细胞he染色时没有用到二甲苯为什么还要用酒精脱水
染色流程(1)二甲苯(Ⅰ) 15min (2) 二甲苯(Ⅱ) 15 min (3)100%乙醇(Ⅰ) 5min (4)100%乙醇(Ⅱ) 5 min (5)80%乙醇 5min (6)蒸馏水 5 min (7)苏木精液染色 5 min (8 ) 流水稍洗去苏木精液 1-3 s (9) 1%盐酸乙醇 1-3 s (10) 稍水洗 10-30 s (13)蒸馏水过洗 1-2 s (14) 0.5%伊红液染色 1-3 min (15) 蒸馏水稍洗 1-2 s (16) 80%乙醇稍洗 1-2 s (17) 95%乙醇(Ⅰ) 2-3 s (18) 95%乙醇(Ⅱ) 3-5 s (19) 无水乙醇 5-10 min (20) 石炭酸二甲苯 5-10 min (21) 二甲苯(Ⅰ) 2 min (22) 二甲苯(Ⅱ) 2 min (23) 二甲苯(Ⅲ) 2 min (24) 中性树胶封固 注:①第(10)、(11)步可省去,(12)步冲水时间需延长至20-30min.②第(20)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇.* 冷冻切片HE染色步骤:(1)冰冻切片固定 10~30 s (2)稍水洗 2 s (3)苏木精液染色(60℃) 30~60 s (4)流水洗去苏木精液 10 s (5)1%盐酸乙醇 3 s (6)稍水洗 2 s (7)促蓝液返蓝 10 s (8)流水冲洗 15~30 s (9)0.5%曙红液染色 30~60 s (10)蒸馏水稍洗 2 s (11)80%乙醇 2 s (12)95%乙醇 2 s (13)无水乙醇 2 s (14)石炭酸二甲苯 3 s (15)二甲苯(Ⅰ) 3 s (16)二甲苯(Ⅱ) 3 s (17)中性树胶封固.注:第(14)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇.染色结果:细胞核蓝色,胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色.4.12 切片脱水透明 切片经HE染色后,要彻底脱水透明,才能用中性树胶封盖.如果脱水不彻底,封片后呈白色雾状,镜下观察模糊不清,且容易褪色.切片1-2级无水乙醇脱水,也可使用石碳酸二甲苯进行脱水.石碳酸有较强脱水能力,但长时间可使切片脱色,因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去.
HE染色步骤:
1、脱蜡,脱蜡二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10分钟,事先准备好盖玻片。
2、覆水,100%(Ⅰ、Ⅱ)、90%、80%、70%酒精各5分钟,自来水冲洗5分钟×3。
3.、苏木精染色5分钟,根据染色情况,可以适当增加或减少染色时间,流水冲洗。
4、5%乙酸分化1分钟,流水冲洗,用吸管滴加乙酸,布满玻片上的组织即可,分化后颜色变浅了一些,成为蓝色。
5、返蓝:返蓝液,实验室没有,也可不用。
6、伊红染色1分钟,根据染色情况,可以适当增加或减少染色时间,流水冲洗。
7、脱水:70%、80%、90%、100%酒精各10秒,二甲苯1分钟,可以在通风橱自然晾干再封
片,约5分钟左右。
8、滴上中性树胶,封片,用吸管滴上一滴即可,尽量少滴,但压片后要将组织全部覆盖完,避免中间有气泡。
扩展资料:
he染色原理:
易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia );而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性(neutrophilia)。
构成组织内蛋白质的氨基酸的种类很多,它们有不同的等电点。在普通染色法中,染色液的酸碱度为pH6左右,细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色,这些物质称为嗜碱性。
而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色,这些物质称为嗜酸型。如果改变染色液的酸碱度,pH值升高时,则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性;pH值降低时,原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。
