2巯基乙醇的作用是什么

因为β-ME能促使蛋白质链内和链间的二硫键发生断裂。

RPMI是Roswell Park Memorial Institute的缩写，代指洛斯维·帕克纪念研究所。RPMI是该研究所研发的一类细胞培养基，1640是培养基代号。RPMI 1640培养基含有还原剂谷胱甘肽和高浓度的维生素，效果独特。RPMI 1640 含有生物素、维生素 B12 以及 PABA，这些成分是 Eagle zui低必需培养基或 Dulbecco 改良 Eagle 培养基所不具备的。此外，该培养基之中还含有J高浓度的维生素肌醇和胆碱。

β-ME全称为β-Mercaptoethanol ，即β-巯基乙醇化学式：HOCH2CH2SH 。是一种具有特殊臭味的无色透明液体，易燃、易溶于水和醇、醚等多种有机溶剂。外观：无色透明液体，无机械杂质。

巯基乙醇有毒性，呼吸多了会中毒，滴到了手上有致命危险。

巯基乙醇：危险品，经皮肤、吞咽吸收有致命危险；刺激眼睛、呼吸道粘膜，引起慢性咽炎。水白色易流动液体，具有少许硫醇气味。

应用领域：用作增塑剂及杀虫剂，也用于染料的制造。

扩展资料：

用途：

α-巯基乙醇主要用于血清学检查凝集试验。其临床意义：当其实验值>1∶50为阳性健康搜索，布氏杆菌病符合率为93.88%。

β-巯基乙醇主要用于生产低聚合度聚氯乙烯的链转移剂，腈纶的终止剂。也可用于合成高分子材料的调聚剂、聚合催化剂、交联剂及树脂固化剂等，也可用于合成橡胶、照相、医药、油漆、纺织、金属钝化剂等行业。

β-巯基乙醇在生物实验上的意义：二硫键被打开后可以使蛋白质的四级或三级结构被破坏。由于β-巯基乙醇能够打开蛋白质的结构，它常常被用于蛋白质分析。而β-巯基乙醇也常常被用于保护蛋白质中自由的半胱氨酸巯基之间不会错误形成二硫键。

作为还原剂，2-巯基乙醇常常可以与二硫苏糖醇（DTT）或三(2-甲酰乙基)膦盐酸盐（TCEP）互换使用。β-巯基乙醇是少数几种被发现可以延长小鼠寿命的化合物。在微克量级水平上，2-巯基乙醇被观察到对实验鼠的生命具有多种可能的正面效应。

参考资料来源：百度百科-巯基乙醇

溴化乙锭（EB）具有强诱变致癌性，在人体中长期积累，通过插入DNA分子间产生染色体变异性疾病（如细胞癌变），所以建议使用一次性手套操作。或建议您的导师更换主要成分为花青素的荧光染料，不过价格一般会高十几倍。

实验中不可避免的会有一些接触，比如说胶回收、southern杂交等试验。我在硕士期间没少做实验，现在健康状况良好，日后博士研究生论文里想必还有许多这样的实验要做下去，所以偶尔接触不必惊慌。

就像希腊传说中的古代英雄一样，飞的太高太靠近太阳，翅膀上的蜡被烤化了，活活摔死，有些真理的获得是要付出相应的代价的，做这一行是要有所觉悟的，还有许多分子生物学试剂是高毒的，我大概提几个贴在后面，望实验中能注意防护。

附：

1.DEPC(焦碳酸二乙酯):闻起来香香甜甜的,可是害人不眨眼!一种强有力的蛋白质变性剂,而且怀疑是致癌剂.开瓶时将瓶子 远离你,内压可导致溅泼.操作时戴合适的手套,穿工作服,并在化学通风橱里进行.

2.PMSF(苯甲基磺酰氟):老板说是神经毒!!!是一种高强度毒性的胆碱酯酶抑制剂.它对呼吸道黏膜,眼睛和皮肤有非常大的 破坏性.可因吸入,咽下或皮肤吸收而致命.戴合适的手套和安全眼镜,始终在化学通风橱里使用.在接触到的情况下,要立即用大量的 水冲洗眼镜或皮肤,已污染的工作服丢弃掉.

