三氯乙酸沉淀蛋白质可逆吗

变性作用是蛋白质受物理或化学因素的影响，改变其分子内部结构和性质的作用。一般认为蛋白质的二级结构和三级结构有了改变或遭到破坏，都是变性的结果。能使蛋白质变性的化学方法有加强酸、强碱、重金属盐、尿素、乙醇、丙酮等；能使蛋白质变性的物理方法有加热(高温)、紫外线及x射线照射、超声波、剧烈振荡或搅拌等。

三氯乙酸是强酸，铅离子是重金属，这2者均可以使蛋白质变性沉淀。

三氯乙酸与蛋白质之间主要有以下几个方面的作用:

①在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐.

②作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变，暴露出较多的疏水性基团，使之聚集沉淀.

③随着蛋白质分子量的增大，其结构复杂性与致密性越大，TCA可能渗入分子内部而使之较难被完全除去，在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片，而且随时间的延长这一作用愈加明显； 在电泳时使用TCA对蛋白质样品的浓缩或除盐时，对于分子质量大的蛋白质，要慎重选择TCA.对小分子量蛋白质的浓缩，采用TCA时也有两点需要注意:一是用TCA沉淀后，尽量用丙酮彻底抽提TCA二是样品处理后要尽快进行电泳分析，以免发生聚集及断裂，造成结果分析的不准确。

1.蛋白质的盐析反应，加饱和硫酸铵，生成沉淀，静置，然后倒出少量混浊沉淀，加水，沉淀溶解。原因:硫酸铵使蛋白质发生盐析，是可逆沉淀，加水后可以溶解。2.重金属沉淀，加硝酸银，生成沉淀，静置，去上清液，向沉淀加水，沉淀不溶解。原因:重金属离子使蛋白质变性，是不可逆沉淀，所以加水后无法溶解。3.加有机酸，加三氯乙酸，生成沉淀，倾去上清液，向沉淀加水，沉淀不溶解。原因:三氯乙酸可提供羟基或者羰基的氢或氧，酸根与带正电荷的蛋白质结合成不溶性物质，是不可逆沉淀。加水后沉淀不溶解。4.向蛋白加百分之九十五的乙醇，乙醇使蛋白质变性，产生沉淀。

(1)可逆沉淀:在温和条件下,通过改变溶液的pH或盐浓度等，使蛋白质从胶体溶液中沉淀出来。在沉淀过程中，蛋白质的结构和性质都没有发生显著变化，在适当的条件下，蛋白质可以重新溶解形成溶液，所以这种沉淀又称为非变性沉淀。可逆沉淀是分离纯化蛋白质的基本方法，如等电点沉淀法、盐析法(saltingout)等,在低温下使用有机溶剂(如乙醇或丙酮)短时间作用于蛋白质也可以使蛋白质发生可逆沉淀。

中性盐(硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等)的浓溶液使蛋白质沉淀析出的作用称为盐析，其原理是高浓度的盐能破坏水化层并中和电荷,从而使蛋白质聚集。使不同蛋白质析出的盐浓度不同,如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。由盐析获得的蛋白质沉淀能够再溶解于低盐溶液,称为盐溶故蛋白质的盐析作用是可逆过程。

(2)不可逆沉淀:在强烈沉淀条件下,蛋白质胶体溶液的稳定性被破坏，使蛋白质沉淀出来。由于这种强烈的沉淀条件同时破坏了蛋白质的结构，产生的蛋白质沉淀不能再重新溶解于水，所以又称为变性沉淀。如加热沉淀、重金属盐沉淀、有机酸沉淀和生物碱沉定等都属于不可:沉淀。

蛋白质的变性指蛋白质在理(高温、高压)、化化学(酸碱、变性剂)作用下，高级结构遭破坏，其心理化性质和生物功能同时发生改变的过程与现象。变性的蛋白质容易相互聚集形成沉流保是有些情况下，当维持溶液稳定的条件仍然存在时(如电荷)，蛋白质并不沉淀。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。

三氯乙酸又名三氯醋酸。

着蛋白质分子量的增大，其结构复杂性与致密性越大，TCA 可能渗入分子内部而使之较难被完全除去，在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片，而且随时间的延长这一作用愈加明显。

电泳图谱显示，BSA、HSA 单体谱带有较明显的展宽现象，这可能是由于TCA 的结合，使SDS 与蛋白质的结合量产生偏差，从而造成蛋白质所带电荷的不均一性，造成迁移率的不一致。