0.2%溴甲酚紫怎么配置

理论上:1.6克溴甲酚紫溶于98.4ml的无水乙醇中摇匀(这里将乙醇的密度当水的密度即1,也稍有误差)

实际操作中做法:

溴甲酚紫1.6g用无水酒精定容至100ml，摇匀

具体操作：称取溴甲酚紫1.6g倒入小烧杯，用少量无水酒精溶解，移至100ml容量瓶，用无水酒精多次洗小烧杯，洗液移入容量瓶，最后用无水酒精定容至100ml，摇匀备用

(这种做法浓度肯定稍稍小于1.6%,但可以忽略不计)

总大肠菌群(totalcoliforms)指一群在37℃培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。

仪器和装置

培养箱(36±1)℃。

冰箱0～4℃。

显微镜。

平皿直径为9cm。

试管。

分度吸管1mL，10mL。

锥形瓶。

小倒管。

载玻片。

培养基与试剂

乳糖蛋白胨培养液成分蛋白胨10g、牛肉膏3g、乳糖5g、氯化钠5g、溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L)、蒸馏水1000mL。

制法将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中，调整pH为7.2～7.4，再加入1mL16g/L的溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于倒管的试管中，68.95kPa(115℃)高压灭菌20min，贮存于冷暗处备用。

二倍浓缩乳糖果蛋白胨培养液按上述乳糖蛋白胨培养液，除蒸馏水外，其他成分量加倍。

伊红美蓝培养基成分蛋白胨10g、乳糖10g、磷酸氢二钾2g、琼脂20～30g、蒸馏水1000mL、伊红水溶液(20g/L)20mL、美蓝水溶液(5g/L)13mL。

制法 将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH为7.2，加入乳糖，混匀后分装，以68.95kPa(115℃，101b)高压灭菌20min。临用时加热熔化琼脂，冷却至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，混匀，倾注平皿。

革兰氏染色液:

结晶紫染色液 1g结晶紫溶于20mL(95+5)乙醇，与80mL10g/L草酸铵水溶液混合。

注:结晶紫不可用龙胆紫代替，前者是纯品，后者不是单一成分，易出现假阳性。结晶紫溶液放置过久会产生沉淀，不能再用。

革兰氏碘液 1g碘与2g碘化钾混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后再加蒸馏水至300mL。

脱色剂 乙醇 (95+55)。

沙黄复染液 将0.25g沙黄，溶解于10mL(9+5) 乙醇中，待完全溶解后加入90mL蒸馏水。

染色法:

将培养18～24h的培养物涂片。

将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。

滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。

滴加脱色剂，摇动玻片，直至无紫色脱落为止，约30s，水洗。

滴加复染剂，复染1min，水洗，待干，镜检。

检验步骤

1)乳糖发酵试验。取10mL水样接种到10mL双料乳糖蛋白胨培养液中，取1mL水样接种到10mL单料乳糖蛋白培养液中，另取1mL水样注入9mL灭菌生理盐水中，混匀后吸取1mL(即0.1mL水样)注入10mL单料乳糖蛋白胨培养液中，每一稀释接种5管。

对已处理的出厂自来水，需经常检验或每天检验一次的，可直接接种5份10mL水样双料培养基，每份接种10mL水样。

检验水源水时，如污染较严重，应加大稀释度，可接种1mL、0.1mL、0.01mL甚至0.1mL、0.01mL、0.001mL，每个稀释度接种5管，每个水样共接种15管。接种1mL以下水样时，必须做10倍递增稀释后，取1mL接种，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌刻度吸管。

将接种管置于(36±1)℃培养箱内，培养(24±2)h，如所有乳糖蛋白胨培养管都不产气产酸，则可报告为总大肠菌群阴性如有产酸产气者，则按下列步骤进行。

2)分离培养。将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置于(36±1)℃培养箱内培养18～24h，观察菌落形态，挑取符合下列特征的菌落做革兰氏染色、镜检和证实试验。

深紫黑色、具有金属光泽的菌落

淡紫红色、中心较深的菌落。

3)证实试验。经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌，同时接种乳糖蛋白陈培养液，置于(36±1)℃培养箱中培养(24±2)h，有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在。

结果报告

根据证实为总大肠菌群阳性的管数，查MPN(MostProbableNumber，最可能数)检索表，报告每100mL水样中的总大肠菌群最可能数值(MPN)。5管法结果见表82.3，15管法结果见表82.4。稀释水样查表后所得结果应乘稀释倍数。如所有乳糖发酵管均阴性时，可报告大肠菌群未检出。

表82.3 用5份10mL水样时各种阳性和阴性结果组合时的最可能数(MPN)

表82.4 总大肠菌群MPN检索表

续表

续表

续表

溴甲酚绿的变色范围是：PH4.0~5.6,加1~3滴即可（浓度0.1%的20%乙醇溶液）.

望采纳