乙醇沉淀损失

分子量多少区别和溶水区别。

1、分子量多少区别。乙醇醇沉的浓度越低，一般情况得到的沉淀物中多糖的分子量越大，反之越小。

2、溶水区别。乙醇醇沉的浓度大的时候其多糖分子不易溶于水，浓度小易溶于水。

一般操作过程是：将中药水提液浓缩至1︰1～1︰2（ml︰g），药液放冷后，边搅拌边缓慢加入乙醇使达规定含醇量，密闭冷藏24～48h，滤过，滤液回收乙醇，得到精制液。操作时应注意以下问题：

①药液应适当浓缩，以减少乙醇用量。但应控制浓缩程度，若过浓，有效成分易包裹于沉淀中而造成损失。

②浓缩的药液冷却后方可加入乙醇，以免乙醇受热挥发损失。

③选择适宜的醇沉浓度。一般药液中含醇量达50％～60％可除去淀粉等杂质，含醇量达75％以上大部分杂质均可沉淀除去。

④慢加快搅。应快速搅动药液，缓缓加入乙醇，以避免局部醇浓度过高造成有效成分被包裹损失。

⑤密闭冷藏。可防止乙醇挥发，促进析出沉淀的沉降，便于滤过操作。

⑥洗涤沉淀。沉淀采用乙醇（浓度与药液中的乙醇浓度相同）洗涤可减少有效成分在沉淀中的包裹损失。

水提醇沉法的原理是：水提液中一些大分子亲水性杂质难溶于一定浓度乙醇，在水提液中加入适量乙醇后使杂质沉淀除去。

水提醇沉法（水醇法）是指在中药水提浓缩液中，加入乙醇使达不同含醇量，某些药物成分在醇溶液中溶解度降低析出沉淀，固液分离后使水提液得以精制的方法。

醇沉法的特点：

1、醇沉是以乙醇沉淀法去除提取液中杂质的方法。它去除杂质，减少用药量，达到精制、便于制剂的特点，使得由原来的中药汤药制成中成药得以进行；

2、乙醇沸点适中（78 ℃），可回收后反复使用，其本身还具有杀菌作用，经过乙醇处理的物料不易发霉变质；

3、对于药效成分不甚清楚和作用机制不明确的中药复方，不失为一种简单适用的提取方法。

但是，醇沉的使用有一定限制。例如，固体制剂不宜采用，因醇沉时将多糖等除去，酵液回收乙醇浓缩后又加数倍量的淀粉、糊精等辅料方能成型，这会使成本增加。

把酶切体系先加入等体积氯仿抽提，然后离心去掉氯仿，取水层，加入2倍体积的冷乙醇，混匀放入低温冰箱进行醇沉。然后再离心吸掉乙醇晾干，用纯水溶解就行了

需要注意的就是醇沉之后的离心，因为连接体系一般都是很小的10ul左右，所以沉淀下来的DNA是肉眼根本看不到的，所以可以在离心的时候记住EP管放的方向，那样就能猜出沉淀在管的什么位置.吸乙醇的时候要小心避开。

(一) 工艺依据：通常含醇量 50~60%时淀粉、多糖沉淀。60%或70%以上，除鞣质、树脂外，大部分被除掉。

(二) 操作

中药，加水煎2~3次，过滤，滤液浓缩至1：1~1：2（ml：g）或相对密度1.08-1.15，

加适量乙醇，使含醇量达一定要求（50~60%，60~70%）冷藏（10~48小时），滤过。

(三) 影响因素

1.醇沉浓度的选择

一般45%醇沉可去淀粉、糊精等无效成分，50%醇沉后制颗粒、片、胶囊较多；60~70%醇沉制合剂、口服液，澄清度好。50~60%、70~80%二次醇沉多用在注射液、滴眼液等，而60~80%的沉淀经丙酮等洗涤后，可得多糖。

2.所用乙醇浓度的选择

根据经验，乙醇的浓度与药液需要达到的乙醇浓度之间差20%～25%最佳。浓度太低，乙醇用量大浪费，回收不方便，且沉淀成絮状，难以下沉，效果差；浓度太高，得到的醇提液较少，沉淀中含有大量的有效物质，且加入高浓度乙醇，易造成局部浓度过高，形成大块沉淀，将有效成分包裹，随沉淀除去。

3.药液浓度

药液浓缩后的相对密度如果太小，由于药液比较稀，形成的沉淀不易聚结，难以下沉，且浪费乙醇；如相对密度太大，药液因长时间煎煮浓缩，易使苷类、萜类、维生素等成分破坏，且造成淀粉糊化，醇沉时形成大块，包裹有效成分。

4.药液温度

药液温度高，遇冷的乙醇后，骤冷易聚结成团状沉淀，且沉淀增长很快，防碍了有效物质的提出，故效果不理想；药液温度低，相对难以导致沉淀聚结，效果最佳。一般浓缩后放冷至室温。

5.加醇方式

加醇应采用慢加快搅的方法，以使加入的乙醇迅速分散，避免局部浓度过高，形成大块沉淀。且应按一个方向搅动，以免使药液乳化，不易使沉淀下沉分层。如用来醇沉的乙醇浓度不等，应按浓度从小到大的顺序加入。

(四)操作要点

1 药液浓缩：减压低温浓缩；浓缩前后可调节pH，以保留有效成分，如生物碱在酸性下溶解；浓缩程度适宜，浓度太高，易使水溶性低的成分损失（苷元、香豆精）。

2 加醇方式：慢加快搅逐步提高醇浓度。分次醇沉或以梯度递增方式逐步提高乙醇浓度的方法进行醇沉（有利于除杂，减少杂质对有效成分包裹）。

3 醇用量的计算

乙醇用量计算公式: C2*(V+X)=C1*X

对同一品种可用回收乙醇作第二次沉淀，注意回收乙醇浓度有变化，一般在80~85%，精馏达90%以上，须计算后加入或再补加浓乙醇。

4 冷藏与处理：含醇药液慢慢降至室温时，移至冷库于5~10℃静置冷藏（不能结冰，杂质易停留在晶格中不易沉淀）。滤过时，吸取上清夜滤过，下层沉淀慢慢滤过。

6.醇沉是很实用的技术，沉淀会包裹有效成分，增加洗涤可增加有效成分的转移率。

7.与之相适应的纯水法除淀粉和粘液质等，很少用，不太合理。