3.乙腈，易挥发易燃，是一种刺激物和化学窒息剂，通风橱中远离热、火。

4.放线菌素D，是一种致畸剂和致癌剂，通风橱中操作。

5.alpha-鹅膏蕈毒环肽，具有强毒性，可能致命。

6.NN-亚甲双丙烯酰胺，有毒，影响中枢神经系统，切勿吸入粉末。

7.甲醇，有毒，能引起失明。

8.乙酸（浓的）： 可能因为吸入或皮肤吸收而受到伤害，要戴手套和护目镜，最好在化学通风橱中操作。

9.过硫酸酸铵：对粘膜和上呼吸道、眼睛和皮肤又较大危害性，吸入可致命。操作时戴手套、护目镜。始终在通风橱中操作。

10.氯化铯：可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。操作时戴手套和护目镜。

DTT: 很强的还原剂，散发难闻的气味。可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。当使用固体或高浓度储存液时，戴手套和护目镜，在通风橱中 操作。

11.甲醛：毒性较大且易挥发，也是一种致癌剂，易通过皮肤吸收，对眼睛、粘膜和上呼吸道有刺激和损伤作用。避免一如其挥发的气 雾。戴手套和护目镜。始终在通风橱中操作。远离热、火花及明火。

12.TRIzol ，对眼睛有刺激性，腐蚀皮肤。有一次不小心溅出一小滴在脸上，马上就红了，过一会儿感觉到疼，一周之后才好。如果溅上，马上用大 量的水冲洗。

大家在实验室里，接触到的化学试剂多半都有危害性，紫外灯，如果离心机不是很好的话的噪声污染，VORTEX会导致手指需要震动 ，等等，所以每个人都应该注意保护自己，而不能因为图省事或者别的什么原因而放松对安全的注意。另外就是注意规范操作，搞微生物 的尤其要注意，不要实验室感染。

13.叠氮钠，有毒，阻断细胞色素电子运送系统

14.氟化钠，有毒可致命，通风橱中操作

15.放射性物质（同位素标记时），要戴手套，护目镜，穿工作服，最好买试剂盒（如果有商品化的）

16.beta-巯基乙醇，可致命，对呼吸道、皮肤和眼睛有伤害

17.氨甲蝶呤，致癌和致畸

18.甲醛，有毒，易挥发，致癌，对眼睛和呼吸道有刺激损伤，通风橱中远离热和火

19.双丙烯酰胺，神经毒剂，效应累积

20.二甲胂酸钠，致癌，有毒

21.链霉素，致癌，引起过敏反应

22.哌啶，有毒，对眼睛和呼吸道有影响，远离热和火

23.腐胺，易燃，有腐蚀性，远离热和火

24.硫酸镍，致癌，引起遗传损伤

25.肼，有毒，能爆炸,远离热和火

Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏。

EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性。

NaCl 提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,存在于液相中。

Cβ-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除基因组DNA。CTAB 4g

NaCl 16.364 g。

1M Tris-HCl 20ml( PH8.0)。。

0.5M EDTA 8ml，先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml灭菌。

冷却后0.2-1% 2-巯基乙醇（400ul）氯仿-异戊醇（24：1）：先加96ml氯仿，再加4ml异戊醇，摇匀即可。

扩展资料：

适当的加一下热，比如50度或者60度，可以快速溶解，般这个温度对试剂的品质没有什么影响如果不是浓度太高的话。

如果浓度太高，可能冷却后又会沉淀析出来。

在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl) CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物而不沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。

2×CTAB提取缓冲液成分：2%(w/v)CTAB，100mM Tris (pH 8.0)，20mM EDTA,1.4 MNaCl,，0.2%(v/v) 还原剂(随用随加) 。

