苯酚硫酸法是什么?
苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚生成橙黄色化合物,再以比色法测定。
1、制作标准曲线:准确称取标准葡聚糖(或葡萄糖)20mg于500ml容量瓶中,加水至刻度,分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1。8ml,各以蒸馏水补至2.0ml,然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml。
摇匀静置30分钟以后于490nm测吸光度,以2.0ml水按同样显色操作为空白,横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得标准曲线。
2、取多糖样品1.0ml,加1.0ml蒸馏水,然后加入6%苯酚1.0ml,迅速加入浓硫酸5.0ml,在涡旋仪上震荡,充分混匀,静置30分钟,于490nm测定吸光度,并将测得的吸光度带入标准曲线中,可获得多糖浓度。
注意
(1)此法简单、快速、灵敏、重复性好,对每种糖仅制作一条标准曲线,颜色持久。
(2)制作标准线宜用相应的标准多糖,如用葡萄糖,应以校正系数0.9校正μg数。
(3)对杂多糖,分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算。
(4)测定时根据光密度值确定取样的量。光密度值最好在0.1—0.3之间。比如:小于0.1之下可以考虑取样品时取2克,仍取0.2ml样品液,如大于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定。
2al+6h2so4(浓)=al2(so4)3+3so2+6h2o
苯酚与浓硫酸的反应是可逆的,且正逆反应都易进行(相较于苯)。高浓度硫酸促进正反应,而大量的水促进逆反应。
原因主要是中间体碳正离子向正逆反应的活化能很接近,离去H和离去SO3都很容易发生。
就单纯的将苯酚与浓硫酸混合,由于浓硫酸的强氧化性,苯酚被氧化生成苯醌等产物,颜色也变成橙至深红色。如果加热的反应更加复杂,除了上述生成物外,热浓硫酸的脱水吸水性使得苯酚分子间也会脱去一个水分子,生成二苯醚之类的,还有就是生成一些酚酯的物质。
苯酚加入浓硫酸发生磺化反应,生成苯磺酸或苯酚二磺酸,具体根据化学反应条件的不同生成不同的产物。
向有机化合物分子中引入磺酸基团的反应称为磺化反应。磺化反应是指硫原子与碳原子相连的反应,得到的是磺酸化合物。磺化是放热反应,低温磺化时需要冷却,而高温磺化则需要加热保温。 芳香族化合物主要用直接磺化,即亲电取代反应。
扩展资料
苯酚类的芳烃磺化反应:
1、芳烃的磺化反应通常采用浓硫酸或含有5%-20%三氧化硫的发烟硫酸。磺化反应是一种可逆反应,欲得良好产率的磺酸,必须使用过量的磺化剂或者不断移去生成的水。
2、对于较难磺化的芳烃可采用三氟化硼,锰盐,汞盐,矾盐做催化剂。由于磺化反应是一可逆反应,磺酸基位置随反应。
3、磺化反应的可逆性的一个重要应用是将磺酸基先临时占据芳环某特定位置,然后再进行其他的反应,待反应完成后,再在稀硫酸中加热,以移去磺酸基。
参考资料来源:百度百科-苯酚
百度百科-磺化反应
苯酚硫酸法测多糖。
是将多糖在浓硫酸水合产生的高温下迅速水解,产生单糖。
单糖中再加入苯酚反应(在强酸条件下)生成橙色衍生物。
在波长490nm左右处和一定浓度范围内,该衍生物的吸收值与单糖浓度呈线性关系,从而可用比色法测定其含量。
若要一起加入,先配成溶液的话。要先将苯酚溶于(温)水,然后将浓硫酸绶绶倒入。切不可将溶液注入水中。