所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。脱氧核糖核酸(DNA)两条链上的磷酸基向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。
参考资料来源:百度百科—he染色
实验室常用的二甲苯相关试剂
首先,实验室应该宽敞,有足够空间、空气流通,当然不能缺少换气扇,这能极大减少二甲苯蒸汽造成的伤害。再则组织及切片透明容器应密封,封片应在通风柜内进行,封片应在通风处放置一段时间后再阅片。而更换试剂时,也应在通风柜内进行,并且废液不能倒入下水道,智能倒在指定地点或深埋,过程中最好戴手套,避免手与试剂接触,若不慎沾染了二甲苯时应及时除掉。包埋后的脱水盆尽量不用二甲苯浸泡,改用清水煮沸。
在病理室工作的人员也应定期进行体检,并且,计算淋巴细胞有助于免疫机能监测。对疑似中毒者应作休息或调离岗位处理。由于二甲苯不仅有毒且极易燃烧,使用时须小心。放置二甲苯的地方也要通风,远离火源、电源及可能有明火的地方。
为防止意外,实验室也应配置1211干粉灭火器,且需要定期更换,一旦失火立即用其灭火。如手头没有灭火器也可用棉被沙土等覆盖,造成隔氧层,使火熄灭,切忌用水。二甲苯毒害大,工作室人员须注意,安全使用二甲苯。
答:水泥染色剂分为水性水泥地面染色剂和油性水泥地面染色剂。水性的水泥染色剂无毒无害,低碳节能环保,是工业地坪、商业地坪的理想选择。但水性水泥地面染色剂不能采用氧化铬绿。因为氧化铬绿是有毒的。纳路特彩色密封固化剂就属于水性水泥染色剂。纳路特也承诺在做水泥地面染色剂时,绝不使用氧化铬绿。另一种是水泥染色剂,油性水泥地面染色剂需要用二甲苯、丙酮和天拿水做溶剂。这些物质挥发性极强,是雾霾天气的主要元凶,而且这些物质对人体健康危害也较大。所以,不言而喻,水性水泥染色剂才是理想的选择!
水泥地面染色剂施工方法?
答:水泥地面染色剂施工方法,我们以纳路特水泥染色剂为例来加以说明:
纳路特水泥地面染色剂施工方法如下:
纳路特彩色密封固化剂Nano-1005
1、基面处理:根据具体情况进行适当处理,如除去养护剂、油渍、灰尘、建筑浮浆、墙壁残留物及去除遗留在基础表面上的松散材料。
2、用带有30,100目,300目树脂磨片的研磨机进行打磨(加水湿磨)。视地面情况分别研磨3-5遍。要将地面尽量的处理平整,均匀,地面越平整,后期的染色效果越理想。
3、地面干燥后(一般让地面晾干一个晚上),喷洒纳路特彩色聚碳硅密封固化剂于地面上,用尘推推均匀,一直到纳路特彩色聚碳硅密封固化剂不流动为止,且保证地面的对材料的吸收尽量一致。
4、地面干燥后(一般让地面晾干一个晚上,十八小时以上,地库湿度大,可能需
要更长的时间),用高速抛光机带3号兽毛垫干抛地面一遍。(如果没有高速抛光机,可用研磨机带3M黑垫干抛一遍)。然后用1000目软磨片干磨地面。
5、用滚筒滚涂一遍纳路特彩色聚碳硅密封固化剂于地面上,晾干。
6、地面干燥后(一般让地面晾干一个晚上,十八小时以上),用高速抛光机带3号兽毛垫干抛地面。(如果没有高速抛光机,可用研磨机分别带3M黑垫干抛)。
具体又分为脂肪烃(如200号溶剂汽油、煤油)和芳香烃(如苯、甲苯、二甲苯、200号煤焦溶剂等)。
酯类溶剂(如醋酸乙酯、醋酸丁酯、醋酸戊酯等);
酮类溶剂(丙酮、丁酮、环戊酮、甲基异丁酮等);
醇类溶剂(甲醇、乙醇、丁醇等);
醇醚类溶剂(乙二醇-乙醚、乙二醇-丁醚、二乙二醇-乙醚等)。
一、实验步骤:
(1)样品制备:对于贴壁生长细胞,胰酶消化,调整细胞浓度约1×105/ml,滴加于盖玻片上(置于6孔板中),培养相应时间后,取出细胞爬片,用PBS 洗涤3次。
(2)样品固定:95%乙醇固定20min,PBS洗涤2次,每次1min。
(3)染核:苏木素染液染色2-3min,自来水洗涤。
(4)分色:镜下观察,若细胞核染色过深,用1%盐酸酒精溶液分色数秒,自来水洗涤。
(5)染胞质:浸入伊红染液染色1min,自来水洗涤。
(6)吹干或自然晾干细胞 爬片后,中性树胶封片。
若细胞用4%多聚甲醛固定,则染色时间相应延长,苏木素染色12-15min,伊红5min即可。
