伊红和美蓝的化学成分是什么？
（1）伊红（水溶性）
配方：
伊红 （水溶性） 2.5-5 g
蒸馏水 500 ml
将水溶性伊红溶于蒸馏水中，然后加浓盐酸10毫升，充分搅拌，静置过夜后过滤。过滤后的沉淀用蒸馏水冲洗二次，再过滤；将沉淀物连同滤纸一起放入温箱内干燥，加95%酒精1000毫升，配成饱和液。使用前再用95%的酒精 1:1～2倍稀释，加入1～2%冰醋酸。
此方法具有染色时间快，颜色鲜艳，不容易褪色，使用寿命长等特点。
（2）伊红（醇溶性）
配方：
伊红 （醇溶性） 2.5-5g
75%酒精 1000 ml
加几滴冰醋酸至半透 美篮又称亚甲基蓝、次甲基蓝、次甲蓝、美蓝、品蓝，是一种芳香杂环化合物。CAS号：61－73－4，被用作化学指示剂、染料、生物染色剂和药物使用明状主要成分：亚甲蓝。化学式：C16H18N3ClSIUPAC
原理：
伊红美蓝培养基（eosin-methylene
blue
medium,简称EMB
medium），一般用于检测大肠杆菌。
伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。
当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。
在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。
常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。
1．瑞氏染料是由碱性染料美蓝（Methvlem blue）和酸性染料黄色伊红（Eostm Y）合称伊红美蓝染料即瑞氏（美蓝－伊红Y）染料。
2．用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用：
（1）甲醇使瑞氏染料中美蓝（M）与伊红（E）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。
甲 醇
ME（瑞氏染料）----→M+ + E-
在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。
（2）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。
3.瑞氏染液配制：
(1) 瑞氏染液配制：
瑞氏染料 830gm或1g
甲醇（AR） 500ml或600ml
○先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着。
○再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口。
○存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3个月以上为佳。
(2) 缓冲液：
●缓冲液作用：
○染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察pH值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。
○缓冲液须保持一定的pH使染色稳定，PBS的pH 一般在***~6.8，
○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使pH恒定。
●缓冲液配制（pH6.4~6.8，弱酸性）：
配方1 ： 配方2：
1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml
1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml
H2O(新鲜) 加至1000ml
置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。
