为什么用乙醇沉淀DNA

核酸提取时，用异丙醇和乙醇的区别是什么

异丙醇比较疏水,能很更好地沉淀核酸,用乙醇的目的是去盐,它比异丙醇更亲水,所以能去掉一些盐离子.有时还用70%的乙醇洗样品也是为了增加盐的溶解度.在沉淀核酸时可用乙醇与异丙醇,乙醇的极性要强于异丙醇,所以一般用2倍体积乙醇沉淀,但在多糖、蛋白含量高时,用异丙醇沉淀可部分克服这种污染,尤其用异丙醇在室温下沉淀对摆脱多糖、杂蛋白污染更为有效.

异丙醇沉淀核酸时,高浓度盐存在将使大量多糖存在在溶液中,从而可达到去多糖的作用.但高浓度的盐存在会影响核酸的进一步操作,因此必须用乙醇多次洗涤脱盐

我做乙醇沉淀的时候按以下步骤：1）酶切、去磷酸产物用dd水稀释至100ul，2）加入100ul酚氯仿，1，3000rpm离心5min3) 将上清取出，置于另一个0.5ml的EP管中，加入10ul 3M NaAc,200ul 无水乙醇，－20度放置1hr4) 1,3000rpm离心10min5) 倒掉上清，用pippet吸掉残余的乙醇，加入100ul75％乙醇，震荡，1，3000rpm离心5min6) 倒掉上清，用pippet吸掉残余的乙醇,空气中放置15min，待乙醇挥发干净，加入20－30ul ddH2O 溶解DNA.请问，在不降低纯化的质量和回收率的情况下，以上步骤那些地方可以节省时间？小于多少bp的DNA不能用乙醇沉淀法？我在第4、5步离心完毕，从来没有看到过管子底部有白色的DNA,不管是PCR产物还是质粒，但跑电泳是可以看到的，但不亮。请问，裸眼可以看到的DNA，量至少要多少ug?双酶切质粒的多克隆位点时，要切下一小段DNA（5－50bp）,这段DNA在乙醇沉淀时是不是也要沉淀下来？因为后续的操作可能是连接，它的存在对连接的效率是又影响的

博凌科为 Glycogen核酸助沉剂 货号：112601

本产品为分子生物学级Glycogen(糖原)，不含DNase，不含RNase，可以用作沉淀DNA或RNA的辅助沉淀剂(used as a carrier for the precipitation of DNA or RNA)。作为DNA或RNA的辅助沉淀剂，大多数情况下glycogen比tRNA或超声处理过的DNA效果更好。由于glycogen中不含DNA和RNA，因此用glycogen作为辅助沉淀剂沉淀下来的核酸更适合于后续的PCR、RT-PCR以及内切酶等核酸酶反应。而tRNA或超声处理过的DNA作为辅助沉淀剂有时会干扰PCR、RT-PCR以及内切酶等核酸酶反应。据文献报道，连接反应产物用glycogen沉淀后对于后续的细菌转化没有干扰，0.001mg/ml glycogen不会抑制TdT，浓度不大于2mg/ml的glycogen不会影响反转录酶的活力，0.02mg/ml glycogen不会抑制T4 RNA ligase。Glycogen会干扰DNA和蛋白的相互作用。通常1微升Glycogen (20mg/ml)即可把少至皮克(pg)级的DNA或RNA从1毫升的溶液体系中沉淀出来。每个包装至少足够沉淀350个常规量的DNA或RNA样品。

核酸酶在体外适宜的条件也可以降解DNA，因此提核酸要在低温下进行，尽量减少DNA的降解。所以要将乙醇预冷。

用无水乙醇沉淀DNA原因

用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶， 乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。

DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的最终含量占67％左右。

因而也可改用95％乙醇来替代无水乙醇（因为无水乙醇的价格远远比95％乙醇昂贵）。

但是加95％的乙醇使总体积增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA损失也增大，尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95％乙醇代替无水乙酵，最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15－30分钟即可。

和蛋白质类似，核酸也会发生盐析。盐析主要是一种物理过程（食盐溶于水后，电离为钠离子和氯离子，钠离子会发生强烈的水合作用，使水的游离程度下降，核酸中亲水基团和水的亲和力下降，而从水中析出。不引起分解。