氧化还原指示剂DCIP

吲哚酚试剂用于检测维生素C，为蓝紫色。 学名：二氯酚靛酚钠。 检测维C的方法：取甲、乙两支试管分别加入3毫升维生素C和清水，再向两试管中各加十滴吲哚酚试剂。含有维C的液体将褪掉蓝紫色的吲哚酚试剂，清水则会被染成蓝紫色。称为“褪色反应”

2，6-二氯靛酚和2，6-二氯靛酚钠盐的区别是颜色不同。

1、2，6-二氯靛酚钠盐是一种化学品，化学式是C12H6CL2NNAO2。无气味的暗绿色固体，用于抗环血酸的测定。

2、2，6-二氯靛酚钠盐的水溶液显蓝色，在酸性环境中玫瑰色，当被还原时为无色。在酸性环境中测定VC时，VC可将二氯靛酚还原为无色。

维生素 C 含量测定实验中,加入白陶土的目的是激活因子Ⅻ或Ⅺ。

一、实验原理

抗坏血酸分子中存在烯醇式结构，因而具有很强的还原性，氧化失去两个氢原子而转变成脱氢抗坏血酸。其余2，6—二氯酚靛酚钠盐（C12H6NCl2Na）染料氧化抗坏血酸而其本身被还原为无色的衍生物，可作为维生素C含量测定的滴定剂和指示剂。

在酸性溶液中氧化型2，6—二氯酚靛呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。因此，当用2，6—二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在抗坏血酸尚未全部被氧化时，滴下的2，6—二氯酚靛酚立即被还原为无色，抗坏血酸全部被氧化时，则滴下的 2，6—二氯酚靛酚溶液呈红色，所以，在滴定过程中当溶液从无色转变成微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定终点。根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸的含量。

二、材料、仪器与试剂

1．材料：水果或蔬菜

2．仪器：三角瓶（50ml）、研钵、移液管（10ml）、漏斗、滤纸、容量瓶（100ml）、微量滴定管（5ml）、分析天平、离心机。

3．试剂

（1）标准抗坏血酸溶液：精确称取抗坏血酸100mg,用适量2%草酸溶液溶解后移入500ml容量瓶中，并以2%草酸溶液定容，振摇混匀，1ml含0.2mg抗坏血酸。

（2） 0.02% 2，6—二氯酚靛酚溶液：称取2，6—二氯酚靛酚钠盐50mg溶于200ml含52mg 碳酸氢钠热水中，冷后加水稀释至250ml，过滤后装入棕色瓶于冰箱中保存，临用前按下法标定：取5ml标准抗坏血酸溶液于三角瓶中，加5ml2%标准抗坏血酸溶液于三角瓶中，加5ml 2%草酸，用2，6—二氯酚靛酚溶液滴定至微红色，15S不褪色即为终点，并计算出每1ml染料溶液相当的抗坏血酸毫克数。

三、操作步骤

1．称取捣碎的果蔬样品20g，放在研钵中，加2%草酸溶液少许研碎，再转入200ml容量瓶中，加2％ 草酸稀释至刻度，过滤备用。如果滤液有颜色，可用白陶土脱色。

2．吸取样品滤液10ml于烧杯中，用已标定的2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至出现微红色，且15s不褪色为止，记下染料用量。同时，以10ml 2%草酸溶液作为空白按同上方法进行滴定，作三个重复。