参考资料来源：百度百科——十六烷基三甲基溴化铵

使用的marker一般较为随机，有什么用什么，当然要说首选的话推荐 入DNA，因为方便估算浓度，当然有DNA微量测定仪的话这个自然不必了。

提问者重点说了“总DNA的长度”，因此大胆猜测是怕去除RNA不彻底，这个推荐您在提取液中添加RNA酶，一般万分之一浓度即可，65度时RNA酶很稳定所以不用担心。但若是为了节省，也可以将RNA酶加入回溶使用的TE中，并在回溶的一段时间后再电泳检测。

很高兴您选择这一行，做分子生物学有时候就像希腊传说中的古代英雄一样，飞的太高太靠近太阳，翅膀上的蜡被烤化了，活活摔死，有些真理的获得是要付出相应的代价的，做这一行是要有所觉悟的，还有许多分子生物学试剂是高毒的，我大概提几个贴在后面，望实验中能注意防护。

附：

1.DEPC(焦碳酸二乙酯):闻起来香香甜甜的,可是害人不眨眼!一种强有力的蛋白质变性剂,而且怀疑是致癌剂.开瓶时将瓶子 远离你,内压可导致溅泼.操作时戴合适的手套,穿工作服,并在化学通风橱里进行.

2.PMSF(苯甲基磺酰氟):老板说是神经毒!!!是一种高强度毒性的胆碱酯酶抑制剂.它对呼吸道黏膜,眼睛和皮肤有非常大的 破坏性.可因吸入,咽下或皮肤吸收而致命.戴合适的手套和安全眼镜,始终在化学通风橱里使用.在接触到的情况下,要立即用大量的 水冲洗眼镜或皮肤,已污染的工作服丢弃掉.

3.乙腈，易挥发易燃，是一种刺激物和化学窒息剂，通风橱中远离热、火。

4.放线菌素D，是一种致畸剂和致癌剂，通风橱中操作。

5.alpha-鹅膏蕈毒环肽，具有强毒性，可能致命。

6.NN-亚甲双丙烯酰胺，有毒，影响中枢神经系统，切勿吸入粉末。

7.甲醇，有毒，能引起失明。

8.乙酸（浓的）： 可能因为吸入或皮肤吸收而受到伤害，要戴手套和护目镜，最好在化学通风橱中操作。

9.过硫酸酸铵：对粘膜和上呼吸道、眼睛和皮肤又较大危害性，吸入可致命。操作时戴手套、护目镜。始终在通风橱中操作。

10.氯化铯：可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。操作时戴手套和护目镜。

DTT: 很强的还原剂，散发难闻的气味。可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。当使用固体或高浓度储存液时，戴手套和护目镜，在通风橱中 操作。

11.甲醛：毒性较大且易挥发，也是一种致癌剂，易通过皮肤吸收，对眼睛、粘膜和上呼吸道有刺激和损伤作用。避免一如其挥发的气 雾。戴手套和护目镜。始终在通风橱中操作。远离热、火花及明火。

12.TRIzol ，对眼睛有刺激性，腐蚀皮肤。有一次不小心溅出一小滴在脸上，马上就红了，过一会儿感觉到疼，一周之后才好。如果溅上，马上用大 量的水冲洗。

大家在实验室里，接触到的化学试剂多半都有危害性，紫外灯，如果离心机不是很好的话的噪声污染，VORTEX会导致手指需要震动 ，等等，所以每个人都应该注意保护自己，而不能因为图省事或者别的什么原因而放松对安全的注意。另外就是注意规范操作，搞微生物 的尤其要注意，不要实验室感染。

