求酸碱指示剂（苯酚红）的配制方法！！！

溶液的配制方法：取0.1 g苯酚红与5.7 mL 0.05 mol/L的NaOH溶液在研钵中研匀后用纯水溶解制成250 mL试液。

酚红的作用: 酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂,但是酚红具有一定的固醇类激素样作用,如雌激素样作用,尤其对于所培养的哺乳类动物细胞,可能发生的固醇类反应不可忽视。

1g苯酚红溶于约1300ml水、约350ml乙醇、500ml丙酮。用这三种溶剂直接溶解，不可能达到0.5%的浓度。苯酚红做酸碱指示剂的时候，一般配成0.1%。

称取1.6g1，10-菲罗啉及1g硫酸亚铁铵(或0.7g硫酸亚铁)，溶于100mL水中，贮存于棕色瓶中。

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其他指示剂和指示液的制备

8.1 百里香酚蓝-酚酞混合指示液

取3份体积百里香酚蓝溶液(1g/L)和2份体积酚酞溶液(1g/L)混合均匀。

8.2 甲基红-亚甲基蓝混合指示液

将50mL甲基红溶液(2g/L)和50mL亚甲基蓝溶液(1g/L)混合。

8.3 酸性铬蓝K-萘酚绿B混合指示剂

称取0.1g酸性铬蓝K，0.1g萘酚绿B和20g干燥氯化钾，置于研钵中，充分研磨混匀，贮存于棕色广口瓶中。

8.4 溴百里(香)酚蓝-苯酚红混合指示液

0.08g溴百里酚蓝和0.1g苯酚红溶于20mL乙醇中，加水50mL，用氢氧化钠溶液(4g/L)调至pH为7.5(红紫色)，再以水稀释至100mL。

8.5 溴甲酚绿-甲基橙混合指示液

6份体积溴甲酚绿溶液(1g/L)和1份体积甲基橙溶液(1g/L)混合。

8.6 溴甲酚绿-甲基红混合指示液

3份体积溴甲酚绿溶液(1g/L)与1份体积甲基红溶液(1g/L)混合，摇匀，贮存于棕色瓶中。

8.7 1，10-菲罗啉-硫酸亚铁铵混合指示液

称取1.6g1，10-菲罗啉及1g硫酸亚铁铵(或0.7g硫酸亚铁)，溶于100mL水中，贮存于棕色瓶中。

8.8 甲基红指示液(1g/L)

称取0.10g甲基红，溶于乙醇，用乙醇稀释至100mL。

8.9 溴甲酚绿指示液(2g/L)

称取0.20g溴甲酚绿溶解于6mL氢氧化钠溶液(4g/L)和5mL乙醇中，用水稀释至100mL。

8.10 甲基橙指示液(1g/L)

称取0.10g甲基橙，溶于70℃水中，冷却，用水稀释至100mL。

8.11 酚酞指示液(10g/L)

称取1.0g酚酞，溶于乙醇，用乙醇稀释至100mL。

8.12 溴(甲)酚蓝指示液(1g/L)

称取0.10g溴酚蓝，溶于乙醇，用乙醇稀释至100mL。

8.13 钙指示液(钙羧酸指示剂)

称取0.20g钙指示剂〔2-羟基-1-(2-羟基-4-磺酸-1-萘偶氮)-3-萘甲酸〕(C21H14N2O7S)或其钠盐与10g在105℃干燥的氯化钠，置于研钵中研细混匀。贮存于棕色磨口瓶中。

8.14 铬黑T指示剂

将1.0g铬黑T与100.0g干燥的氯化钠，置于研钵中，研细混匀。贮存于棕色磨口瓶中。

8.15 铬黑T指示液(5g/L)

称取0.50g铬黑T和4.5g氯化羟胺，溶于乙醇中，用乙醇稀释至100mL，贮存于棕色瓶中。可保持数月不变质。

8.16 百里香酚蓝指示液(1g/L)

溶解0.10g百里香酚蓝于2.2mL氢氧化钠溶液(4g/L)和5mL乙醇中，稀释至100mL。

8.17 孔雀绿指示液(1g/L)