二、注意事项:
1、染色时调节pH值很重要。如果组织块在福尔马林中固定时间长,组织酸化而影响细胞核着色。因此,要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min,这样可以使细胞核着色较深。染伊红时胞浆着色不佳,可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
2、切片染苏木精后,分色这一步是关键,应在显微镜下控制进行,一般以细胞核染色清楚(晰)而细胞质基本无色为佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅,应重新染色后再行分色。
3、切片经酒精脱水后,入二甲苯时可出现白色不透明状态,此为脱水不彻底,应将切片退回无水酒精,更换酒精、二甲苯,以求彻底脱水与透明。
4、在染色过程中不要让切片干燥,以免切片收缩、变形,影响神经元形态。
5、切片从二甲苯取出或进入二甲苯前,切片周边均应擦干净或吸干多余水分。
6、最后封固时,要用中性树脂,防止日后褪色,盖片要选大于组织块的面积,如漏出一部分不久将会褪色,所用树脂浓度要适当,树脂封固时不能有气泡。
扩展资料
一、细胞核染色原理:
苏木精为碱性天然染料,可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA,在DNA的双螺旋结构中,两条核苷酸链上的磷酸基向外。
使DNA双螺旋的外侧带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精碱性燃料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。
二、细胞浆染色原理:
细胞浆内主要成分是蛋白质,为两性化合物、细胞浆的染色与pH值有密切关系,当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时,胞浆对外不显电性,此时酸或碱性染料不易染色。
当pH调到6.7-6.8时,大于蛋白质的等电点pH值,表现酸性电离,而带负电荷的阴离子,可被带正电荷的染料染色,现时胞核也被染色,核和胞浆难以区分。因此必须把pH调至胞浆等电点以下,在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷(阳离子),就可被带负电荷(阴离子)的染料染色。
伊红Y是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷(阳离子)结合而使细胞浆染色,细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织,嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。
参考资料来源:百度百科-he染色
HE染色是一种组织病理的染色方法,通过这个染色可能明确的区分出组织以及细胞的结构,才可能在显微镜下观察组织以及细胞的形态。这在病理诊断中是最常用的染色方法,通过染色可以让人体的组织在显微镜下显示得更清楚。
染色步骤:
石蜡包埋的组织切片必须经过脱蜡水洗处理才能染色,让水溶性染料渗入组织中,含蜡的组织切片无法进行任何染色。
所以,在染色前必须用二甲苯或替换剂进行彻底脱蜡,经过乙醇洗后,再用水洗。即石蜡组织切片→二甲苯→乙醇(无水乙醇,95%,80%)→水。人们通常把这个过程叫做切片脱蜡至水。脱蜡至水是染色前的必须完成的基本步骤。
以上内容参考 百度百科-HE染色
1、1蜡,脱蜡二甲苯I、水,百分之百,百分之九十,百分之八十,百分之七十酒精各5分钟,自来水冲洗十五分钟。
2、苏木精染色5分钟根据染色情况,可以适当增加或减少染色时间,流水冲洗。
3、百分之五乙酸分化1分钟,流水冲洗,用吸管滴加乙酸,布满玻片上的组织即可,分化后颜色变浅了一些,成为蓝色。
4、返蓝,返蓝液,实验室没有,也可不用。
5、伊红染色1分钟,根据染色情况,可以适当增加或减少染色时间,流水冲洗。
6、脱水:,百分之七十、百分之八十、百分之九十、百分之百酒精各10秒,二甲苯1分钟,放在通风橱自然晾干再封片,约5分钟左右。
7、滴上中性树胶,封片,用吸管滴上一滴即可,尽量少滴,压片后要将组织全部覆盖完避免中间有气泡。