13.叠氮钠，有毒，阻断细胞色素电子运送系统

14.氟化钠，有毒可致命，通风橱中操作

15.放射性物质（同位素标记时），要戴手套，护目镜，穿工作服，最好买试剂盒（如果有商品化的）

16.beta-巯基乙醇，可致命，对呼吸道、皮肤和眼睛有伤害

17.氨甲蝶呤，致癌和致畸

18.甲醛，有毒，易挥发，致癌，对眼睛和呼吸道有刺激损伤，通风橱中远离热和火

19.双丙烯酰胺，神经毒剂，效应累积

20.二甲胂酸钠，致癌，有毒

21.链霉素，致癌，引起过敏反应

22.哌啶，有毒，对眼睛和呼吸道有影响，远离热和火

23.腐胺，易燃，有腐蚀性，远离热和火

24.硫酸镍，致癌，引起遗传损伤

25.肼，有毒，能爆炸,远离热和火

以下是红细胞裂解液配方：（仅供参考）

1.裂解液：的确是ACK裂解液作用更柔和些

配方：

NH4CL 8.29g

KHCO3 1.00g

Na2EDTA 37.2mg

溶于1000mL蒸馏水， pH 7.2-7.4， 效果一直很好。

注意：

（1） 裂解液如果放在冰箱里，一定要预热，37度即可。裂解期间试管也可水浴，但如果是夏天室温比较高则不必；

（2） 裂解5min后立刻离心（从所有管都混匀后计时间）；

（3） PBS离心洗涤2次；

（4） 裂解液pH值很重要，最好一次不要配多，时间长效果不好，我一般一次配100mL，

避光保存。

2.离心速度：800-1000rpm，5min

3.研磨轻柔很重要

4.培养淋巴细胞的最佳培养液是RPMI 1640，因为是原代细胞，要用10%胎牛血清。还有非常重要的一点，要想让细胞增殖得好，必须加二巯基乙醇（beta-2ME）

5.细胞密度1－2X10^6/mL

凝胶过滤和Native-PAGE测定分子量时蛋白并不变性，说明活性状态下蛋白是200kD，SDS-PAGE时由于SDS的存在，蛋白都会变性，打开成为肽链。但SDS并不能打开二硫键，因为二硫键是共价键。所以在二硫键存在的情况下蛋白是100kD。当有beta-ME时，二硫键被还原成半胱氨酸，此时分子量是40kD和60kD。综上，说明这个复合物有两种蛋白组成，分别为40kD和60kD。这两种亚基各有两份，在不同种的亚基之间由二硫键链接。下图就是一种可能的情况。

蛋白质的二级结构指的是在其一级结构的基础上进一步折叠，其中可看到的折叠形态有alpha helices, beta sheets, beta turn和一些loop结构，这些结构一起构成了蛋白质的二级结构

[实验原理]

碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。在pH值介于12.0~12.5这个狭窄的范围内,线性的DNA双螺旋结构解开而被变性,尽管在这样的条件下,共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂,但两条互补链彼此相互盘绕,仍会紧密地结合在一起。当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液恢复Ph至中性时，共价闭合环状质粒DNA的两条互补链仍保持在一起，因此复性迅速而准确，在而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开，复性就不会那么迅速而准确，它们缠绕形成网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。

[实验仪器与设备]

1.恒温培养箱 2.恒温摇床

3.台式离心机(最大转速4000rpm) 4.冷冻高速离心机

5.高压灭菌锅 6.超净工作台

7.微量移液器 8.eppendorf tupe、tip

[实验材料]

1.葡萄糖 2.三羟甲基氨基甲烷(Tris)

3.乙二胺四乙酸(EDTA) 4.氢氧化钠

5.十二烷基硫酸钠(SDS) 6.乙酸钾

7.冰乙酸 8.氯仿

9.乙醇 10.胰RNA酶

11.氨苄青霉素 12.蔗糖

13.溴酚蓝 14.酚

15.β巯基乙醇 16.盐酸

17.含pUC18质粒的大肠杆菌

附：试剂的配制

1.溶液Ⅰ

50mmol/L 葡萄糖

5mmol/L 三羟甲基氨基甲烷(Tris) Tris·HCl (pH8.0)

10mmol/L 乙二胺四乙酸(EDTA)(pH8.0)

2.溶液Ⅱ

0.4 mol/L NaOH, 2%SDS, 用前等体积混合

3.溶液Ⅲ

5mmol/L 乙酸钾 60 ml

冰乙酸 11.5 ml

水 28.5 ml

4.TE缓冲液

10mmol/L Tris·HCl

1 mmol/L EDTA(pH8.0)