称取0.10g孔雀绿，溶于水，稀释至100mL。

8.18 二甲酚橙指示液(2g/L)

称取0.20g二甲酚橙，溶于水，稀释至100mL。

8.19 二苯偶氮碳酰肼指示液(5g/L)

将0.50g二苯偶氮碳酰肼(C13H12ON4)溶于乙醇，用乙醇稀释至100mL。溶液贮存于冰箱中。

8.20 对硝基苯酚指示液(1g/L)

称取0.10g对硝基苯酚，溶于乙醇，用乙醇稀释至100mL。

8.21 苯酚红指示液(0.2g/L)

将0.05g苯酚红，2.85mL氢氧化钠溶液(2g/L)和5mL乙醇一起温热，待溶解后，加入50mL乙醇，用水稀释至250mL。

8.22 达旦黄指示液(0.4g/L)

称取0.04g达旦黄，溶于乙醇中，用乙醇稀释至100mL。

8.23 硫酸铁铵指示液(80g/L)

溶解8.0g硫酸铁铵〔NH4Fe(SO4)2.12H2O〕在约75mL水中，过滤，加几滴硫酸，稀释至100mL。

8.24 淀粉指示液(10g/L)

8.24.1 1g可溶性淀粉与5mg红色碘化汞混合，并用足够冷的水调成稀薄的糊状，在不断搅拌下，慢慢注入100mL沸水中，煮沸混合物，充分搅拌至稀薄透明的流动形式，冷却后使用。

8.24.2 将1g可溶性淀粉与5mL水制成糊状，搅拌下将糊状物加入100mL水中，煮沸几分钟后冷却，使用期限二周。溶液中加入几滴甲醛溶液，使用期限可延长数月。

该法是指在指示剂苯酚磺存在的条件下，以尿素转变成氨的多少及显色度，定性测定豆粕中脲酶活性，进而确定豆粕生熟度的一种方法。

检测方法：

取粉碎豆粕粉少许，均匀地平铺于表面皿中。用滴管吸取尿素—苯酚磺指示剂（1.2g苯酚红溶于30ml0.2NnaOH溶液中，用蒸馏水稀释至300ml；加入90g尿素，溶解后再用蒸馏水稀释至2000ml；加70ml0.2NH2SO4；稀释至3000ml）浸湿表面皿上的被检样，5min后观察结果：

（1）

无任何红点出现，再放置25min，若仍无红点出现，说明被检饼粕无脲酶活性，是饼粕加工过熟表现。

（2）

有少数红点，或表面被25%~50%红点覆盖，说明豆粕脲酶活性弱，饼粕可用。

（3）

当饼粕表面75%~100%被红点覆盖，说明脲酶活性很强，饼粕生，需加热处理才可利用。

注：尿素—苯酚磺指示剂应呈明亮琥珀色，若呈橘红色，0.2NH2SO4调整。该液最好现配现用。

无机盐：氯化钠、氯化钙、氯化钾、无水磷酸二氢钠、六水合氯化镁等。

氨基酸：L-盐酸精氨酸、L-盐酸赖氨酸、L-谷氨酰胺、L-酪氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸等。

维生素：维生素B1、维生素B2、维生素b12、维生素C、D-生物素、盐酸吡哆醛等。

其 它：无水葡萄糖、丙酮酸钠、次黄嘌呤、亚油酸、硫辛酸、苯酚红等。

【M199培养基配制方法】

⑴ 将一袋培养基全部倒入一容器中，用少量注射用水将袋内残留培养基洗下，并入容

器。加注射用水(水温20℃～30℃)到47.5 升，轻微搅拌溶解。

⑵ 加入114.5克碳酸氢钠。

⑶ 轻微搅拌溶解，加注射用水至50 升。

⑷ 如果必要，用1mol / L 氢氧化钠溶液或 1mol / L盐酸溶液调pH 至所需值。

⑸ 用 0.2μm 滤膜正压过滤除菌。

⑹ 溶液应在2℃-8℃下避光保存。