 的巴比妥缓冲液或三羟甲基氨基甲烷 (Tris) 缓冲液。

缓冲液的离子强度 : 离子强度低，电泳速度快，分离区带不易清晰；离子强度高，电泳速度慢，但区带分离清晰。如离子强度过低，缓冲液的缓冲量小，不易维持 pH 的恒定；离子强度过高，则降低蛋白质的带电量 ( 压缩双电层 ) 使电泳速度减慢。所以常用离子强度为 0.02 ～ 0.2 之间。

电场强度的影响 : 电场强度和电泳速度成正比关系。电场强度以每厘米的电势差计算，也称电势梯度。如纸电泳的滤纸长 15cm ，两端电压 ( 电势差 ) 为 150V ，则电场强度为 150 ／ 15=10 V ／ cm ，电场强度愈高，则带电粒子的移动愈快。 随着电场强度的增高，电流强度增加，产热也增多。产热的不良后果是： ① 引起水的蒸发，改变溶液 pH 及离子强度； ② 引起介质温度高，可使蛋白质变性。因此电泳必须控制电压在一定范围之内，当进行高压电泳时，必须装备有效的冷却装置。

电渗 : 在电场中，由于多孔支持物吸附水中的离子使支持物表面相对带电，在电场作用下，溶液就向一定方向移动，此种现象称为电渗。如纸上电泳所用的滤纸纤维素带有负电荷；琼脂糖电泳中，所用的琼脂糖由于大量硫酸根的存在也带有负电荷，它们使水感应产生水合氢离子 (H+3O) 。在外电场的作用下，水向负极移动。如果被测定样品也带正电荷，则移动更快；如果被测定样品带负电荷，则移动减慢。所以电泳时，颗粒泳动所表现的速度决定于颗粒本身的泳动速度和溶液的电渗作用。因此在选用支持物时，应尽量避免高电渗作用的物质。