四、结果计算

数据记录：

结果计算：

结果分析：

五、注意事项

1．标准抗坏血酸溶液临时配制。

2．2，6-二氯酚靛酚染料不稳定，每周重新配制，临用前标定。

3．抗坏血酸溶液很不稳定，易氧化，故操作过程要迅速，夏季应置于冰浴中研磨。

1斐林试剂检测可溶性还原糖

原理：还原糖+斐林试剂→砖红色沉淀

注意：斐林试剂的甲液和乙液要等量混合均匀后方可使用，而且是现用现配，条件需要水浴加热。

应用：检验和检测某糖是否为还原糖；不同生物组织中含糖量高低的测定；在医学上进行疾病的诊断，如糖尿病、肾炎。

2苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ检测脂肪

原理：苏丹Ⅲ+脂肪→橘黄色；苏丹Ⅳ+脂肪→红色

注意：脂肪的鉴定需要用显微镜观察。

应用：检测食品中营养成分是否含有脂肪。

3双缩脲试剂检测蛋白质

原理：蛋白质+双缩脲试剂→紫色

注意：双缩脲试剂在使用时，先加A液再加B液，反应条件为常温（不需要加热）。

应用：鉴定某些消化液中含有蛋白质；用于劣质奶粉的鉴定。

4碘液检测淀粉

原理：淀粉+碘液→蓝色

注意：这里的碘是单质碘，而不是离子碘。

应用：检测食品中营养成分是否含有淀粉

5DNA的染色与鉴定

染色原理：DNA+甲基绿→绿色

应用：可以显示DNA在细胞中的分布。

鉴定原理：DNA+二苯胺→蓝色

应用：用于DNA粗提取实验的鉴定试剂。

6吡罗红使RNA呈现红色

原理：RNA+吡罗红→红色

应用：可以显示RNA在细胞中的分布。

注意：在观察DNA和RNA在细胞中的分布时用的是甲基绿和吡罗红混合染色剂，而不是单独染色。

7台盼蓝使死细胞染成蓝色

原理：正常的活细胞，细胞膜结构完整具有选择透过性能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；死细胞或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

应用：区分活细胞和死细胞；检测细胞膜的完整性。

8线粒体的染色

原理：健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料，可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色，而细胞质接近无色。

应用：可以用高倍镜观察细胞中线粒体的存在。

9酒精的检测

原理：橙色的重铬酸钾溶液在酸性条件下与酒精发生化学反应，变成灰绿色。

应用：探究酵母菌细胞呼吸的方式；制作果酒时检验是否产生了酒精；检查司机是否酒后驾驶。

10 CO2的检测

原理：CO2可以使澄清的石灰水变混浊，也可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿在变黄。

应用：根据石灰水混浊程度或溴麝香草酚蓝水溶液变黄的时间长短，可以检测酵母菌培养液中CO2的产生情况。

11 染色体（或染色质）的染色

原理：染色体容易被碱性染料（如龙胆紫溶液或醋酸洋红溶液）染成深色。

应用：用高倍镜观察细胞的有丝分裂。

12 吲哚酚试剂与维生素C溶液呈褪色反应

原理：吲哚酚即2，6-二氯酚靛酚钠，其水溶液为蓝紫色，维生素C具有还原性，能将其褪色。

应用：可用于检测食品营养成分中是否含有维生素C。

13 亚硝酸盐的检测出现玫瑰红

原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。

应用：将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测比较，可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量。

14 脲酶的检测

原理：细菌合成的脲酶可以将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，使PH升高，从而使酚红指示剂变红。

应用：在以尿素为唯一氮源的培养基加入酚红指示剂，培养某种细菌后，看指示剂变红与否可以鉴定这种细菌能否分解尿素。

15 伊红美蓝检测大肠杆菌

原理：在伊红美蓝培养基上，大肠杆菌的代谢产物（有机酸）与伊红美蓝结合使菌落呈现黑色。

应用：用滤膜法测定水中大肠杆菌的含量。

16 刚果红检测纤维素分解菌

原理：刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素分解菌分解后，刚果红-纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。