5.70%乙醇(放-20℃冰箱中,用后即放回)

6.胰RNA酶

将RNA酶溶于10mmol/L Tris·HCl(pH7.5)、15mmol/L NaCl中，配成10mg/ml的浓度，于100℃加热15min,缓慢冷却至室温，保存于-20℃。

7.终止液:40%蔗糖、0.25%溴蓝酚

8.酚

[实验步骤]

(一) 提取质粒

1.将2ml含相应抗生素的LB液体培养基加入到试管中，接入含质粒的大肠杆菌，37℃振荡培养过夜。

2.取1.5ml培养物倒入微量离心管中，4000rpm，离心2min。

3.吸去培养液，使细胞沉淀尽可能干燥。

4.将细菌沉淀悬浮于100μl溶液Ⅰ中，充分混匀，室温放置10 min。

5.加200μl溶液Ⅱ(新鲜配制)，混匀内容物，将离心管放冰上5 min。

6.加入150μl溶液Ⅲ(冰上预冷)，盖紧管口，颠倒数次使混匀。

7.1200rpm，离心15 min，将上清转至另一离心管中。

8.向上清中加入等体积酚：氯仿(去蛋白)，反复混匀，12000rpm，离心5min,将上清转移到另一离心管中.

9.向上清加入2倍体积乙醇,混匀后,室温放置5-10min。12000rpm离心5min。倒去上清液，把离心管倒扣在吸水纸上，吸干液体。

10.用1ml70%乙醇洗涤质粒DNA沉淀，振荡并离心，倒去上清液，真空抽干或空气中干燥。

11.加50μl TE缓冲液，其中含有20μg/ml的胰RNA酶，使DNA完全溶解，-20℃保存。

(二)琼脂糖凝胶电泳检测DNA

[实验原理]

琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的常用方法。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应，DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方向移动。不同浓度琼脂糖凝胶可以分离从200bp至50kb的DNA片段。在琼脂糖溶液中加入低浓度的溴化乙锭(ethidum bromide ,EB)，在紫外光下可以检出 10ng的DNA条带，在电场中，pH8.0条件下，凝胶中带负电荷的DNA向阳极迁移。

琼脂糖凝胶有如下特点：

(1) DNA的分子大小 在凝胶基质中其迁移速率与碱基对数目的常用对数值成反比，分子越大迁移得越慢。

(2) 琼脂糖浓度 一个特定大小的线形DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率(u)的对数与凝胶浓度(t)成线性关系。

(3) 电压 低电压时，线状DNA片段迁移速率与所加电压成正比。但是随着电场强度的增加，不同分子量DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长，随着电压的增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。要使大于2kb的DNA片段的分辨率达到最大，所加电压不得超过5v/cm。

(4) 电泳温度 DNA在琼脂糖凝胶电泳中的电泳行为受电泳时的温度影响不明显，不同大小的DNA片段其相对迁移速率在4℃与30℃之间不发生明显改变，但浓度低于0.5%的凝胶或低熔点凝胶较为脆弱，最好在4℃条件下电泳。

(5) 嵌入染料 荧光染料溴化乙锭用于检测琼脂糖凝胶中的DNA，染料嵌入到堆积的碱基对间并拉长线状和带缺口的环状DNA,使其刚性更强,还会使线状迁移率降低15%。

(6) 离子强度 电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA电泳迁移率。在没有离子存在时(如误用蒸馏水配制凝胶，电导率最小，DNA几乎不移动，在高离子强度的缓冲液中(如误加10×电泳缓冲液)，则电导很高并明显产热，严重时会引起凝胶熔化。

对于天然的双链，常用的几种电泳缓冲液有TAE、TBE等，一般配制成浓缩母液，室温保存，用时稀释。

[实验仪器与设备]

1. 恒温培养箱 2. 琼脂糖凝胶电泳系统

3. 高压灭菌锅 4. 紫外线透射仪

[实验材料]

