盐酸胍溶于异丙醇吗
盐酸胍法辛属于抗高血压药物,用于治疗中度至重度高血压。化学名称为N-脒基-2-(2,6-二氯苯基)乙酰胺单盐酸盐,其分子式为:C9H9Cl2N3O·HCl,分子量为282.55,结构式为:
盐酸胍法辛为白色至类白色结晶粉末,难溶于水和乙醇,在甲醇中有相对较高的溶解度(>30mg/mg)。
盐酸胍法辛是选择性α2-肾上腺素受体增效剂,最早用于治疗中度至重度高血压,以口服给药的片剂给药,在美国的商品名为Tenex,规格为1mg或2mg。
由于盐酸胍法辛该药物具有很强的中枢作用,且该药物血浆蛋白结合率高,普通剂型释放速率过快使得血药浓度峰值偏高,诱发其副作用,如倦睡、头晕、入睡困难、恶心、呕吐、健忘等。
目前,盐酸胍法辛的合成报道不多,文献报道的方法主要有以下5种。
方法一:2,6-二氯苯乙腈溶于甲醇,缓慢加入浓硫酸,80℃加热进行醇解,保温12h,反应完毕缓慢加入到含有少量水的甲醇中搅拌30min,蒸馏回收大部分甲醇后,再加入适量水,用乙酸乙酯提取,有机层干燥旋蒸除去乙酸乙酯,得2,6-二氯苯乙酸甲酯;将2,6-二氯苯乙酸甲酯溶于异丙醇,然后将溶液加入到胍的异丙醇溶液中,室温搅拌10h,真空抽滤得胍法辛粗品。向粗品中加入异丙醇调成浆状后,用盐酸乙醇调pH值约1~2,真空抽滤,除去不溶物,滤液浓缩得盐酸胍法辛;
该方法以浓硫酸制备2,6-二氯苯乙酸甲酯,而浓硫酸容易残留。
方法二:2,6-二氯苯乙酸溶于甲苯后加入到胍的甲苯溶液中,120℃加热回流12h,减压蒸馏除去甲苯,得胍法辛粗品,将胍法辛粗品加入到异丙醇中调成浆状,用盐酸乙醇调节pH值约1~2,真空抽滤,除去不溶物,滤液浓缩得盐酸胍法辛;
该方法工艺简单,但使用了毒性较大的甲苯作为反应溶剂。
蛋白质担负着复杂的生化反应,在行使生物功能时,必须具有特定的三维空间结构。在生物合成以后,蛋白质本身也经历着繁杂的生理过程。在生化试验中,常需要对蛋白质进行变复性研究,盐酸胍和尿素是蛋白质变复性中最常使用的试剂,那么二者有什么区别?实验中该如何选择呢?
由于外界因素作用,使天然蛋白质分子的构象发生异常变化,从而导致生物活性的丧失以及物理、化学性质的异常变化,这种现象称为蛋白质的变性。变性可以涉及次级键、二硫键的断裂,但不涉及一级结构上肽键的断裂。
盐酸胍和尿素变性蛋白质包括两种机制:第一种机制是变性蛋白质与盐酸胍和尿素优先结合,形成复合物,当复合物被除去,反应平衡移动,随着变性剂浓度的增加,天然状态的蛋白质不断转变为复合物,最终导致蛋白质完全变性;第二种机制是盐酸胍和尿素对疏水氨基酸残基的增溶作用,因为盐酸胍和尿素具有形成氢键的能力,盐酸胍和尿素在高浓度(4~8mol/L)水溶液时能断裂氢键,结果盐酸胍和尿素就成为非极性残基的较好溶剂,使之蛋白质分子内部的疏水残基伸展和溶解性增加,从而使蛋白质发生不同程度的变性。
二者在蛋白质变性中的差别:
浓度 :在室温下,3~4mol/L盐酸胍可使球状蛋白质从天然状态转变至变性状态的中点,通常增加变性剂浓度可提高变性程度,约6mol/L盐酸胍可以使蛋白质完全转变为变性状态。盐酸胍由于具有离子特性,因而比尿素的变性能力强。一些球状蛋白质,甚至在8mol/L尿素溶液中也不能完全变性,然而在8mol/L盐酸胍溶液中,它们一般以无规卷曲(完全变性)构象状态存在。
溶解度 :尿素溶解能力较盐酸胍慢而弱,溶解度为70%~90%,尿素在作用时间较长或温度较高时会裂解形成氰酸盐,对重组蛋白质的氨基进行共价修饰,但其具有不电离,中性,成本低等优点;盐酸胍溶解能力达95%以上,且溶解作用快而不造成重组蛋白质的共价修饰,但成本较尿素高、在酸性条件下易产生沉淀、可能对后续实验有干扰等缺点。
总体而言,作为蛋白质变性过程中常用的试剂,盐酸胍和尿素的优缺点分别为:盐酸胍溶解能力和变性能力相对较强,不会造成重组蛋白质的共价修饰,但有成本高、在酸性条件下易产生沉淀、对蛋白质离子交换色谱有干扰等缺点;尿素溶解能力相对较弱,但具有不电离、呈中性、成本低、蛋白质复性后不会造成大量蛋白质沉淀等优点。在实际实验中,研究人员需要根据条件及目的进行选择,以获得最优的实验结果。
(1)胍盐:a.盐酸胍;b. 异硫氰酸胍;
作用:强烈的蛋白质变性剂;
(2)重蒸酚
★区别于饱和酚
重蒸酚加入0.1%的8-羟基喹啉(作为抗氧化剂),并用等体积的0.5mol/L Tris-Cl (pH8.0)和0.1mol/L Tris-Cl(pH8.0)缓冲液反复抽提使之饱和并使其pH值达到7.6以上,主要用于DNA的抽提。
因为苯酚是酸性的,酸性条件(pH<7)下DNA会分配于有机相,故不能用重蒸酚。本实验中Trizol溶液pH<7,故要使用重蒸酚。适合RNA的抽提。
作用:有机溶剂;蛋白质变性剂;
个人觉得不要自己配了还是买trizol 试剂盒吧,自己配的麻烦还不容易操作。
希望得到你的认可哦!
但是...