应用：筛选纤维素分解菌。

因为一、实验目的从食品原料等提取维生素C、脱色2,6-二氯酚靛酚钠(蓝色)滴定、计算

第二页，共10页。二、实验原理染料2,6－二氯靛酚的颜色反应表现两种特性,一氧化还原状态,氧化态为深蓝色,还原态变为无色二介质的酸度影响。

生物实验中颜色反应的总结

1.斐林试剂检测可溶性还原糖原理：还原糖+菲林试剂→砖红色沉淀

注意：菲林试剂的甲液和乙液要混合均匀后方可使用，而且是现用现配，条件是需要加热。

应用：检验和检测某糖是否还原糖；不同生物组织中含糖量高低的测定；在医学上进行疾病的诊断，如糖尿病、肾炎。

2.苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ检测脂肪

原理：苏丹Ⅲ+脂肪→橘黄色；苏丹Ⅳ+脂肪→红色注意：脂肪的鉴定需要用显微镜观察。应用：检测食品中营养成分是否含有脂肪。

3.双缩脲试剂检测蛋白质原理：蛋白质+双缩脲试剂→紫色

注意：双缩脲试剂在使用时，先加A液再加B液，反应条件不需要加热。应用：鉴定某些消化液中含有蛋白质；用于劣质奶粉的鉴定。

4.碘液检测淀粉和观察动植物细胞的基本结构的染色剂原理：淀粉+碘液→蓝色；碘液能使动植物细胞着色。注意：这里的碘是单质碘，而不是离子碘。

应用：检测食品中营养成分是否含有淀粉；验证光合作用产生淀粉；在观察动植物细胞基本结构细胞膜、细胞质、细胞核时用碘液做染色剂，使细胞核染上颜色便于观察。

5.DNA的染色与鉴定

染色原理：DNA+甲基绿→绿色应用：可以显示DNA在细胞中的分布鉴定原理：DNA+二苯胺→蓝色

应用：用于DNA粗提实验的鉴定试剂

6.吡罗红使RNA呈现红色原理：RNA+吡罗红→红色

应用：可以显示RNA在细胞中的分布。

7.台盼蓝使死细胞染成蓝色

原理：正常的活细胞，细胞膜结构完整具有选择透过性能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；死细胞或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

应用：区分活细胞和死细胞；检测细胞膜的完整性。

8.线粒体的染色

原理：健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料，可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色，而细胞质接近无色。

应用：可以用高倍镜观察细胞中线粒体的存在。

9.酒精的检测

原理：橙色的重铬酸钾溶液在酸性条件下与酒精发生化学反应，变成灰绿色。应用：探究酵母菌细胞呼吸的方式；制作果酒时检验是否产生了酒精；检查司机是否酒后驾驶。

10.CO2的检测

原理：CO2可以使澄清的石灰水变混浊，也可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿在变黄。

应用：根据石灰水混浊程度或溴麝香草酚蓝水溶液变黄的时间长短，可以检测酵母菌培养液中CO2的产生情况。

11.染色体（或染色质）的染色

原理：染色体容易被碱性染料（如龙胆紫溶液、醋酸洋红溶液、改良苯酚品红染液）染成深色。

应用：用高倍镜观察细胞的有丝分裂；观察低温诱导植物细胞染色体数目变化；植物花药离体培养时，可以通过染色镜检来确定其中的花粉是否处于适宜离体培养的发育期。

12.吲哚酚试剂与维C溶液呈褪色反应

原理：吲哚酚即2，6-二氯酚靛酚钠，其水溶液为蓝紫色，维C具有还原性，能将其褪色。

维生素C溶液在中性条件下可使吲哚酚试剂由蓝色变成无色，在酸性条件下可使吲哚酚试剂由蓝色变成粉红色。也可以用氯化铁溶液代替吲哚酚试剂，维生素C溶液可把黄色的氯化铁溶液还原成无色的氯化亚铁溶液。

应用：可用于检测食品营养成分中是否含有维生素C。

13.亚硝酸盐的检测出现玫瑰红

原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。

应用：将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测比较，可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量。

14.脲酶的检测

原理：细菌合成的脲酶可以将尿分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，使PH升高，从而使酚红指示剂变红。

应用：在以尿素为唯一氮源的培养基加入酚红指示剂，培养某种细菌后，看指示剂变红与否可以鉴定这种细菌能否分解尿素。

15.伊红美蓝检测大肠杆菌

原理：在伊红美蓝培养基上，大肠杆菌的代谢产物（有机酸）与伊红美蓝结合使菌落呈深紫色。

应用：用滤膜法测定水中大肠杆菌的含量。

16.刚果红检测纤维素分解菌

原理：刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素分解菌分解后，刚果红-纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。

应用：筛选纤维素分解菌。

17.植物花粉细胞核的染色

原理：在做月季的花药离体培养实验时，选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重要因素，一般在单核靠边期花药培养成功率最高。选择花药时，一般通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。确定花粉发育时期的最常用的方法有醋酸洋红法(花粉细胞核内有染色体，染色体主要由DNA和蛋白质组成，醋酸洋红为碱性染色剂，染色体易被碱性染料染色。通过染色，可以确定细胞核为单核期，还是双核期，还可以确定其花粉的发育是单核居中期还是单核靠边期)。但是，某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。

应用：月季花药离体培养时，通过染色镜检确定花粉是否处于适宜的发育期。

2，6-二氯酚靛酚溶液：称取碳酸氢钠52mg，溶于200ml沸水中，称取2，6-二氯酚靛酚50mg溶于上述碳酸氢钠溶液，冷去置于冰箱中过夜，过滤至250ml容量瓶中，定容！！此溶液保存在棕色瓶中，冷藏，每周标定一次。标定方法：取5ml标定好的抗坏血酸溶液，加入1%草酸5ML，摇匀，用上述溶液滴定至溶液呈现粉红色，15秒不褪色即为终点

