细胞培养液中蛋白的提取方法?
蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段,现介绍几种常用的浓缩技术.
1、透析袋浓缩法
利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种.将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6 000-12 000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可.也可将吸水剂配成30%-40%浓度的溶液,将装有蛋白液的透析袋放入即可.吸水剂用过后,可放入温箱中烘干或自然干燥后,仍可再用.
2、冷冻干燥浓缩法
这是浓缩蛋白质的一种较好的办法,它既使蛋白质不易变性,又保持蛋白质中固有的成分.它是在冰冻状态下直接升华去除水分.具体做法是将蛋白液在低温下冰冻,然后移置干燥器内(干燥器内装有干燥剂,如NaOH、CaCl2和硅胶等).密闭,迅速抽空,并维持在抽空状态.数小时后即可获得含有蛋白的干燥粉末.干燥后的蛋白质保存方便,应用时可配成任意浓度使用.也可采用冻干机进行冷冻干燥.
3、吹干浓缩法
将蛋白溶液装入透析袋内,放在电风扇下吹.此法简单,但速度慢,且温度不能过高,最好不要超过15 ℃.
4、超滤膜浓缩法
此法是利用微孔纤维素膜通过高压将水分滤出,而蛋白质存留于膜上达到浓缩目的.有两种方法进行浓缩:一种是用醋酸纤维素膜装入高压过滤器内,在不断搅拌之下过滤;另一种是将蛋白液装入透析袋内置于真空干燥器的通风口上,负压抽气,而使袋内液体渗出.
5、凝胶浓缩法
选用孔径较小的凝胶,如SephadexG25或G50,将凝胶直接加入蛋白溶液中.根据干胶的吸水量和蛋白液需浓缩的倍数而称取所需的干胶量.放入冰箱内,凝胶粒子吸水后,通过离心除去.
6、浓缩胶浓缩法
浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物,具有很强的吸水性能.每克干胶可吸水120 ml-150 ml.它能吸收低分子量的物质,如水、葡萄糖、蔗糖、无机盐等,适宜浓缩10000分子量以上的生物大分子物质.浓缩后,蛋白质的回收率可达80%~90%.比浓缩胶应用方便,直接加入被浓缩的溶液中即可.必须注意,浓缩溶液的pH值应大于被浓缩物质的等电点,否则在浓缩胶表面产生阳离子交换,影响浓缩物质的回收率.
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蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤:(一)材料的预处理及细胞破碎分离提纯某一种蛋白质时,首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态,不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法有:1.机械破碎法这种方法是利用机械力的剪切作用,使细胞破碎。常用设备有,高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。2.渗透破碎法这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。3.反复冻融法生物组织经冻结后,细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。这种方法简单方便,但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。4.超声波法使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。5.酶法如用溶菌酶破坏微生物细胞等。(二)蛋白质的抽提通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提,抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂(十二烷基磺酸钠、tritonX-100等),使膜结构破坏,利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中,应注意温度,避免剧烈搅拌等,以防止蛋白质的变性。
组成:乙二醇和环氧乙烷聚合物别名:碳蜡、PEG
结构式:CH2(OH)-(CH2CH2O)n -CH2OH
目前加工系列产品有:
PEG-4000 120~400(目)
PEG-6000 120~500(目)
PEG-8000 120~600(目)
PEG-20000 120~800(目)
性状及用途:
聚乙二醇系列产品通常情况下溶于水和多种有机溶剂,不溶于脂肪烃、苯、乙二醇等,不会水解变质,有广泛的溶解范围和优良的相容性、很好的稳定性、润滑性、成膜性、增塑性、分散性等。系低毒物质,且无刺激性,属非离子型聚合物。
应 用:
聚乙二醇的应用有两种方式:一种是PEG包含在最终产品中,例如:医药用的油膏、软膏、洗液、栓剂、片剂和非肠道用溶液;在化妆品中的牙膏、发乳、除臭剂、洗净膏;造纸工业中用于压光纸;尼龙纤维、赛璐璐薄膜、粘合剂、洗涤剂、焊剂、清漆及照相显影剂等。另一种是为许多产品提供润滑性,如:金属、瓷砖、瓷品的成形润滑剂,纺丝和纺织纤维、制轮胎和医疗外科缝线的润滑剂,乳胶泡沫制成的脱膜剂等。
