三氯乙酸沉淀蛋白的作用机理是什么啊？请详解。
三氯乙酸与蛋白质之间主要有以下几个方面的作用:①在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐.②作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变，暴露出较多的疏水性基团，使之聚集沉淀.③随着蛋白质分子量的增大，其结构复杂性与致密性越大，TCA可能渗入分子内部而使之较难被完全除去，在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片，而且随时间的延长这一作用愈加明显；
在电泳时使用TCA对蛋白质样品的浓缩或除盐时，对于分子质量大的蛋白质，要慎重选择TCA.对小分子量蛋白质的浓缩，采用TCA时也有两点需要注意:一是用TCA沉淀后，尽量用丙酮彻底抽提TCA二是样品处理后要尽快进行电泳分析，以免发生聚集及断裂，造成结果分析的不准确。
变性作用是蛋白质受物理或化学因素的影响，改变其分子内部结构和性质的作用。一般认为蛋白质的二级结构和三级结构有了改变或遭到破坏，都是变性的结果。能使蛋白质变性的化学方法有加强酸、强碱、重金属盐、尿素、乙醇、丙酮等；能使蛋白质变性的物理方法有加热(高温)、紫外线及x射线照射、超声波、剧烈振荡或搅拌等。
三氯乙酸是强酸，铅离子是重金属，这2者均可以使蛋白质变性沉淀。
①在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐.
②作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变，暴露出较多的疏水性基团，使之聚集沉淀.
③随着蛋白质分子量的增大，其结构复杂性与致密性越大，TCA可能渗入分子内部而使之较难被完全除去，在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片，而且随时间的延长这一作用愈加明显； 在电泳时使用TCA对蛋白质样品的浓缩或除盐时，对于分子质量大的蛋白质，要慎重选择TCA.对小分子量蛋白质的浓缩，采用TCA时也有两点需要注意:一是用TCA沉淀后，尽量用丙酮彻底抽提TCA二是样品处理后要尽快进行电泳分析，以免发生聚集及断裂，造成结果分析的不准确。
(1)可逆沉淀:在温和条件下,通过改变溶液的pH或盐浓度等，使蛋白质从胶体溶液中沉淀出来。在沉淀过程中，蛋白质的结构和性质都没有发生显著变化，在适当的条件下，蛋白质可以重新溶解形成溶液，所以这种沉淀又称为非变性沉淀。可逆沉淀是分离纯化蛋白质的基本方法，如等电点沉淀法、盐析法(saltingout)等,在低温下使用有机溶剂(如乙醇或丙酮)短时间作用于蛋白质也可以使蛋白质发生可逆沉淀。
中性盐(硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等)的浓溶液使蛋白质沉淀析出的作用称为盐析，其原理是高浓度的盐能破坏水化层并中和电荷,从而使蛋白质聚集。使不同蛋白质析出的盐浓度不同,如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。由盐析获得的蛋白质沉淀能够再溶解于低盐溶液,称为盐溶故蛋白质的盐析作用是可逆过程。
(2)不可逆沉淀:在强烈沉淀条件下,蛋白质胶体溶液的稳定性被破坏，使蛋白质沉淀出来。由于这种强烈的沉淀条件同时破坏了蛋白质的结构，产生的蛋白质沉淀不能再重新溶解于水，所以又称为变性沉淀。如加热沉淀、重金属盐沉淀、有机酸沉淀和生物碱沉定等都属于不可:沉淀。
蛋白质的变性指蛋白质在理(高温、高压)、化化学(酸碱、变性剂)作用下，高级结构遭破坏，其心理化性质和生物功能同时发生改变的过程与现象。变性的蛋白质容易相互聚集形成沉流保是有些情况下，当维持溶液稳定的条件仍然存在时(如电荷)，蛋白质并不沉淀。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。
2。三氯乙酸等（称为 生物碱试剂）一类试剂，通常情况下是跟蛋白质侧链上的氨基（—NH3^+）结合而沉淀蛋白。除过三氯乙酸外，还有类似的如苦味酸、过氯酸、水杨酸、鞣酸、钨酸等。一般加水使浓度稀释后 会有解离现象，是可逆的。这是因为生物碱试剂 属于有机试剂，跟氨基的亲和常数 不是很高。
原因：加入高浓度的中性盐、加入有机溶剂、加入重金属、加入生物碱或酸类、热变性
少量的盐（如硫酸铵、硫酸钠等）能促进蛋白质的溶解。如果向蛋白质水溶液中加入浓的无机盐溶液，可使蛋白质的溶解度降低，而从溶液中析出，这种作用叫做盐析．
这样盐析出的蛋白质仍旧可以溶解在水中，而不影响原来蛋白质的性质，因此盐析是个可逆过程．利用这个性质，采用分段盐析方法可以分离提纯蛋白质．
2)蛋白质的变性
在热、酸、碱、重金属盐、紫外线等作作用下，蛋白质会发生性质上的改变而凝结起来．这种凝结是不可逆的，不能再使它们恢复成原来的蛋白质．蛋白质的这种变化叫做变性．
蛋白质变性后，就失去了原有的可溶性，也就失去了它们生理上的作用．因此蛋白质的变性凝固是个不可逆过程．
造成蛋白质变性的原因
物理因素包括：加热、加压、搅拌、振荡、紫外线照射、x射线、超声波等：
化学因素包括：强酸、强碱、重金属盐、三氯乙酸、乙醇、丙酮等。