每毫升该溶液相当于Vc的质量=滴定度=抗坏血酸浓度*消耗抗坏血酸体积/消耗染料体积

Vc含量测定：

称取适量样品，50-100g，立即加入2%草酸溶液，倒入搅碎机中绞碎成浆，称取10-30g样品，置于烧杯中，用1%草酸溶液将样品移入100ml容量瓶中，定容，摇匀

将样品过滤，弃去最初的1-2ml，若样液有颜色，应用白陶土去色，然后迅速吸取5-10ml滤液，置于50ml锥形瓶中，用标定的2，6-二氯酚靛酚滴定，至溶液成粉红色，且15s不褪色为终点。

这样，每100g样品中Vc含量=消耗染料体积*滴定度/滴定时所取的滤液中含样品量*100

答：2,6-二氯酚靛酚溶液:称取碳酸氢钠52mg,溶于200ml沸水中,称取2,6-二氯酚靛酚50mg溶于上述碳酸氢钠溶液标准溶液：配置2%的草酸溶液.准确称取50mg抗坏血酸,溶于少量2%的抗坏血酸的溶液中,并转移至250ml容量瓶,用2%草酸定容。

摘要：维生素C是一种已糖醛基酸，在水溶液中易被氧化，在碱性条件下易分解，在弱酸条件中较稳定，维生素C开始氧化为脱氢型抗坏血酸（有生理作用）。如果进一步水解则生成2，3-二酮古乐糖酸，失去生理作用。根据它具有的还原性质可以测定维生素C的含量。 关键词：维生素C，质量控制，含量测定 1.简述 维生素C又叫抗坏血酸，是一种水溶性维生素。 英文名称：Vitamin C ，Ascorbic Acid 1.1性质 分子式：C6H8O6；分子量：176.12u；CAS号：50-81-7；酸性，在溶液中会氧化分解。 1.1.1物理性质 外观：无色晶体；熔点：190 - 192℃；沸点：（无）；紫外吸收最大值：245nm；荧光光谱：激发波长－无nm，荧光波长－无nm； 1.1.2维生素性质 溶解性：水溶性维生素；推荐摄入量：每日60毫克；最高摄入量：引起腹泻之量； 缺乏症状：坏血病；过量症状：腹泻；主要食物来源：柑桔类水果、蔬菜等 1.2维生素C主要生理功能 1、 促进骨胶原的生物合成。利于组织创伤口的更快愈合； 2、 促进氨基酸中酪氨酸和色氨酸的代谢，延长肌体寿命。 3、 改善铁、钙和叶酸的利用。 4、 改善脂肪和类脂特别是胆固醇的代谢，预防心血管病。 5、 促进牙齿和骨骼的生长，防止牙床出血。； 6、 增强肌体对外界环境的抗应激能力和免疫力。 2.维生素C的药理作用 2.1 药理毒理 维生素C为抗体及胶原形成，组织修补(包括某些氧化还原作用)，苯丙氨酸、酪氨酸、叶酸的代谢，铁、碳水化合物的利用，脂肪、蛋白质的合成，维持免疫功能，羟化与羟色胺，保持血管的完整，促进非血红素铁吸收等所必需。 2.2 药代动力学 胃肠道吸收，主要在空肠。蛋白结合率低。以腺体组织、白细胞、肝、眼球晶体中含量较高。人体摄入维生素C每日推荐需要量时，体内约贮存1500mg，如每日摄入200mg维生素C时，体内贮量约2500mg。肝内代谢，极少量以原形或代谢产物经肾排泄。当血浆浓度大于14μg/ml时，尿内排出量增多。可经血液透析清除。 2.3 适应症 1.用于防治坏血病，也可用于各种急慢性传染性疾病及紫癜等辅助治疗。克山病患者发生心源性休克时，可用大剂量本品治疗。 2.用于慢性铁中毒的治疗(维生素C促进去铁胺对铁的络合，使铁排出加速)。 3.用于特发性高铁血红蛋白血症的治疗有效。 4.用于治疗肝硬化、急性肝炎和砷、汞、铅、苯等慢性中毒时肝脏的损害。 3.维生素C系列产品的开发现状 近年来，国内外许多厂家都在致力于开发高附加值的VC衍生物，如瑞士罗氏公司除了生产VC、VC粉、脂肪包膜VC外，还有一定生产规模的VC钠(L-抗坏血酸钠)、VC钙（L-抗坏血酸钙）、VC多磷酸酯、VC棕榈酸酯、VC磷酸酯镁、VC硬脂酸酯、VC-葡萄糖化合物等品种，这些产品的售价远远高于VC。我国也有厂家在研究，但无论在品种上还是在生产规模上仅是刚刚起步。 《中国药典》2005版收录了以下复方制剂：维生素C泡腾片、维生素C泡腾颗粒、维生素C注射液、维生素C颗粒、维生素C钙、维生素C钠、维生素C片。 由于VC在生产片剂时常用湿法制粒，需经过制软材、制粒、干燥等一系列工艺过程，在此过程中如与水份、高温接触时间较长，会加速VC的氧化。而将普通VC原料用不同的辅料进行微囊包衣处理，制成含量不同的可直接压片的颗粒VC，即提高了稳定性，同时也增加了附加值。