聚乙二醇200:可作为有机合成的介质及有较高温度要求的热载体,在日用化学工业作保湿剂和无机盐增溶剂,粘度调节剂。在纺织工业中用作柔软剂、抗静电剂、造纸与农药工业中润湿剂。
聚乙二醇400、600:用作医药,化妆品的基质,橡胶与纺织工业的润滑剂和润湿剂。600在木材工业中作保湿剂,在金属工业加于电解液中可增强研磨效果,增强金属表面的光泽。
聚乙二醇1000-1500:在医药、纺织、化妆品工业中用作基质或润滑剂、柔软剂;涂料工业中作分散剂,改进树脂的水分散性、柔韧性,用量为10-30%;油墨中可提高染料的溶解能力,降低其挥发性;在蜡纸和印台油墨中尤为适用;也可在圆珠笔油墨中作调节油墨粘稠度用;橡胶工业用作分散剂,以促进硫化作用,以及用作碳黑填充料的分散剂。
聚乙二醇2000-3000:用作金属加工铸膜剂,金属拉丝、冲压或成型的润滑剂及切削液,研磨冷却抛光剂、焊接剂,造纸工业中作润滑剂。
聚乙二醇4000-6000:在医药、化妆品工业中用作基质,起调节粘度、熔点的作用。在橡胶、金属加工工业中作润滑剂、冷却剂,在农药、颜料工业生产中作分散剂、乳化剂,纺织工业中用作抗静电剂、润滑剂。
包装及贮存:
聚乙二醇200-600用50kg塑料桶;聚乙二醇1000用10kg塑料桶;聚乙二醇1500-6000用25kg纸袋。贮存于阴凉、干燥处,注意防火,避免与热和氧化物接触。
1、相对分子质量低的聚乙二醇(Mr<2000)适于用作润湿剂和稠度调节剂,用于膏霜、乳液、牙膏和剃须膏等,也适用于不清洗的护发制品,赋予头发有丝状光泽。
2、相对分子质量高的聚乙二醇(Mr>2000)适用于唇膏、除臭棒、香皂、剃须皂、粉底和美容化妆品等。
3、在清洗剂中,聚乙二醇也用作悬浮剂和增稠剂。
4、在制药工业上,用作油膏、乳剂、软膏、洗剂和栓剂的基质。
5、聚乙二醇广泛用于多种药物制剂,如注射剂、局部用制剂、眼用制剂、口服和直肠用制剂。
6、固体级别的聚乙二醇可以加入液体聚乙二醇调整黏度,用于局部用软膏;聚乙二醇混合物可用作栓剂基质;聚乙二醇的水溶液可作为助悬剂或用于调整其他混悬介质的黏稠度;聚乙二醇和其他乳化剂合用,增加乳剂稳定性。
7、聚乙二醇还用作薄膜包衣剂、片剂润滑剂、控释材料等。
扩展资料:
由于链长的影响,不同分子量的聚乙二醇往往有不同的物理性质(如黏度)及不同的应用,但大部分的聚乙二醇化学性质是相似的。低分子量的聚乙二醇通常指较纯的寡聚体,较具单分散性;高纯度的聚乙二醇具有结晶性,因此可用X-光决定其晶体结构。由于纯化和分离寡聚体聚乙二醇较为困难,因此价格通常是多分散聚乙二醇的10-1000倍。
相对分子质量在700-900之间者为半固体。相对分子质量1000及以上者为浅白色蜡状固体或絮片状石蜡或流动性粉末。混溶于水,溶于许多有机溶剂,如醇、酮、氯仿、甘油酯和芳香烃等,不溶于乙醚和正己烷。
它与疏水性分子结合后的产物可用作非离子表面活性剂。随着分子量的提高,其水溶性、蒸汽压、吸水性和有机溶剂的溶解度等相应下降,而凝固点、相对密度、闪点和黏度则相应提高。对热稳定,与许多化学品不起作用,不水解。
参考资料来源:百度百科 聚乙二醇
聚乙二醇是α-氢-ω-羟基(氧-1,2-乙二基)的聚合物。系列产品无毒、无刺激性,味微苦,具有良好的水溶性,并与许多有机物组份有良好的相溶性。具有优良的润滑性、保湿性、分散性。化学式为HO(CH₂CH₂O)nH。
用途:
1、聚乙二醇在化妆品工业和制药工业中的应用很广泛。由于聚乙二醇具有水溶性、不挥发性、生理惰性、温和性、润滑性和使皮肤润湿、柔软、有愉快用后感等优良性质。可选取不同相对分子质量级分的聚乙二醇改变制品的粘度、吸湿性和组织结构。
2、在清洗剂中,聚乙二醇也用作悬浮剂和增稠剂。
3、在制药工业上,用作油膏、乳剂、软膏、洗剂和栓剂的基质。聚乙二醇广泛用于多种药物制剂,如注射剂、局部用制剂、眼用制剂、口服和直肠用制剂。
4、聚乙二醇的水溶液可作为助悬剂或用于调整其他混悬介质的黏稠度;聚乙二醇和其他乳化剂合用,增加乳剂稳定性。
扩展资料:
聚乙二醇的化学性质:
1、在一般条件下,聚乙二醇是很稳定的,但在120℃或更高的温度下它能与空气中的氧发生作用。在惰性气氛中(如氮和二氧化碳),即使被加热至200~240℃也不会发生变化,当温度升至300℃会发生热裂解。
2、聚乙二醇无毒、无刺激性,广泛应用于各种药物制剂中。低分子量的聚乙二醇毒性相对较大。局部应用聚乙二醇特别是黏膜给药可导致刺激性疼痛。在外用洗剂中,能增加皮肤的柔韧性,并具有与甘油类似的保湿作用。
3、随着分子量的提高,聚乙二醇的水溶性、蒸汽压、吸水性和有机溶剂的溶解度等相应下降,而凝固点、相对密度、闪点和粘度则相应提高。热稳定性好,与许多化学品不起作用,不水解。
参考资料来源:百度百科-聚乙二醇
熔点
64-66℃
沸点
>250℃
密度
1.27 g/mL at 25℃
蒸气密度
>1 (vs air)
蒸气压
<0.01 mm Hg ( 20℃)
折射率
n=1.469
闪点
270℃
储存条件
2-8℃
溶解度
H2O: 50 mg/mL, 澄清, 无色
形态
粘稠液体→蜡状固体
敏感性
吸湿性
Merck
147568
稳定性
稳定,会被强氧化剂氧化
聚乙二醇系列产品无毒、无刺激性,味微苦,具有良好的水溶性,并与许多有机物组份有良好的相溶性。它们具有优良的润滑性、保湿性、分散性、粘接剂、抗静电剂及柔软剂等,在化妆品、制药、化纤、橡胶、塑料、造纸、油漆、电镀、农药、金属加工及食品加工等行业中均有着极为广泛的应用。