苯酚硫酸法测定葡萄糖的标准曲线，以及具体方法！！
标准液的制法：取100mg葡萄糖（104℃烘干至恒重）在100ml的容量瓶定容。分别取溶液1ml、2ml、3ml、4ml、6ml、8ml至100ml的容量瓶中，制成10ug/mg、20、30、40、60、80ug/mg的标准液。
苯酚溶液的制法：称取5g的苯酚，加入95ml蒸馏水，溶解。
反应液：分别取1ml的标准液，加入1ml的苯酚溶液，迅速加入5ml的浓硫酸，震荡摇匀。在沸水浴中加热15min后冷却到室温，在490nm波长下测定其吸光值。
我这两天刚做出来的，但是我的浓度是用的20ug/mg、40、60、80、100、120，其他的细节都是一样的。我只是按照我做的给你说的，你也可以灵活变通，比如沸水浴的时间，波长的选择都是按照自己的实验具体确定的，但是还是有些细节不能忽视的，比如苯酚要求用182℃蒸馏后得到的馏分，如果试验经费允许可以直接买重蒸酚，普通苯酚和重蒸酚价格相差有点大。具体我们可以讨论，我也是试验很多方法自己总结出来的，用苯酚测定糖是个技术活，而且冒着有毒的危险。
土壤的磷酸酶测定主要是靠测定培养后溶液中的游离的酚来确定的，因此，标准曲线要求酚的精度较高。
一般来讲，我们都选择苯酚作为酚的标准物质，由于一般的苯酚是分析纯，纯度并不高，所以需要购买重蒸苯酚作为标准曲线贮备物质。
先买重蒸苯酚，然后配置成1g/L的贮备液，在冰箱里可以长期保存。临用时在依据标线稀释。一般多稀释成为10mg/L。
通常讲的苯酚就是未经提纯的苯酚.结晶酚就是高纯度的苯酚.苯酚制剂就是经过提纯,又加有稳定剂的高纯度苯酚.
由异丙苯法生产的苯酚中主要杂质有丙酮、异丙叉丙酮、异丙苯、苯乙烯、苯并呋喃等,因苯酚与某些杂质形成二元或多元共沸混合物,必须用特殊精馏或化学方法才能获得高纯度苯酚.
苯酚遇空气易被氧化,高温条件更是如此,加入铝片直接防氧化(要氧化的话先氧化铝片)加入碳酸氢钠间接防氧化(高温条件碳酸氢钠分解产生二氧化碳,形成一个无氧的氛围!).
苯酚在这里是辅助显色剂,但又是定量显色的关键物质,所以必须纯化,否则你的标线线性会很差,重现性同样很差.
如果限于实验室条件不能进行高温蒸馏,那么建议你采用蒽酮硫酸法测定多糖,很可能比NDS测定方法重现性还好,但需注意一点：蒽酮剧毒!所以一般用的都是NDS方法,虽然麻烦一些.