目前VC的复方制剂已发展了水溶性、脂溶性、氨基酸类、微量元素类等多种品种。 4.维生素C的鉴别 4.1与硝酸银反应。维生素C分子中有烯二醇基，具有强还原性，可被硝酸银氧化为去氢抗坏血酸，同时产生黑色金属银沉淀。 4.2与2，6-二氯靛酚反应。2，6-二氯靛酚反应为一染料，其氧化型在酸性介质中为玫瑰红色，碱性介质中为蓝色。与维生素C作用后生成还原型无色的酚亚胺。 4.3与其他氧化剂反应。维生素C可被亚蓝基、高锰酸钾、碱性酒石酸铜试液、磷钼酸等氧化剂氧化为去氢抗坏血酸，同时抗坏血酸可使其试剂褪色，产生沉淀或呈现颜色。 4.4糖类反应。维生素C可在三氯化醋酸或盐酸存在下水解、脱羧、生成戊糖，再失水，转化为糠醛，加入吡咯，加热至50℃产生蓝色。 4.5紫外分光光度法。维生素C在0.01mol/L盐酸溶液中，在243nm波长处有唯一的最大吸收，利用此特征进行鉴别。 5.杂质检查 《中国药典》规定应检查维生素C及其片剂、注射剂的澄清度与颜色，另外对维生素C原料中铜、铁离子进行检查。另外还有炽灼残渣，重金属，细胞内毒素等。注射液和泡腾制剂还需检查酸碱度。 【检查】5.1 溶液的澄清度与颜色 取本品3.0g，加水15ml，振摇使溶解，溶液应澄清无色；如显色，将溶液经4 号垂熔玻璃漏斗滤过，取滤液，照分光光度法（附录Ⅳ B），在420nm 的波长处测定吸收度，不得过0.03。 5.2 炽灼残渣 不得过0.1 ％（附录Ⅷ N）。 5.3 铁 取本品5.0g两份，分别置25ml量瓶中，一份中加0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液(B)；另一份中加标准铁溶液（精密称取硫酸铁铵863mg，置1000ml量瓶中，加1mol/L硫酸溶液25ml，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀）1.0ml，加0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液(A)。照原子吸收分光光度法（附录Ⅳ D 杂质检查法），在248.3nm的波长处分别测定，应符合规定。 5.4 铜 取本品2.0g两份，分别置25ml量瓶中，一份中加0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液(B)；另一份中加标准铜溶液（精密称取硫酸铜393mg，置1000ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀）1.0ml，加0.1mol/L硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液(A)。照原子吸收分光光度法（附录Ⅳ D 杂质检查法），在324.8nm的波长处分别测定，应符合规定。 5.5重金属 取本品1.0g，加水溶解成25ml，依法检查（附录Ⅷ H第一法），含重金属不得过百万分之十。 维生素C注射液相关检验项目及标准规定（仅供参考）： 《中国药典》2005年版二部 [含量测定] 含维生素C(C6H8O6)应为标示量的90.0%～110.0% 《中国药典》2005年版二部 [检查] 可见异物 均不得检出可见异物 《中国药典》2005年版二部 [性状] 应为无色至微黄色的澄明液体 《中国药典》2005年版二部 [检查] 装量 应符合规定 《中国药典》2005年版二部 [检查] pH值 应为5.0～7.0 《中国药典》2005年版二部 [检查] 颜色 吸收度应不得过0.06 《中国药典》2005年版二部 [检查] 细菌内毒素 应符合规定 《中国药典》2005年版二部 [鉴别] 化学反应 应呈正反应 《中国药典》2005年版二部 [检查] 不溶性微粒 应符合规定 《中国药典》2005年版二部 [检查] 无菌 应符合规定 《中国药典》2005年版二部 [鉴别] (1)化学反应 应呈正反应 《中国药典》2005年版二部 [鉴别] (2)化学反应 应呈正反应 《中国药典》2005年版二部及国家食品药品监督管理局《可见异物检查法补充规定》 [检查] 可见异物 应不得检出 《中国药典》2005年版二部及国家食品药品监督管理局《可见异物检查法补充规定》 [性状] 应为无色或微黄色的澄明液体 6.