酒精为什么能沉淀DNA

乙醇的优点是可以任意比和水相混溶,乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。

DNA 溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时,乙醇会夺DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混 合,其乙醇的最终含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇来替代懈水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。但是加95%的乙醇使总体积增 大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。折中的做法初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙醇,最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA.一般在室温下放置15-30分钟即可。

乙醇：乙醇是一种有机物，俗称酒精，化学式为CH3CH2OH(C2H6O或C2H5OH)或EtOH，是带有一个羟基的饱和一元醇，在常温、常压下是一种易燃、易挥发的无色透明液体，它的水溶液具有酒香的气味，并略带刺激。有酒的气味和刺激的辛辣滋味，微甘。

乙醇液体密度是0.789g/cm(20C°) ，乙醇气体密度为1.59kg/m，沸点是78.3℃，熔点是-114.1℃，易燃，其蒸气能与空气形成爆炸性混合物，能与水以任意比互溶。能与氯仿、乙醚、甲醇、丙酮和其他多数有机溶剂混溶，相对密度(d15.56)0.816。

乙醇的用途很广，可用乙醇制造醋酸、饮料、香精、染料、燃料等。医疗上也常用体积分数为70%-75%的乙醇作消毒剂等，在国防工业、医疗卫生、有机合成、食品工业、工农业生产中都有广泛的用途。

DNA：脱氧核糖核酸(英语:Deoxyribonucleic acid，缩写为DNA)又称去氧核糖核酸，是一种分子，双链结构，由脱氧核糖核苷酸(成分为:脱氧核糖及四种含氮碱基)组成。可组成遗传指令，引导生物发育与生命机能运作。

主要功能是长期性的资讯储存，可比喻为"蓝图"或"食谱"。其中包含的指令，是建构细胞内其他的化合物，如蛋白质与RNA所需。

带有遗传讯息的DNA片段称为基因，其他的DNA序列，有些直接以自身构造发挥作用，有些则参与调控遗传讯息的表现。

组成简单生命最少要265到350个基因 。

一、步骤

于最多体积450 μl 的DNA 样品中，加入1/10体积pH4.2的3 mol/L NaAc, 快速颠倒以混匀。

加入2倍体积95%乙醇或无水乙醇，充分混匀。

样品踩于冷环境中沉淀：-20℃ 过夜，或－70℃30 min, 或干冰中5 min 。

使用干冰进行乙醇沉淀

用锤子将干冰砸成粉末，再将管子插入粉末；或将干冰砸成小块，置于抗冻容器中，加入95% 乙醇捣成稀泥，插入管子。 注意：乙醇会洗去标签。

图一  离心之后离心管中分为两层

1:上县为水相，包含着DNA ，下层为有机相，包含蛋白质。通常存水相与有机相之间有一个中间层，可见一个白色带， 这是一些被抽提出来的蛋白质。在你吸取水相的时候，不要碰那个白色带。

高速离心样品15 – 30 min, 转速至少12000g, 如果没有冷冻离心机，将离心机置于4℃ 。

除去上清，上清可以倒入下水道中。

离心管倒置于纸巾上吸干。

预冷的70％乙醇洗涤沉淀。

按步骤6干燥或使用真空浓缩机。

用pH8.0 的TE (10mmol/L Tris· HCI, 0.1 mmol/L EDTA) 重悬DNA 。如果沉淀不能完全溶解，加入更多的TE, 将样品保存于4℃。

三、温馨提示

在处理大分子DNA （大于30 kb) 时要特别小心，由于DNA 样品不能抹荡，只能颠倒或转动混匀。去除表面的氯仿，代替用乙醇沉淀DNA 样品的是， DNA 溶液需要对大体积的冷TNE 溶液进行透析或用水饱和的乙醚抽提。

2.乙醇可以吸附水分子（极性相同）,使得溶液中相对的水分子减少,增大了DNA在水中的相对浓度.

3.附：乙醇沉淀DNA需要盐离子,用金属离子屏蔽DNA上磷酸的负电荷,降低DNA分子间的斥力,才能沉淀完全.

提取液中加入等体积预冷的5mol/L

Licl

充分混匀，1000rpm

4℃离心15min，取上清。

加等体积异丙醇，混匀，室温放置10min，10000rpm

4℃离心15min。

弃上清，纯点加入70%乙醇洗涤一次，沉淀风干10~15min。

500ul，含RNA酶的TE（pH8.0）溶解沉淀，室温放置30min。（将质粒RNaesA混合物用酚：氯仿抽提一次，然后用氯仿抽提一次）

用2.5倍体积无水乙醇沉淀质粒，风干10min。

加1ml灭菌水溶解沉淀，加500ul

PEG-MgCl2溶液，充分混合，室温10min，12000rpm

4℃离心15min。

用70%乙醇重悬沉淀，12000rpm

4℃离心15min。

弃上清，沉淀用70%乙醇处理一次，最后将质粒，溶于500ulTE（pH8.0）中，取1ul质粒DNA，100倍稀释后测OD260，计算DNA的浓度，其余封装，-20℃保存备用。