1.三羟甲基氨基甲烷(Tris) 2.硼酸

3.乙二胺四乙酸(EDTA) 4.溴酚蓝

5.蔗糖 6.琼脂糖

7.溴化乙锭 8.DNA marker

9.DNA样品

[实验步骤]

1.缓冲液的配制

① 5×TBE(5倍体积的TBE贮存液)

配1000ml 5×TBE:

Tris 54g

硼酸 27.5g

0.5mol/l EDTA 20ml

Ph8.0

② 凝胶加样缓冲液(6×)

溴酚蓝 0.25%

蔗糖 40%

③溴化乙锭溶液(EB) 0.5μg/ml

2.制备琼脂糖凝胶

按照被分离DNA的大小,决定凝胶中琼脂糖的百分含量。可参照下表：

琼脂糖凝胶浓度 线性DNA的有效分离范围

0.3% 5-60 kb

0.6% 1-20 kb

0.7% 0.8-10 kb

0.9% 0.5-7 kb

1.2% 0.4-6 kb

1.5% 0.2-4 kb

2.0% 0.1-3 kb

3.胶板的制备

(1) 用高压灭菌指示纸带将洗静、干燥的玻璃板的边缘(或电泳装置所皿备的塑料盘的开口)封住，形成一个胶膜(将胶膜放在工作台的水平位置上，用水平仪校正)。

(2) 配制足够用于灌满电泳槽和制备凝胶所需的电泳缓冲液(1×TBE)。准确称量的琼脂糖粉。缓冲液不宜超过锥瓶或玻璃瓶的50%容量。 在电泳槽和凝胶中务必使用同一批次的电泳缓冲液，离子强度或pH值的微小差异会在凝胶中形成前沿，从而大大影响DNA片段的迁移率 。

(3) 在锥瓶的瓶颈上松松地包上一层厚纸。如用玻璃瓶，瓶盖须拧松。在沸水浴或微波炉中将悬浮加热至琼脂糖溶解。注意：琼脂糖溶液若在微波炉里加热过长时间，溶液将过热并暴沸。应核对溶液的体积在煮沸过程中是否由于蒸发而减少，必要时用缓冲液补充。

(4) 使溶液冷却至60℃。加入溴化乙锭(用水配制成10mg/ml的贮存液)到终浓度为0.5ug/ml，充分混匀。

(5) 用移液器吸取少量琼脂糖溶液封固胶模边缘，凝固后，在距离底板0.5-10mm的位置上放置梳子，以便加入琼脂糖后可以形成完好的加样孔。如果梳子距玻璃板太近，则拔出梳子时孔底将有破裂的危险，破裂后会使样品从玻璃板之间渗透。

(6)将剩余的温热琼脂糖溶液倒入胶模中。凝胶的厚度在3-5mm之间。检查一下梳子的齿下或齿间是否有气泡。

(7)在凝胶完全凝固后(于室温放置30-45分钟) ，小心移去梳子和高压灭菌纸带，将凝胶放入电泳槽中。

低熔点琼脂糖凝胶及浓度低于0.5%的琼脂糖凝胶应冷却至4℃，并在冷库中电泳。

(8)加入恰好没过胶面约1mm深的足量电泳缓冲液。

4.加样

DNA样品与所需加样缓冲液混合后，用微量移液器，慢慢将混合物加至样品槽中。此时凝胶已浸没在缓冲液中。 一个加样孔的最大加样量依据DNA的数量及大小而定，一般为20-30μl样品。

已知大小的DNA标准，应同时加在凝胶的左凝胶的左侧和右侧孔内。确定未知DNA的大小。测量未知DNA的大小时，要所有样品都用相同的样品缓冲液。

5.电泳

在低电压条件下,线形DNA片段的迁移速度与电压成比例关系,但是,在电场增加时,不同相对分子质量的DNA片段泳动度的增加是有差别的。因此，随着电压的增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围随之减小。为了获得电泳分离DNA片段的最大分辨率，电场强度不应高于5V/cm。当溴酚蓝指示剂移到到距离胶板下沿约1-2cm处，停止电泳。