含量测定 维生素C的含量测定大多是基于其具有强的还原性，可被不同氧化剂定量氧化。因容量分析法简便快速、结果准确，被各国药典所采用，如碘量法，2，6-二氯靛酚法等。又相继发展了紫外分光光度法和高效液相色谱法等，适用于复方制剂和体液中维生素C的测定。 6.1 碘量法。淀粉溶液遇到碘会变成蓝紫色，这是淀粉的特性。维生素C能与蓝紫色溶液中的碘发生作用，使溶液变成无色。通过这个原理，可以用来检验一些蔬菜中的维生素C。通过消耗I2的量可以计算维生素C的含量。方法：取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定法（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色并在30s内不褪。每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6 。 6.2 2,6-二氯酚靛酚滴定法。还原型抗坏血酸能还原染料2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中，2,6-二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。因此，当用此染料滴定含有维生素C的酸性溶液时，维生素C尚未全部被氧化前，则滴下的染料立即被还原成无色。一旦溶液中的维生素C已全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所以，当溶液从无色变成微红色时即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点。如无其它杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含还原型抗坏血酸量成正比。 方法（维生素C注射剂）： 精密量取本品适量（约相当于维生素C 50mg），置100ml量瓶中，加偏磷酸-醋酸试液20ml，用水稀释至刻度，摇匀；精密量取稀释液适量（约相当于维生素C 2mg）置50ml的锥形瓶中，加偏磷酸-醋酸试液5ml，用2,6-二氯酚靛酚滴定液滴定至溶液显玫瑰红色，并持续5s不褪色；另取偏磷酸-醋酸试液5.5ml，加水15ml，用2,6-二氯酚靛酚滴定液滴定，作空白试验校正。以2,6-二氯酚靛酚滴定液对维生素C滴定度计算，即可。 6.3高效液相色谱法。取维生素C标准品约221mg，精密称定，置50mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。分别精密量取储备液适量，用流动相稀释成每1mL含0.26～0.70 m g的递度标准液，用上述的色谱条件测定。以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，得回归方程。(n=6) 6.4紫外分光光度法：在10mL比色管中依次加入pH=9.5醋酸－醋酸钠缓冲溶液2mL，1.06g／mL甲基紫2mL。在其中一个比色管中加入一定量的维生素C标准溶液，在另一个比色管中不加维生素C标准溶液；用二次蒸馏水定容，摇匀。用水作参比，1cm比色皿于265nm处，分别测定试剂空白的吸光度A1和溶液的吸光度A2，并计算⊿A=A2-Al。 6.5碘酸法：在一定量的盐酸酸性试液中加碘化钾—淀粉指示剂，用已知浓度的碘酸钾滴定。当碘酸钾滴入后即释放出游离的碘，此碘被维生素C还原，直至维生素C完全氧化后，再滴以碘酸钾液时，释放出的碘因无维生素C的作用，可使淀粉指示剂呈蓝色，即为中点，其反应如下： KIO3 + 5KI + 6HCl→6KCl + 3H2O + 3 I2 。在50ml的烧杯中，用移液管注入1%的KI0.5ml，0.5%淀粉液2ml，以及制得的样品试液5ml；再加蒸馏水至总体积10ml（加2.5毫升）。用0.001N KIO3液滴定，要一滴一滴加入，并时时摇动烧杯，至微蓝色不褪为终点（一分钟不褪为止）。记录所用KIO3液毫升数。同上法再测定3次。用各次测定的平均值，计算维生素C含量。